一种牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法及应用与流程

本发明属于中药制剂质量检测，具体涉及一种牡蛎及其药物制剂的特征图谱，并进一步公开所述特征图谱的构建方法，以及牡蛎及其药物制剂的质量检测方法。

背景技术：

1、牡蛎(oyster)属于异柱目(anisomyaria)、牡蛎科(ostreidae)，是一种营养价值很高的海产品。研究发现，牡蛎中的氨基酸组分丰富，其中含量最高的是精氨酸(arginine)，以及较高的赖氨酸(lysine)。因此，基于牡蛎产品的深加工技术引起了行业的广泛关注。牡蛎为常用海洋中药，药用部位为贝壳，与其他贝壳药相比，具有“重镇安神，潜阳补阴”的特殊功效。但是，此前关于牡蛎的特征图谱方法研究较少，其药效物质基础研究也较为薄弱。

2、因此，本领域期待建立一种能够全面地、系统的检测牡蛎及其药物制剂的方法，特别是建立牡蛎及其药物制剂的特征图谱的方法，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。

技术实现思路

1、为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种牡蛎及其药物制剂的特征图谱的构建方法，以全面反映牡蛎及其药物制剂的内在质量和用药安全；

2、本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种牡蛎及其药物制剂的质量检测方法。

3、为解决上述技术问题，本发明所述的一种牡蛎尤其是长牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法，包括对牡蛎和/或牡蛎药物制剂的供试溶液进行高效液相色谱检测的步骤；

4、色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以0.08-0.12％磷酸溶液为流动相b，按如下程序进行梯度洗脱：

5、0-7min，a：b为17％：83％；

6、7-10min，a：b为17％→22％：83％→78％；

7、10-15min，a：b为22％：78％；

8、15-16min，a：b为22％→35％：78％→65％；

9、16-20min，a：b为35％：65％；

10、20-30min，a：b为35％→36％：65％→64％。

11、优选的，所述色谱条件中，以乙腈为流动相a，以0.10％磷酸溶液为流动相b.

12、具体的，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法，所述高效液相色谱检测步骤中，色谱条件还包括：流速为0.25-0.30ml/min，柱温为30-40℃，检测波长为254±2nm。

13、优选的，色谱条件包括：流速为0.25ml/min，柱温为35℃，检测波长为254nm。

14、具体的，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法，所述供试品溶液的制备方法包括：取供试品精密加入第一酸液混合以去除碳酸钙，并继续加入第二酸液进行水解，收集水解物经洗涤后蒸干，残渣加入第三酸液复溶，即得；

15、优选的，所述方法还包括将所述供试品溶液进行衍生化处理的步骤，包括：取所述供试品溶液加入含异硫氰酸苯酯的乙腈溶液以及含三乙胺的乙腈溶液混合，继续加入正己烷混合，取下层溶液过滤，即得。

16、具体的，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法，所述方法还包括制备对照药材参照物溶液的步骤，具体包括：取牡蛎对照药材精密加入第一酸液混合去除碳酸钙，并继续加入第二酸液进行水解，收集水解物经洗涤后蒸干，残渣加入第三酸液复溶，即得；

17、优选的，所述方法还包括将所述对照药材参照物溶液进行衍生化处理的步骤，包括：取所述对照药材参照物溶液加入含异硫氰酸苯酯的乙腈溶液以及含三乙胺的乙腈溶液混合，继续加入正己烷混合，取下层溶液过滤，即得。

18、具体的，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法，所述方法还包括制备对照品参照物溶液的步骤，以及，基于所述高效液相色谱法构建对照品特征图谱的步骤；

19、所述对照品包括甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸和/或盐酸赖氨酸；

20、所述对照品参照物溶液的制备方法包括：取对照品精密加入第三酸液混合，即得；

21、优选的，所述方法还包括将所述对照品参照物溶液进行衍生化处理的步骤，包括：取所述对照品参照物溶液加入含异硫氰酸苯酯的乙腈溶液以及含三乙胺的乙腈溶液混合，继续加入正己烷混合，取下层溶液过滤，即得。

22、具体的，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法：

23、所述第一酸液包括浓度为9.5-10.5％的稀盐酸；和/或，

24、所述第二酸液包括浓度为35-37％的浓盐酸；和/或，

25、所述第三酸液包括浓度为0.08-0.12mol/l的盐酸溶液，优选浓度为0.1mol/l；和/或，

26、所述水解步骤的温度为120-180℃；和/或，

27、所述含异硫氰酸苯酯的乙腈溶液的浓度为0.08-0.12mol/l，优选0.1mol/l；和/或，

28、所述含三乙胺的乙腈溶液的浓度为0.08-0.12mol/l，优选0.1mol/l。

29、具体的，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法，所述牡蛎药物直接包括牡蛎配方颗粒、牡蛎饮片或牡蛎标准汤剂。

30、本发明还公开了一种牡蛎尤其是长牡蛎及其药物制剂的特征图谱和/或对照特征图谱，所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱或对照特征图谱由所述方法构建得到；

31、优选的，所述特征图谱具有9个特征峰，以甘氨酸对照品参照物峰相应的峰为s峰，其他特征峰相对s峰的相对保留时间在规定值的±10％之内，各特征峰的规定值为：峰1：0.62、峰2：0.90、峰4：1.19、峰5：1.26、峰9：3.78。

32、本发明还公开了所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱构建方法和/或所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱和/或对照特征图谱在牡蛎尤其是长牡蛎及其药物制剂质量检测领域的应用。

33、本发明还公开了一种牡蛎尤其是长牡蛎及其药物制剂的质量检测方法，包括按照所述方法构建所述特征图谱和对照特征图谱的步骤，以及，将所述特征图谱与对照特征图谱进行比较的步骤。

34、本发明所述牡蛎尤其是长牡蛎及其药物制剂的特征图谱的构建方法，以牡蛎药材及牡蛎药物制剂为检测对象，基于高效液相色谱法建立了针对该药物制剂的特征图谱方法，供试品色谱中应呈现9个特征峰，其中峰3、峰6、峰7、峰8应分别与甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸对照品参照物峰保留时间相对应。与甘氨酸对照品参照物峰相应的峰为s峰，计算峰1～峰2、峰4～峰5、峰9与s峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为0.62(峰1)、0.90峰(2)、1.19(峰4)、1.26(峰5)、3.78(峰9)。本发明建立牡蛎及其制剂特征图谱，分离效果较好，提高了分析效率，并且可以明确区分牡蛎与常见贝壳类药物，保证了用药准确。

35、本发明所述牡蛎及其药物制剂的特征图谱的构建方法，旨在建立牡蛎尤其是长牡蛎原药材及牡蛎药物制剂的特征图谱方法，并与其他贝壳类常用药物如瓦楞子、蛤壳、珍珠母、石决明进行了区分，保证基原准确，保证了临床上准确用药。