一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法

本发明涉及植物组织培养，尤其涉及一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法。

背景技术：

1、人参(panaxginseng c.a.mey.)为五加科植物。人参干燥根和根茎是一种名贵药材，被誉为“药中之王”。《神农本草经》中记载了“人参，味甘微寒，主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目开心智，久服轻身延年。采根竹导刮暴干，无令见风。人形皆具者能做儿啼”。人参为“大补元气之要药”，后世主要用其“大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血、安神益智”之功效。现代医学证明，人参不仅能优化心脑血管、中枢神经和内分泌系统，还可以提升人类的智力和体能。

2、目前，各地市场人参种类繁多，按照人参生长的环境大致可分为两类：林下参与栽培人参。林下参主要指林下山参，包括野生人参和移山参；栽培人参包括园参及非林地人参。我国人工栽培人参已有一段历史，但发展一直很缓慢，究其原因，一是人参仅在种植后第三年才能开花，而发育成根也需要在第五年才能完成，这意味着人参的正常栽培到收获期的时间比其他作物长5倍。其二是我国颁布了退耕地还林地的条款，且种植人参的土地在逐年缩小，导致人参的产量逐年降低。其三，人参地不能连续种植，种植人参需要更大的投入和更持久的收获期。因此，寻找一种新型人参种植方式具有重要意义。

3、愈伤组织(callus)指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。愈伤组织和悬浮培养物承载着整株植物的全部遗传信息，具有次生代谢产物生物合成的全能性。现在越来越多的自然栖息地正遭到快速破坏，离体生物技术可能有助于减缓濒危物种的灭绝。

4、人参是一种名贵中药材，市场对人参的需求与人参种植的困难之间的矛盾刺激着人参组织培养技术的发展。因此，本发明通过人参种胚萌发出的子叶进行愈伤组织诱导，并通过人参愈伤组织的大规模培养生产解决人参资源短缺的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，解决目前栽培人参发展缓慢、种植周期较长的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

4、s1、人参种子春化后进行催芽；

5、s2、将s1中催芽后的人参种子消毒，然后置于培养基中培养，得人参无菌苗；

6、s3、取s2中人参无菌苗的子叶组织，消毒后切段，接种到人参愈伤组织诱导培养基中，培养得到人参愈伤组织；

7、s4、将s3中的人参愈伤组织切块，接种到丛生芽诱导培养基中，得到人参丛生芽。

8、优选的，s1中所述春化是将人参种子在3～5℃的环境下放置2～4个月；所述催芽是将人参种子与潮湿土壤混匀后密封，在24～26℃的温度下放置6～8d。

9、优选的，s2中所述培养基为蛭石；所述培养的温度为23～25℃，培养的时间为14～16d。

10、优选的，s3中所述切段的长度为0.5～1cm；所述人参愈伤组织诱导培养基以ms培养基为基础，包括如下浓度的组分：iaa 1.0～2.0mg/l、2,4-d0.5～2.0mg/l、tdz 0.3～0.8mg/l、琼脂6～8g/l、蔗糖30～50g/l；所述培养是在23～27℃下避光培养4～7周。

11、优选的，s4中所述切块的大小为0.3～0.5cm×0.3～0.5cm×0.1～0.3cm；所述丛生芽诱导培养基以ms培养基为基础，包括如下浓度的组分：6-ba 2.0～4.0mg/l、naa 0.1～0.7mg/l、zt 1.0～1.5mg/l、琼脂6.5～7.5g/l、蔗糖45～55g/l；所述丛生芽诱导培养基的ph为5.8～6.0；所述培养在光照和黑暗下交替，光照时间为15～17h，黑暗时间为7～9h，光照强度为2500～3000lx，温度为23～25℃，湿度为60～75％，时间为45～55d。

12、本发明还提供了一种直接诱导人参子叶丛生芽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

13、(1)人参种子春化后进行催芽；

14、(2)将(1)中催芽后的人参种子消毒，置于培养基中培养；

15、(3)待种子长出完整根茎叶后，弃去根、茎、叶，切下种子基部，并将种子基部插入丛生芽培养基中，培养得到丛生芽。

16、优选的，(1)中所述春化是将人参种子在3～5℃的环境下放置2～4个月；所述催芽是将人参种子与潮湿土壤混匀后密封，在24～26℃的温度下放置6～8d。

17、优选的，(2)中所述培养基为蛭石；所述培养的温度为23～25℃，培养的时间为14～16d。

18、优选的，(3)中所述丛生芽诱导培养基以ms培养基为基础，包括如下浓度的组分：6-ba2.0～4.0mg/l、naa 0.1～0.7mg/l、zt 1.0～1.5mg/l、琼脂6.5～7.5g/l、蔗糖45～55g/l；所述丛生芽诱导培养基的ph为5.8～6.0；所述培养在光照和黑暗下交替，光照时间为15～17h，黑暗时间为7～9h，光照强度为2500～3000lx，温度为23～25℃，湿度为60～75％，时间为55～65d。

19、有益效果：

20、本发明通过愈伤组织培养技术利用人参子叶组织成功培养了人参丛生芽，缩短了人参的生长周期，解决了目前栽培人参发展缓慢，种植周期较长的问题，为提高人参产量和质量奠定了基础。

技术特征：

1.一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，其特征在于，s1中所述春化是将人参种子在3～5℃的环境下放置2～4个月；

3.如权利要求2所述的一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，其特征在于，s2中所述培养基为蛭石；所述培养的温度为23～25℃，培养的时间为14～16d。

4.如权利要求3所述的一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，其特征在于，s3中所述切段的长度为0.5～1cm；

5.如权利要求4所述的一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，其特征在于，s4中所述切块的大小为0.3～0.5cm×0.3～0.5cm×0.1～0.3cm；

6.一种人参子叶丛生芽直接诱导的方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的一种直接诱导人参子叶丛生芽的方法，其特征在于，(1)中所述春化是将人参种子在3～5℃的环境下放置2～4个月；

8.如权利要求7所述的一种直接诱导人参子叶丛生芽的方法，其特征在于，(2)中所述培养基为蛭石；所述培养的温度为23～25℃，培养的时间为14～16d。

9.如权利要求7所述的一种直接诱导人参子叶丛生芽的方法，其特征在于，(3)中所述丛生芽诱导培养基以ms培养基为基础，包括如下浓度的组分：6-ba 2.0～4.0mg/l、naa 0.1～0.7mg/l、zt 1.0～1.5mg/l、琼脂6.5～7.5g/l、蔗糖45～55g/l；所述丛生芽诱导培养基的ph为5.8～6.0；所述培养在光照和黑暗下交替，光照时间为15～17h，黑暗时间为7～9h，光照强度为2500～3000lx，温度为23～25℃，湿度为60～75％，时间为55～65d。

技术总结本发明提供了一种人参子叶愈伤组织诱导及快速增殖的方法，属于植物组织培养技术领域。包括以下步骤：S1、人参种子春化后进行催芽；S2、将S1中催芽后的人参种子消毒，然后置于培养基中培养，得人参无菌苗；S3、取S2中人参无菌苗的子叶组织，消毒后切段，接种到人参愈伤组织诱导培养基中，培养得到人参愈伤组织；S4、将S3中的人参愈伤组织切块，接种到丛生芽诱导培养基中，得到人参丛生芽。本发明通过愈伤组织培养技术成功培养了人参丛生芽，缩短了人参的生长周期，为提高人参产量和质量奠定了基础。技术研发人员：康传志,郭兰萍,吴得华,王红阳,杨健,王升,彭政受保护的技术使用者：中国中医科学院中药研究所技术研发日：技术公布日：2024/9/2