一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法

本发明属于含量检测，具体涉及一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法。

背景技术：

1、大黄鱼是我国海水养殖产量最大的鱼类，年产量达20万吨以上。不同养殖地区大黄鱼由于体色差异导致市场售价差异巨大。野生大黄鱼由于具有金黄色的外表售价能达到每斤几千元甚至上万元。市场上可能存在将体色差的大黄鱼通过染料染成黄色冒充高质量的情况。因此，通过对大黄鱼皮肤黄色进行定量的检测有助于帮助打击欺诈行为，保护消费者权益，同时也有利于建立大黄鱼地区品牌，提高其经济价值。

2、大黄鱼皮肤黄色物质评估方法主要包括视觉评估、色差仪检测、紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法。视觉评估尽管简单快速和成本低，但主观性强和精确度有限。色差仪检测具有精确度高和具有高的可重复的优点，但是大黄鱼体色很容易受到光照等环境因素的影响。白天大黄鱼皮肤叶黄素细胞收缩，黄色变淡，但是实际叶黄素含量却并没有改变。紫外-可见分光光度法在检测类胡萝卜素如叶黄素时，尽管提供了一种成本相对较低且操作直接的检测方法，但其复杂的样品预处理步骤，包括有机试剂的抽提、萃取和皂化，增加了整个分析过程的复杂度和时间消耗。此外，每次测量后都需要重新洗涤和准备比色皿，这使得处理大批量样品变得尤为费时费力，降低了该方法在高通量分析需求中的实用性和效率。高效液相色谱法具有高精确度、特异性和分辨率高的优点，但是设备昂贵，运行和维护成本也较高，需要专业的操作人员和复杂的样本前处理，样本准备和分析过程相对耗时。最重要的是大黄鱼皮肤叶黄素具有多达5种异构体，而市售的叶黄素标准品仅仅代表其中一种，其它异构体标准品要么没有商业产品，要么价格相当昂贵。另外，叶黄素标准品很不稳定，保存成本大。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，具体通过以下方法加以实现：

2、一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，该方法包括以下步骤：

3、1）样品预处理：取大黄鱼皮肤样品，充分剪碎后，加入研磨珠及有机溶剂进行研磨，重复两次，制得样品溶液，将样品溶液置于冰箱中避光保存；

4、2）样品液制备及叶黄素提取：将避光保存的样品溶液离心，吸取上清，再次加入有机溶剂，研磨，重复两次，合并上清后离心，取上清液，制得大黄鱼叶黄素皮肤提取液；

5、3） 叶黄素标准浓度配制：取叶黄素标准品，溶解在有机溶剂中，配置母液浓度为5mg/ml，进一步用丙酮稀释成1.5625、3.125、6.25、12.5和25μg/ml；

6、4）测定波长确定：大黄鱼叶黄素皮肤提取液体和叶黄素标准溶液在酶标仪上进行特定波长扫描，找到最大吸收波长；

7、5）标准曲线建立：取300μl不同浓度的叶黄素标准品置于石英酶标板中，在酶标仪上最大吸收波长处检测吸光度，建立吸光度和浓度之间的标准曲线；

8、6）不同养殖区大黄鱼皮肤叶黄素测定：采集来不同地方来源的养殖大黄鱼和野生大黄鱼，每个来源取3个生物学平行样本，皮肤叶黄素经上述方法提取后在酶标仪检测吸光度，从而获得不同地区大黄鱼皮肤叶黄素的浓度。

9、进一步地，有机溶剂为丙酮。

10、进一步地，步骤1）中，大黄鱼皮肤样品与有机溶剂的质量体积比为：100mg：1ml。

11、进一步地，步骤1）中，冰箱避光保存的温度为4℃，避光保存的时间为16h。

12、进一步地，步骤1）和步骤2）中，研磨功率为70hz，研磨时间为60s，离心转速为8000rpm/min离心5 min。

13、进一步地，步骤4）中，酶标仪扫描的波长为300～700 nm，最大吸收波长为446 nm。

14、本发明方法通过在酶标仪上建立吸光度和叶黄素标准品之间的标准曲线，在明确叶黄素是大黄鱼皮肤主要类胡萝卜素的基础上，通过有机试剂抽提皮肤叶黄素后在酶标仪上测定吸光度，从而确定大黄鱼皮肤叶黄素含量，避免了较长的分析时间和节约了样本量。

技术特征：

1.一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，其特征在于有机溶剂为丙酮。

3.如权利要求1所述的一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，其特征在于步骤1）中，大黄鱼皮肤样品与有机溶剂的质量体积比为：100mg：1ml。

4.如权利要求1所述的一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，其特征在于步骤1）中，冰箱避光保存的温度为4℃，避光保存的时间为16h。

5.如权利要求1所述的一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，其特征在于步骤1）和步骤2）中，研磨功率为70hz，研磨时间为60s，离心转速为8000 rpm/min离心5 min。

6.如权利要求1所述的一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，其特征在于步骤4）中，酶标仪扫描的波长为300～700 nm，最大吸收波长为446 nm。

技术总结本发明一种检测大黄鱼皮肤叶黄素的方法，包括以下步骤：1）样品预处理；2）样品液制备及叶黄素提取；3）叶黄素标准浓度配制；4）测定波长确定；5）标准曲线建立；6）不同养殖区大黄鱼皮肤叶黄素测定。本发明方法通过在酶标仪上建立吸光度和叶黄素标准品之间的标准曲线，在明确叶黄素是大黄鱼皮肤主要类胡萝卜素的基础上，通过有机试剂抽提皮肤叶黄素后在酶标仪上测定吸光度，从而确定大黄鱼皮肤叶黄素含量，避免了较长的分析时间和节约了样本量。技术研发人员：郑家浪,严小军,朱庆玲,江丽华,陈舜受保护的技术使用者：浙江海洋大学技术研发日：技术公布日：2024/10/17