一种测定栀子药材中成分含量的方法

本发明涉及中药检测领域，具体涉及一种测定栀子药材中成分含量的方法。

背景技术：

1、中药中含有许多化学成分，其特点在于多种成分协同发挥作用，仅对单一成分的含量进行规定并不能科学、全面的反应药材质量。因此，采用多指标含量测定对中药进行质量控制已成为共识。

2、“一测多评”法(quantitative analysis of multi-components by single-marker，qams)是由中国中医科学院王智民等人于2006年提出的多指标质量控制方法。此方法根据待测成分的结构与理化性质，选择一种易得、价格低廉、稳定的对照品作为内标，进行色谱条件优化及方法学验证，建立内标与对应的待测成分含量的关系，实现仅使用单个对照品进行多种成分的定量分析，解决了传统含量测定时需要多种对照品，分离难度大，货源紧缺、价格高昂的问题。

3、栀子gardenia jasminoides ellis为茜草科植物栀子的干燥成熟果实，是我国传统中药，也是国家卫生部颁布的第一批药食两用药材之一。栀子入药始载于《神农本草经》，有清热燥湿、泻火除烦、凉血解毒的功效，常用于目热赤痛，胸心大小肠大热、胃中热气等症。栀子中富含环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、二萜类成分，为栀子发挥临床药效提供的物质基础。山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、京尼平为环烯醚萜类成分，绿原酸为有机酸类成分，芦丁为黄酮类成分，西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ、西红花苷ⅲ为二萜类成分。因此，通过测定以上12种成分的含量对栀子的质量控制具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种测定栀子药材中成分含量的方法，该方法检测结果准确，可以降低检测成本和检测时间，减少工作量，便于对栀子药材进行质量控制和评价，简单、高效和经济。

2、为了实现上述目的，本发明一方面提供一种测定栀子药材中成分含量的方法，该方法测定的栀子药材中成分包括山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ；

3、该方法包括以下步骤：

4、(1)配制混合对照品溶液：采用甲醇水溶液将山栀苷对照品、京尼平苷酸对照品、去乙酰车叶草苷酸甲酯对照品、羟异栀子苷对照品、绿原酸对照品、京尼平龙胆双糖苷对照品、栀子苷对照品、京尼平对照品、芦丁对照品、西红花苷ⅰ对照品、西红花苷ⅱ对照品和西红花苷ⅲ对照品溶解配制混合对照品溶液；

5、(2)配制供试品溶液：称取栀子药材粉末，加入甲醇水溶液，称定重量，超声处理，然后加入甲醇水溶液补足超声处理过程中损失的重量，过滤所得滤液即为供试品溶液；

6、(3)含量测定方法：将步骤(1)配制的混合对照品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱仪测定，根据各成分的峰面积计算混合对照品溶液中非内标成分山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ相对内标物栀子苷的相对校正因子fs/i；然后将步骤(2)配制的供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录供试品溶液中各成分的峰面积，按照如下公式计算供试品溶液中各成分的浓度：

7、c内标＝a内标*cs/as；

8、c＝fs/i*a*c内标/a内标；

9、其中，a内标为供试品溶液测得的内标物的峰面积，c内标为供试品溶液中内标物的浓度或重量，as为混合对照品溶液测得的内标物的峰面积，cs为混合对照品溶液中内标物的浓度或重量；a为供试品溶液测得的非内标成分的峰面积，c为供试品溶液中非内标成分的浓度或重量。

10、优选地，所述甲醇水溶液的浓度为50-70％。

11、优选地，步骤(1)中，混合对照品溶液中，山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ的浓度分别为40～60μg/ml、0.4～0.8mg/ml、10～30μg/ml、90～110μg/ml、30～50μg/ml、0.1～0.4mg/ml、0.4～0.8mg/ml、1～4μg/ml、40～80μg/ml、0.2～0.6mg/ml、20～60μg/ml和20～60μg/ml。

12、优选地，步骤(1)中，混合对照品溶液中，山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ的浓度分别为45～55μg/ml、0.5～0.7mg/ml、15～25μg/ml、95～105μg/ml、35～45μg/ml、0.2～0.3mg/ml、0.5～0.7mg/ml、1.5～2.5μg/ml、50～70μg/ml、0.3～0.5mg/ml、30～50μg/ml和30～50μg/ml。

13、优选地，步骤(2)中，栀子药材的重量和甲醇水溶液的体积比为1：125g/ml。

14、优选地，步骤(2)中，超声处理的条件包括：温度为20～30℃，时间为20-40min。

15、优选地，步骤(3)中，相对校正因子fs/i的计算方法如下：以栀子苷为内标物，根据公式fs/i＝ai/as计算对照品溶液中非内标成分山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ相对内标物栀子苷的相对校正因子fs/i；其中，ai为对照品溶液测得的非内标成分的峰面积，as为对照品溶液测得的内标物栀子苷的峰面积。

16、优选地，步骤(3)中，山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ相对内标物栀子苷的相对校正因子依次为1.07～1.13、1.22～1.27、1.10～1.17、0.85～0.88、2.12～2.20、0.60～0.62、1.35～1.38、0.94～0.96、2.64～2.74、5.34～5.56、4.96～5.16。

17、优选地，高效液相色谱仪的色谱条件包括：进样量为0.5～2μl，流速为0.25～0.35ml/min，温度为30～45℃，以乙腈为流动相a，流动相b为0.1％甲酸水溶液或0.5％甲酸水溶液进行梯度洗脱；0～5min，检测波长为238nm；5～6min，检测波长为325nm；6～10min，检测波长为238nm；10～14min，检测波长为254nm；14～26min，检测波长为440nm。

18、优选地，梯度洗脱具体包括如下程序：0～3min，流动相a的体积百分比为6％～11％；3～8min，流动相a的体积百分比为11％～19％；8～14min，流动相a的体积百分比为19％～23％；14～18min，流动相a的体积百分比为23％～38％；18～22min，流动相a的体积百分比为38％～78％；22～26min，流动相a的体积百分比为78％～90％。

19、与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下优点：

20、(1)本发明建立了一种栀子药材中多成分含量的测定方法，该方法准确、可靠，适用于栀子药材中多成分的含量测定，有利于栀子药材及相关制剂的质量控制，且本方法检测灵敏度高，稳定性好，操作简便，易于掌握；

21、(2)本发明所述的测定方法以栀子苷作为内标物计算栀子药材中山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ及西红花苷ⅲ相对内标物栀子苷的的相对校正因子，并用校相对正因子计算山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、羟异栀子苷、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、京尼平、芦丁、西红花苷ⅰ、西红花苷ⅱ和西红花苷ⅲ在栀子药材中的含量，方法中山栀苷、羟异栀子苷、西红花苷ⅲ三个对照品价格昂贵，采用本发明所述的测定方法可以大幅度降低检测成本和检测时间，减少工作量，提高效率。