一种白芍细胞外囊泡的提取方法和应用与流程

本发明涉及生物技术和生物工程领域，特别是涉及一种白芍细胞外囊泡的提取方法和应用。

背景技术：

1、细胞外囊泡（extracellular vesicles，evs）是一种由细胞释放到细胞外基质的纳米级（30-150nm）膜性小囊泡，参与细胞通讯、迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程，广泛存在于各种体液和细胞上清中，并稳定携带重要的信号分子。大量的研究证明人类细胞（尤其是干细胞）产生的细胞外囊泡可防治多种疾病。不仅如此，植物evs尤其是中草药（药用植物）ev被认为是近年来重要的新兴领域。

2、中药白芍味苦、酸，性微寒。其主要成分包含芍药内酯苷、芍药苷、挥发油、羟基芍药苷、牡丹酚等白芍总苷，起到保护肝脏、止痛及抗炎等作用，目前不少的研究报道白芍或白芍总苷具有很好的抗炎和免疫调节的作用。白芍总苷通过抑制异常激活的免疫细胞，平衡免疫细胞和巨噬细胞的关系，进一步调节免疫细胞的功能。多项研究结果表明，白芍总苷能够调节ｂ淋巴细胞、ｔ淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞、癌细胞的功能，从而发挥免疫调节和细胞保护的作用。

3、目前，鲜有报道过关于白芍来源的细胞外囊泡的相关内容，因此亟需一种以芍药根部为原料的白芍细胞外囊泡的提取方法，并将其应用于促进皮肤细胞再生、降低黑色素生成以及抗氧化修护抗衰等方面。

技术实现思路

1、本发明的目的是克服上述现有技术的缺陷，提取一种以芍药根部为原料提取能够促进细胞再生、降低黑色素生成以及抗氧化修护的白芍细胞外囊泡的提取方法。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

3、一方面，本发明提供一种白芍细胞外囊泡的提取方法，所述提取方法包括：

4、（1）取新鲜芍药，进行预处理，获得白芍；

5、（2）将步骤（1）获得的白芍浸泡、破壁得到白芍汁液；

6、（3）将步骤（2）获得的白芍汁液进行离心，获得白芍细胞外囊泡；

7、其中，所述预处理步骤包括：将所述新鲜芍药置于水中加热，冷却后干燥；所述加热的时间为10~30min；控制所述加热的温度为80~100℃；控制所述干燥温度为50~70℃；控制所述干燥时间为18~36小时。

8、优选地，所述新鲜芍药为新鲜芍药的根部。

9、优选地，控制所述新鲜芍药与所述水的质量比为1:1~10。

10、优选地，控制所述浸泡的时间为10~36小时。

11、优选地，控制所述破壁的时间为8~25min，所述破壁为间歇性破壁，具体步骤包括：破壁6~10min，间歇8~12min。

12、优选地，控制预处理后得到的白芍中的芍药苷不低于1.2%。

13、优选地，所述离心为密度梯度离心或超速离心。

14、优选地，所述离心为密度梯度离心，具体步骤包括：

15、将所述白芍汁液400~800×g离心10~30min，收集上清；再1500~3000×g离心10~30min，收集上清；再3000～5000×g离心20~40min，收集上清；再8000~12000×g离心40~70min，收集上清；再100000~120000×g离心60~100min，收集沉淀，将所述沉淀重悬于pbs溶液中，获得所述细胞外囊泡。

16、第二方面，本发明提供上述任一项所述的提取方法获得的白芍细胞外囊泡。

17、第三方面，本发明提供一种组合物，所述组合物包括上述任一项所述的提取方法获得的白芍细胞外囊泡或上述所述的细胞外囊泡。

18、第四方面，本发明提供根据上述任一项所述的提取方法或上述所述的细胞外囊泡或上述所述的组合物在以下中的用途：

19、（1）在制备皮肤抗皱、抗衰产品中的应用；

20、（2）在制备皮肤修复、抗氧化产品中的应用；

21、（3）在制备美白祛斑产品中的应用。

22、本发明相对于现有技术具有如下的显著优点及效果：

23、本发明提供的白芍细胞外囊泡的提取方法操作简便、条件温和、耗时短、成本低以及安全性高，同时本发明提供得到的白芍细胞外囊泡杂质少、纯度高以及安全性高；预处理后的白芍相较于新鲜白芍，解决了材料时节受限的问题，且预处理后的白芍芍药苷含量比新鲜的芍药高；将本发明提取得到的白芍细胞外囊泡应用于护肤领域，其活性成分高、具有美白祛斑、改善皱纹以及皮肤衰老和在皮肤修复和抗氧化等方面具有功效。

技术特征：

1.一种白芍细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括：

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述新鲜芍药为新鲜芍药的根部；

3.根据权利要求1所述的提取的方法，其特征在于，控制所述浸泡的时间为10~36小时；

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述离心为密度梯度离心或超速离心。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述离心为密度梯度离心，具体步骤包括：

6.根据权利要求1~5中任一项所述的提取方法获得的白芍细胞外囊泡。

7.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1~5中任一项所述的提取方法获得的白芍细胞外囊泡或权利要求6所述的细胞外囊泡。

8.根据权利要求1~5中任一项所述的提取方法或权利要求6所述的细胞外囊泡或权利要求7所述的组合物在以下中的用途：

技术总结本发明涉及一种白芍细胞外囊泡的提取方法和应用。具体涉及一种白芍细胞外囊泡的提取方法，所述提取方法包括：（1）取新鲜芍药，进行预处理，获得白芍；（2）将步骤（1）获得的白芍浸泡、破壁得到白芍汁液；（3）将步骤（2）获得的白芍汁液进行离心，获得白芍细胞外囊泡；其中，所述预处理步骤包括：将所述新鲜芍药置于水中加热，冷却后干燥。利用发明的提取方法获得的白芍细胞外囊泡具有优异的抗皱、美白、修复功效。技术研发人员：尹航,李振韬,禹雨,江雪,戚梦伟,马芳受保护的技术使用者：亿航（苏州）生物医药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/4