膜联蛋白A1衍生的多肽类似物的制作方法

本公开涉及衍生自膜联蛋白a1的多肽和多肽类似物以及包含所述多肽或多肽类似物的组合物，用于治疗炎性和缺血性病况。

背景技术：

0、发明背景

1、膜联蛋白超家族由13种具有显著生物学和结构同源性的钙磷脂结合蛋白组成。膜联蛋白在结构上分为高度保守的核心结构域和可变的n-末端结构域。膜联蛋白a1(anxa1，37kda–seq id no:1)是一种抑制血源性多形核白细胞(pmn)向周围组织外渗的抗炎蛋白。所述蛋白与n-甲酰肽受体(fpr)2或fpr-l1受体结合，并由此启动一系列信号传导事件。在炎性刺激后，血源性多形核白细胞(pmn)迁移到周围组织中。pmn的迁移或外渗受介体如粘附分子、细胞因子和蛋白酶的调节，这些介体控制促炎和抗炎过程。pmn的破坏性潜力很高，并且可能会损害自身。因此，控制pmn外渗和炎性应答很重要。

2、对于作为抗炎剂的治疗目的，完整的膜联蛋白a1蛋白相对于其功能片段或修饰形式具有许多缺点。所述蛋白的大尺寸使其更难通过可用于较小多肽的技术进行递送(例如透皮或透粘膜)。对于用于治疗眼部炎症，预期较小的分子能够更好地穿透角膜上皮。此外，对蛋白水解降解的敏感性是对于所有肽药物来说特别关注的问题，尤其是大的肽，并且尤其是在考虑(许多患者优选的)口服递送的情况下。

3、一些在多肽n-末端侧缺乏重要区域的膜联蛋白a1衍生物已被证明在一些炎性和介体释放测定中缺乏显著活性，而全长的n-末端n-乙酰基膜联蛋白a1(2-26)在多种系统下都被认为具有生物活性。许多主要衍生自膜联蛋白a1蛋白的独特n-末端部分的肽已被证明具有抗炎特性。研究最广泛的膜联蛋白a1肽之一是肽ac2-26，它模拟54个氨基酸的n-末端区域的第2至第26个氨基酸。与ac 1-188片段(和天然蛋白)一样，它具有n-末端乙酰化以增加其稳定性，并可能增加其半衰期。已经表明，膜联蛋白a1及其n-末端肽(ac2-26)通过fpr2/脂氧素a4(fpr2/alx)受体而发挥其大部分抗炎作用。在体内，已表明ac2-26肽在心肌缺血再灌注(i/r)、肠系膜i/r、糖原腹膜炎和il1气囊模型中发挥抗炎作用，据报道可显著减少中性粒细胞向损伤/炎性部位的募集。这种肽的抗炎特性并不局限于急性炎症模型。在关节炎模型中，关节内施用ac2-26肽显示可通过减少中性粒细胞募集来减轻疾病严重程度。

4、ac2-26肽的较短版本，如肽ac2-12和ac2-6，也已显示在急性炎性模型中发挥一定程度的抗炎作用。已经公开了具有抗炎作用的较长多肽，例如对应于氨基酸残基2-48和11-48的多肽(wo 2012/174397)。许多实验室开展的工作表明，衍生自完全独立于膜联蛋白a1蛋白n-末端的区域的肽，更具体地说是氨基酸247-253(位于蛋白核心区域的第三重复中，称为抗炎素-2(af2))，也具有抗炎特性。

技术实现思路

0、发明概述

1、本公开涉及膜联蛋白a1多肽类似物、包含膜联蛋白a1多肽和分支氨基酸探针(bap)的缀合物、以及包含膜联蛋白a1多肽类似物或其缀合物的组合物，用于治疗缺血性和/或炎性病况。

2、本公开的一个方面涉及至少包含序列amvseflkqawfieneeqeyvqtvks(seq id no:2)的多肽或多肽类似物，或其功能变体，其中所述多肽由选自seq id no:2至seq id no:24的多肽或其功能变体组成。

3、本公开的另一个方面涉及包含所述多肽或多肽类似物和一个或多个分支氨基酸探针的多肽缀合物。

4、本公开的另一个方面涉及包含所述多肽或多肽类似物的药物组合物。

5、本公开的另一方面涉及多肽或多肽类似物用于治疗缺血性病况和/或炎性病况。

1.一种多肽或多肽类似物，至少包含序列amvseflkqawfieneeqeyvqtvks(seq id no:2)或其功能变体，其中所述多肽由选自下列的多肽或其功能变体组成：

2.根据权利要求1所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体与seq id no:2至seqid no:24中的任一个具有至少75％序列同一性，例如与seq id no:2至seq id no:24中的任一个具有至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性，例如至少90％序列同一性，例如至少95％序列同一性。

3.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no:2至seq id no:24中任一个且具有一个或多个氨基酸取代的多肽，例如一个氨基酸取代、两个氨基酸取代、三个氨基酸取代、四个氨基酸取代或五个氨基酸取代。

4.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：2至seq id no：24中任一个且具有一个氨基酸取代的多肽。

5.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：2至seq id no：24中任一个且具有两个氨基酸取代的多肽。

6.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：2至seq id no：24中任一个且具有三个氨基酸取代的多肽。

7.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：2至seq id no：24中任一个且具有四个氨基酸取代的多肽。

8.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。

9.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:2至seq idno:24中任一个的位置10处的丙氨酸残基被任意其他标准或非标准氨基酸取代；例如被独立地选自亮氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、异亮氨酸和精氨酸的氨基酸残基取代。

10.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:2至seq idno:24中任一个的位置21处的缬氨酸残基被任意其他标准或非标准氨基酸取代；例如被独立地选自亮氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、异亮氨酸和赖氨酸的氨基酸残基取代。

11.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:2至seq idno:24中任一个的位置24处的缬氨酸残基被任意其他标准或非标准氨基酸取代；例如被独立地选自亮氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、精氨酸和赖氨酸的氨基酸残基取代。

12.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:2至seq idno:24中任一个的位置24处的缬氨酸残基被独立地选自亮氨酸、天冬氨酸和甲硫氨酸的氨基酸残基取代。

13.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:2至seq idno:24中任一个的位置24处的缬氨酸残基被亮氨酸取代。

14.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:2至seq idno:24中任一个的位置35处的缬氨酸残基被任意其它标准或非标准氨基酸取代；例如被独立地选自甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的氨基酸残基取代；例如被赖氨酸取代。

15.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中seq id no:23至seqid no:24中任一个的位置50处的亮氨酸残基被任意其它标准或非标准氨基酸取代，例如被独立地选自甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的氨基酸残基取代。

16.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，选自以下：

17.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，选自以下：

18.根据权利要求17所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：48至seq id no：70中任一个且具有一个或多个氨基酸取代，例如具有1、2、3、4或5个氨基酸取代的多肽。

19.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，选自以下：

20.根据权利要求19所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：50至seq id no：60中任一个且具有一个或多个氨基酸取代，例如具有1、2、3、4或5个氨基酸取代的多肽。

21.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，选自以下：

22.根据权利要求21所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no：50、seq id no：55和seq id no：60中任一个且具有一个或多个氨基酸取代，例如具有1、2、3、4或5个氨基酸取代的多肽。

23.根据权利要求17-22中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no:48至seq id no:70中任一个且具有一个氨基酸取代的多肽，例如选自seq idno:50至seq id no:60中任一个且具有一个氨基酸取代的多肽，例如选自seq id no:50、seq id no:55和seq id no:60中任一个且具有一个氨基酸取代的多肽。

24.根据权利要求17-22中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no:48至seq id no:70中任一个且具有两个氨基酸取代的多肽，例如选自seq idno:50至seq id no:60中任一个且具有两个氨基酸取代的多肽，例如选自seq id no:50、seq id no:55和seq id no:60中任一个且具有两个氨基酸取代的多肽。

25.根据权利要求17-22中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no:48至seq id no:70中任一个且具有三个氨基酸取代的多肽，例如选自seq idno:50至seq id no:60中任一个且具有三个氨基酸取代的多肽，例如选自seq id no:50、seq id no:55和seq id no:60中任一个且具有三个氨基酸取代的多肽。

26.根据权利要求17-22中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述功能变体是选自seq id no:48至seq id no:70中任一个且具有四个氨基酸取代的多肽，例如选自seq idno:50至seq id no:60中任一个且具有四个氨基酸取代的多肽，例如选自seq id no:50、seq id no:55和seq id no:60中任一个且具有四个氨基酸取代的多肽。

27.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。

28.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述多肽或多肽类似物被乙酰化。

29.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中n端氨基酸残基被乙酰化(coch3或ac-)。

30.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中c端氨基酸残基被酰胺化(-nh2)。

31.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中所述多肽或其功能变体

32.一种多肽缀合物，其包含前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物以及一个或多个分支氨基酸探针，其中所述分支氨基酸探针包含第一氨基烷基氨基酸残基，

33.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述氨基烷基氨基酸残基单独地选自赖氨酸和鸟氨酸。

34.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽或多肽类似物的n端氨基酸残基在α氨基处被乙酰化。

35.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中与所述侧链氨基共价连接的分子独立地选自以下：lysq-lys、(aa3)p-lysq、lysq-(aa3)p、[(aa3)-lys]p、[lys-(aa3)]p、ornq-orn、(aa3)p-ornq、ornq-(aa3)p、[(aa3)-orn]p和[orn-(aa3)]p、ornp-lysp、lysp-ornp、[orn-lys]p和[lys-orn]p，其中q是选自0、1、2和3的数字，p是选自1、2和3的数字，(aa3)是独立地选自arg、his、gly和ala的氨基酸残基，并且n端lys、orn或(aa)3氨基酸残基任选地在α氨基处被乙酰化。

36.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中与所述侧链氨基共价连接的分子独立地选自lysq-lys、ornq-orn、ornp-lysp、lysp-ornp、[orn-lys]p和[lys-orn]p，其中q是选自0、1、2和3的数字，p是选自1、2和3的数字，并且n端lys或orn氨基酸残基任选地在α氨基处被乙酰化。

37.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述氨基烷基氨基酸残基是赖氨酸残基。

38.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中与所述侧链氨基共价连接的分子独立地选自lysq-lys、(aa3)p-lysq、lysq-(aa3)p、[(aa3)-lys]p和[lys-(aa3)]p，并且n端lys或(aa)3残基任选地在α氨基处被乙酰化。

39.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物，其中与所述侧链氨基共价连接的分子是lysq-lys，其中q是选自0、1、2和3的数字，并且n端lys残基任选地在α氨基处被乙酰化。

40.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述分支氨基酸探针由2个氨基酸残基、3个氨基酸残基、4个氨基酸残基、5个氨基酸残基或6个氨基酸残基组成。

41.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述分支氨基酸探针由3个氨基酸残基组成。

42.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中与所述侧链氨基共价连接的分子独立地选自以下：lys、ac-lys、lys-lys、ac-lys-lys、lys-lys-lys、ac-lys-lys-lys、lys-lys-lys-lys、ac-lys-lys-lys-lys、lys-gly-lys、ac-lys-gly-lys、lys-lys-gly、ac-lys-lys-gly、lys-gly、ac-lys-gly、lys-ala-lys、ac-lys-ala-lys、lys-lys-ala、ac-lys-lys-ala、lys-ala、ac-lys-ala、lys-his-lys、ac-lys-his-lys、lys-lys-his、ac-lys-lys-his、lys-his、ac-lys-his、lys-arg-lys、ac-lys-arg-lys、lys-lys-arg、ac-lys-lys-arg、lys-arg和ac-lys-arg。

43.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述分支氨基酸探针选自以下：

44.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述分支氨基酸探针选自ac-(ac-lys)lys-、ac-(lys)lys-、(ac-lys)lys-nh2、(lys)lys-nh2和(lys)lys-。

45.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述第一氨基烷基氨基酸残基与所述多肽或多肽类似物的n端共价连接。

46.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述第一氨基烷基氨基酸残基与所述多肽或多肽类似物内的赖氨酸或鸟氨酸残基的侧链氨基共价连接。

47.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述第一氨基烷基氨基酸残基与所述多肽或多肽类似物的c端共价连接。

48.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其包含1个分支氨基酸探针。

49.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其包含2个分支氨基酸探针。

50.一种药物组合物，其包含前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物或多肽缀合物。

51.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，用作药物。

52.根据前述权利要求中任一项所述的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，用于治疗缺血性病况和/或炎性病况。

53.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述治疗是预防性的、改善性的或治愈性的。

54.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述病况是急性、亚急性或慢性的。

55.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述缺血性和/或炎性病况在哺乳动物例如人的一个或多个器官的组织中。

56.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述器官选自肾、肝、脑、心脏、肌肉、骨髓、皮肤、骨骼、肺、呼吸道、脾、外分泌腺、膀胱、内分泌腺、生殖器官包括阴茎管、眼睛、耳朵、血管系统、胃肠道包括小肠、结肠、直肠、肛管和前列腺。

57.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述缺血性病况是继发性缺血。

58.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述缺血是由于卒中、损伤、脓毒性休克、全身性低血压、心脏病发作导致的心脏骤停、心律失常、动脉粥样硬化疾病伴随血栓形成、心脏或任意器官血管的栓塞、血管痉挛、主动脉瘤或其他器官的动脉瘤、冠状动脉狭窄、心肌梗塞、心绞痛、心包炎、心肌炎、粘液血症或心内膜炎引起的。

59.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述缺血性和/或炎性病况与手术例如大型手术相关；或与器官移植例如实体器官移植相关。

60.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述缺血性和/或炎性病况选自术后全身炎症反应综合征(sirs)和术后器官功能障碍；例如术后肾衰竭，包括急性肾损伤(aki)、肾毒性和/或慢性肾衰竭(crf)。

61.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述缺血性和/或炎性病况是再灌注损伤。

62.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述炎性疾病选自关节病(关节疾病)、类风湿性关节炎(ra)、痛风、胃肠系统炎性疾病和多发性硬化症。

63.根据前述权利要求中任一项所述用途的多肽或多肽类似物或多肽缀合物，其中所述炎性病况或疾病是肝脏炎症，例如非酒精性脂肪性肝炎(nash)。