吸入式佛手柑内酯纳米脂质体治疗炎症性肺损伤的应用

本发明涉及吸入式佛手柑内酯纳米脂质体治疗炎症性肺损伤的应用，涉及医药。

背景技术：

1、急性肺损伤(acute lung injury，ali)是指由创伤、感染、有害气体吸入、休克等多种直接或间接因素所导致的以肺弥散功能障碍为特征的疾病，病死率高达30％～50％。ali发病机制复杂，病理过程主要包括急性渗出期、肺组织修复重塑期和慢性期三个阶段，其中。在急性渗出期，肺部血管内皮细胞、i型肺泡上皮细胞受损，大量炎性细胞在肺组织内弥散性浸润，肺内炎症因子过度释放，肺泡发生水肿；在肺组织修复重塑期，肺间质成纤维细胞增殖，对肺组织进行异常修复和重塑；到了慢性期，如果肺组织过度地修复重塑，则会发展为肺纤维化。目前用于治疗ali的药物包括糖皮质激素、抗氧化应激药物、非甾体抗炎药等。不同的药物，可以通过不同的作用过程治疗ali患者。

2、佛手柑内酯，又名5-甲氧基补骨脂素，属于香豆素类化合物，是佛手、当归、白芷等植物的有效成分之一，分子式为c12h8o4。近年来各方面的研究已证实佛手柑内酯有抗炎、抗癌等作用，其中，中国专利cn116687915a公开了佛手柑内酯在治疗肺损伤方面的应用。将佛手柑内酯用于治疗ali时，药效和阳性药吡非尼酮基本相近，证明佛手柑内酯在治疗ali方面具有良好的应用前景。然而，该现有技术中佛手柑内酯的最佳疗效也只是达到了与阳性药接近的水平，并未有显著提升。

技术实现思路

1、根据本发明的一个方面，提供了一种吸入式佛手柑内酯纳米脂质体，包括原药和载体，原药为佛手柑内酯，载体为dppc(二棕榈酰磷脂酰胆碱)、胆固醇和mpeg2000-dspe(聚乙二醇单甲醚-2000-二十八烷基磷脂酰乙醇胺，cas147867-65-0)，载体中dppc、胆固醇和mpeg2000-dspe的摩尔比为(70～85)：(15～25)：3。

2、本发明所提供的吸入式佛手柑内酯纳米脂质体中dppc是一种肺组织中的表面活性成分，因此具有肺靶向性，可以为佛手柑内酯纳米脂质体赋予靶向作用于肺部的特性。申请人惊讶地发现，在将佛手柑内酯制备成纳米脂质体的剂型后进行给药，可以抑制肺组织中m1巨噬细胞的极化，同时促进肺组织中m2巨噬细胞的极化，在治疗ali时具有比游离佛手柑内酯单体更显著的作用。需要说明的是，脂质体载体中各组分的摩尔比会影响脂质体对原药的包封率及其载药量。载体中dppc、胆固醇的用量过高、mpeg2000-dspe的用量过低，容易导致脂质体内含药浓度过低，在干预细胞时需要加入过量脂质体才能达到一定的疗效，但脂质体用量过大，容易影响细胞生长、导致细胞被污染，且由此得到的脂质体，体外抗炎作用与单体佛手柑内酯相比，无明显优势。

3、在一些实施方式中，吸入式佛手柑内酯纳米脂质体中佛手柑内酯和dppc的摩尔比为1：(1.5～4.5)。

4、在一些实施方式中，吸入式佛手柑内酯纳米脂质体中佛手柑内酯的含药浓度为0.5～1.5mmol/l。

5、在一些实施方式中，吸入式佛手柑内酯纳米脂质体中佛手柑内酯的载药量为0.45％～0.60％。

6、在一些实施方式中，吸入式佛手柑内酯纳米脂质体对佛手柑内酯的包封率为5％～8％。

7、在一些实施方式中，吸入式佛手柑内酯纳米脂质体的zeta电位为-6～-8mv。

8、zeta电位绝对值越大代表纳米材料稳定性越高，本发明中纳米脂质体的zeta电位绝对值达到6～8，说明脂质体具有良好的稳定性。与此同时，纳米脂质体的zeta电位为负值，说明它们可能可以通过减少与带负电荷的呼吸道粘蛋白的相互作用而增强在呼吸道黏液中的扩散效率。

9、在一些实施方式中，吸入式佛手柑内酯纳米脂质体为球形，平均直径为105～120nm。

10、根据本发明的另一个方面，提供了一种吸入式佛手柑内酯纳米脂质体的制备方法，包括如下步骤：

11、s1.将dppc、胆固醇、mpeg2000-dspe和佛手柑内酯溶于溶剂中，除去溶剂形成薄膜；

12、s2.向步骤s1形成的薄膜中加入水性介质，在50～70℃下使薄膜充分水化脱落，即可得到吸入式佛手柑内酯纳米脂质体。

13、步骤s2中薄膜水化的温度对本发明中脂质体的制备具有重要影响。温度过高，容易对单体活性产生影响，温度过低，容易导致水化过程不充分，且温度对所得脂质体的zeta电位也有影响。在50～70℃下使薄膜水化脱落，所得脂质体能够充分水化并带有合适的zeta电位，且脂质体内单体仍具有优异活性。

14、在一些实施方式中，步骤s1中的溶剂为氯仿。

15、在一些实施方式中，步骤s1中先将dppc、胆固醇和mpeg2000-dspe溶于氯仿中，而后用氯仿溶解佛手柑内酯，再加入到反应体系中。

16、在一些实施方式中，步骤s1通过在230mbar下进行旋蒸除去溶剂。

17、在一些实施方式中，步骤s2中水性介质为pbs缓冲液。

18、在一些实施方式中，步骤s2中加入水性介质后通过磁力搅拌的方式使薄膜充分水化，磁力搅拌器转速为300rpm。

19、磁力搅拌转速过高，容易产生泡沫，体系产生多个相界面导致性质不均匀，影响脂质体的各项性能；转速过低水化不充分。

20、在一些实施方式中，步骤s2中使薄膜充分水化时可以通过手动旋转反应体系的方式使水性介质充分接触到薄膜，辅助薄膜水化。

21、在一些实施方式中，步骤s2中使薄膜充分水化的时间为30min。

22、在一些实施方式中，步骤s2中水化结束后还包括超声分散、过滤、超滤和定容的步骤。

23、在一些实施方式中，上述超声分散的步骤为：将薄膜充分水化脱落得到的悬液置于冰上进行超声，超声功率为20％，超声方式为每超声15s后暂停15s，30min后结束超声，得到超声分散后的悬液。

24、在一些实施方式中，上述过滤的步骤为：采用0.22μm的过滤器过滤收集超声分散后的悬液，重复三次，得到滤液。

25、在一些实施方式中，上述超滤的步骤为：在3000rpm的转速下对过滤得到的滤液进行离心超滤，离心时间为1h，离心完成后得到纯化的佛手柑内酯纳米脂质体。这一步的目的在于除去多余的纳米脂质体和游离的佛手柑内酯单体。

26、在一些实施方式中，上述定容的步骤为：采用pbs缓冲液对纯化的佛手柑内酯纳米脂质体进行定容，定容至3ml，得到吸入式佛手柑内酯纳米脂质体溶液，备用。

27、根据本发明的另一个方面，提供了吸入式佛手柑内酯纳米脂质体在治疗急性肺损伤的药物中的应用。

28、在一些实施方式中，上述治疗急性肺损伤的药物的给药方式为雾化吸入给药。

29、采用雾化吸入的方式给药，可以使纳米脂质体更好地靶向肺部，直达病灶，相比口服等给药方式，具有更好的肺部靶向性和更好的生物学分布。

30、根据本发明的另一个方面，提供了吸入式佛手柑内酯纳米脂质体在抑制m1巨噬细胞表达的药物中的应用。

31、根据本发明的另一个方面，提供了吸入式佛手柑内酯纳米脂质体在促进m2巨噬细胞表达的药物中的应用。

32、和现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

33、本发明所提供的吸入式佛手柑内酯纳米脂质体，具有良好的生物安全性，可以通过雾化吸入的方式靶向作用于肺部，降低肺组织中炎症因子il-6、il-1β和tnf-α的表达水平，同时可以抑制肺组织中m1巨噬细胞的极化、促进肺组织中m2巨噬细胞的极化，在治疗ali时具有比游离佛手柑内酯单体更显著的作用。