多羟基取代熊果醇衍生物及其微生物转化制备方法与应用

本发明属于医药，尤其涉及一类多羟基取代熊果醇衍生物及其微生物转化制备方法与应用。

背景技术：

1、熊果醇，又名乌发醇是一种天然的乌苏烷型五环三萜类化合物，广泛分布于橄榄中，包括橄榄叶、树皮、果实以及初榨橄榄油中。熊果醇含量的高低是人们评价橄榄油质量的重要指标之一。也可从杨梅、油茶、夹竹桃、薰衣草、苹果等植物的不同部位分离得到。初步的研究表明，熊果醇具有多种药理活性，包括抗炎、强心、抗心律失常、和抗肿瘤特性以及能促进皮肤伤口的愈合。

2、然而由于熊果醇存在溶解度差、生物利用度低以及母核中氢键供体的数量和刚性骨架中可旋转键的数量有限等缺点，限制了人们对其进一步的化学生物学研究。为了改善熊果醇的这些特性，研究人员主要通过化学合成和生物转化等方法对熊果醇进行结构修饰。常规的化学合成方法成本较高，且在饱和c-h键上引入官能团尤其困难。而微生物转化是一种简单而有效的天然化合物结构修饰技术，可区域选择性和立体选择性引入官能团，具有高效、经济、环保等优点，这是常规化学修饰难以实现的。微生物转化技术作为一种高效的修饰工具，可以修饰不同骨架的天然活性化合物的结构，已被广泛的应用于各类化合物结构修饰。利用微生物转化所获得的转化产物一方面可以获得具有更强生物活性的衍生物直接用于药物研发。另一方面，经微生物转化后母核上新引入的化学活性基团增加了进行化学修饰与改造的位点，从而解决了三萜类化合物有机化学制备衍生物反应位点少的难题。然而，相对于化学合成法，微生物转化的方法具有很大的随机性，转化的结果不能像化学合成法那样可以预期，也不能进行有目的的设计。同时，即使是相似的底物经相同的菌株或不同的菌株催化转化后所获得的产物亦会有非常显著的差异。而同一个底物经不同的菌株转化后所能获得的转化产物也可能会有十分显著的差异。因此，利用微生物转化的方法进行化合物的结构修饰时选择合适的菌株是至关重要的。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的是提供一系列多羟基取代熊果醇衍生物及其微生物转化制备方法，这些多羟基取代熊果醇衍生物可用于制备抗肿瘤的药物。

2、本发明提供了一系列多羟基取代熊果醇衍生物，多羟基取代熊果醇衍生物为7β,15α,19α,21α-四羟基熊果醇、7β,15α,20β,21β-四羟基熊果醇和7β,15α,20β,23-四羟基熊果醇，结构分别如式ⅰ-ⅲ所示：

3、

4、本发明还提供了上述多羟基取代熊果醇衍生物的微生物转化制备方法，包括以下步骤：

5、1)发酵培养微生物，加入熊果醇，接着进行转化培养，除去菌丝体后得到发酵液，微生物为蝇卷霉circinellamuscae cgmcc3.2695；

6、2)将所述发酵液经萃取，得到转化物；

7、3)将所述转化物经过反相硅胶柱色谱纯化，所述反相硅胶柱色谱纯化采用甲醇-水两相系统梯度洗脱，收集合并组分；

8、4)将所述组分用反相高效液相色谱纯化，得到7β,15α,19α,21α-四羟基熊果醇、7β,15α,20β,21β-四羟基熊果醇和7β,15α,20β,23-四羟基熊果醇。

9、本发明还提供了上述的多羟基取代熊果醇衍生物或上述的微生物转化制备方法制备得到的多羟基取代熊果醇衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括宫颈癌、白血病、神经母细胞瘤、前列腺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌中的一种。

10、本发明还提供了上述的多羟基取代熊果醇衍生物或上述的微生物转化制备方法制备得到的多羟基取代熊果醇衍生物在制备用于杀伤白血病耐药细胞的药物中的应用。

11、本发明还提供了一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物的活性成分为上述的多羟基取代熊果醇衍生物或其药学上可接受的盐；所述多羟基取代熊果醇衍生物为7β,15α,19α,21α-四羟基熊果醇、7β,15α,20β,21β-四羟基熊果醇和7β,15α,20β,23-四羟基熊果醇中的一种或几种；所述肿瘤包括宫颈癌、白血病、神经母细胞瘤、前列腺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌中的一种。

12、与现有技术相比，本发明利用微生物酶的催化作用，区域选择性和立体选择性的在熊果醇母核7β位、15α位、19α位、20β位、21β(α)位或23位引入羟基或羰基，从而获得了结构新颖的多羟基取代熊果醇衍生物式ⅰ—式ⅲ，通过体外抗肿瘤细胞试验证实，化合物式ⅰ-式ⅲ具有显著的抗肿瘤活性，可以作为抗肿瘤药物的活性成分，具有广泛的用途。

技术特征：

1.一种多羟基取代熊果醇衍生物，其特征在于，

2.一种权利要求1所述的多羟基取代熊果醇衍生物的微生物转化制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.权利要求1所述的多羟基取代熊果醇衍生物或权利要求2所述的制备方法制备得到的多羟基取代熊果醇衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括宫颈癌、白血病、神经母细胞瘤、前列腺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌中的一种。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为用于杀伤白血病耐药细胞的药物。

6.一种用于抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分为熊果醇衍生物或其药学上可接受的盐，所述熊果酮酸衍生物为7β,15α,19α,21α-四羟基熊果醇、7β,15α,20β,21β-四羟基熊果醇和7β,15α,20β,23-四羟基熊果醇中的一种或几种；所述肿瘤为宫颈癌、白血病、神经母细胞瘤、前列腺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌中的一种。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料，所述药学上可接受的辅料为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂中的一种或几种。

技术总结本发明属于医药技术领域，公开了一类多羟基取代熊果醇衍生物及其微生物转化制备方法与应用。本发明利用微生物转化技术，以熊果醇为底物，采用微生物蝇卷霉催化转化后，区域选择性和立体选择性的在熊果醇母核多个位置引入羟基，从而获得了结构新颖的多羟基取代熊果醇衍生物。并通过体外抗肿瘤细胞试验证实，本发明得到的多羟基取代熊果醇衍生物具有显著的抗肿瘤活性，可以作为抗肿瘤药物的活性成分，具有广泛的用途。技术研发人员：刘玮,陈广通,王佳慧,吴艳妮,潘文慧受保护的技术使用者：南通大学技术研发日：技术公布日：2024/11/14