一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法

本发明属于医药，具体涉及一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法。

背景技术：

1、抑郁症，是一种情感性精神障碍或心境障碍性疾病，其主要表现为显著而持久的情绪低落，严重时可能存在自伤和自杀行为。

2、目前抑郁症的治疗方案一般是依赖抗抑郁药物，但现有的抗抑郁药物存在起效慢和副作用大等问题，而且部分抑郁症患者对抗抑郁药物不敏感。

3、研究表明，小胶质细胞介导的中枢炎症反应是抑郁症发生和发展的重要因素，抑制小胶质细胞活化，能够有效降低抑郁症患者脑内的炎症水平，并改善抑郁症患者的抑郁样行为。

4、鉴于此，设计一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，以研究出小胶质细胞在抑郁症中的活化机制，为抗抑郁药物的良性发展奠定理论基础。

技术实现思路

1、为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，具有对于小胶质细胞在抑郁症中的活化机制研究较为准确，能够为抗抑郁药物的良性发展奠定理论基础的特点。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：

3、s1：构建小鼠炎症抑郁模型；

4、s2：通过糖水偏爱实验、悬尾实验和强迫游泳实验评价步骤s1中构建的模型的抑郁样行为，保留出现抑郁行为的模型；

5、s3：收集步骤s2中保留的出现抑郁行为的模型的海马组织样本；

6、s4：针对步骤s3中收集的出现抑郁行为的模型的海马组织样本进行实时荧光定量pcr检测、免疫荧光检测和蛋白质免疫印迹检测，评价模型海马组织样本的小胶质细胞的状态；

7、s5：小鼠海马脑区定位注射靶向小胶质细胞敲低usp22的腺相关病毒；

8、s6：定位注射两周后，重复步骤s1-s4；

9、s7：构建bv2小胶质炎症细胞模型；

10、s8：针对步骤s7中构建的bv2小胶质炎症细胞模型进行蛋白质免疫印迹检测，评价bv2小胶质炎症细胞模型的小胶质细胞的状态；

11、s9：比较步骤s4、s6和s8中小胶质细胞的状态，确定小胶质细胞在抑郁症中活化机制。

12、进一步的，所述步骤s1中，小鼠炎症抑郁模型构建的具体步骤包括：

13、s11：将脂多糖溶于生理盐水中，形成0.1mg/ml浓度的脂多糖溶液；

14、s12：以1mg/kg/d的剂量将脂多糖溶液注射进近交品系成年雄性小鼠的腹腔内，连续注射五天，即为小鼠炎症抑郁模型。

15、进一步的，所述步骤s3中，出现抑郁行为的模型的海马组织样本保留的具体步骤是：

16、s31：麻醉小鼠，打开小鼠胸腔，进行心脏灌流，生理盐水由左心室灌入，经体循环，由右心室流出，待肝脏颜色泛白，停止灌流；

17、s32：使用手术剪打开小鼠颅骨，取出鼠脑，其中，一部分鼠脑按照脑图谱，取出小鼠海马脑区，用于实时荧光定量pcr和蛋白质免疫印迹检测，另一部分鼠脑保存于4％多聚甲醛中，随后在30％蔗糖溶液中进行沉降脱水，用于免疫荧光检测。

18、进一步的，所述步骤s5中，小鼠海马脑区定位注射坐标为前囟尾部2.06mm，矢状中线左右各1.5mm，距颅骨表面2mm深，靶向小胶质细胞敲低usp22的腺相关病毒为吉凯生物的aavmg1.2-usp22-rnai，病毒滴度为109tu/ml，载体包含的usp22的rnai序列为5’-guggacaacuggaagcaaa-3’。

19、进一步的，所述步骤s7中，bv2小胶质炎症细胞模型构建的具体步骤包括：

20、以100ng/ml的脂多糖处理bv2小胶质细胞24h，诱导bv2小胶质细胞炎症。

21、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

22、本发明构建小鼠炎症抑郁模型，基于糖水偏爱实验、悬尾实验和强迫游泳实验评价模型抑郁样行为，保留具有抑郁样行为的模型，收集具有抑郁样行为的模型的海马组织样本，基于实时荧光定量pcr检测、免疫荧光检测和蛋白质免疫印迹检测评价小胶质细胞的状态，再定位注射靶向小胶质细胞敲低usp22的腺相关病毒，两周后重复上述步骤，同时构建bv2小胶质炎症细胞模型，基于蛋白质免疫印迹检测评价小胶质细胞的状态，后基于小胶质细胞的状态比较研究出小胶质细胞在抑郁症中活化机制，该种方法对于小胶质细胞在抑郁症中的活化机制研究较为准确，能够为抗抑郁药物的良性发展奠定理论基础。

技术特征：

1.一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，其特征在于：所述步骤s1中，小鼠炎症抑郁模型构建的具体步骤包括：

3.根据权利要求1所述的一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，其特征在于：所述步骤s3中，出现抑郁行为的模型的海马组织样本保留的具体步骤是：

4.根据权利要求1所述的一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，其特征在于：所述步骤s5中，小鼠海马脑区定位注射坐标为前囟尾部2.06mm，矢状中线左右各1.5mm，距颅骨表面2mm深，靶向小胶质细胞敲低usp22的腺相关病毒为吉凯生物的aavmg1.2-usp22-rnai，病毒滴度为109tu/ml，载体包含的usp22的rnai序列为5’-guggacaacuggaagcaaa-3’。

5.根据权利要求1所述的一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，其特征在于：所述步骤s7中，bv2小胶质炎症细胞模型构建的具体步骤包括：

技术总结本发明公开了一种小胶质细胞在抑郁症中活化机制的研究方法，包括以下步骤：S1：构建小鼠炎症抑郁模型；S2：实验评价构建的模型的抑郁样行为，保留出现抑郁行为的模型；S3：收集保留模型的海马组织样本；S4：检测评价小胶质细胞的状态；S5：小鼠海马脑区定位注射靶向小胶质细胞敲低USP22的腺相关病毒；S6：定位注射两周后，重复步骤S1‑S4；S7：构建BV2小胶质炎症细胞模型；S8：检测评价小胶质细胞的状态；S9：比较步骤S4、S6和S8中小胶质细胞的状态，确定小胶质细胞在抑郁症中活化机制；本发明对于小胶质细胞在抑郁症中的活化机制研究较为准确。技术研发人员：黄荣荣,陆燕受保护的技术使用者：南通大学附属医院技术研发日：技术公布日：2024/9/26