一种非洲猪瘟病毒pH108R蛋白的抗原表位及基于此的单克隆抗体及相关应用

本发明属于基因工程，尤其涉及一种非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的抗原表位及基于此的单克隆抗体及相关应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是由非洲猪瘟病毒(african swinefevervirus，asfv)引起的一种致命的高度传染性猪病，感染后猪的死亡率可高达100％，对全球养猪业、粮食安全和农村发展都构成了重大威胁。目前，该疾病被世界动物卫生组织(world organization foranimal health，woah)列为法定报告的疾病。

2、非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科(asfarviridae)的唯一成员，它是一种双链核质大dna病毒(nucleocytoplasmic large dnaviruses，ncldv)家族的虫媒dna病毒，是非洲猪瘟流行的病原体。根据病毒株的不同，dna的大小在170～190kbp之间，可编码150多个开放阅读框(orf)，编码150～200种病毒蛋白，其中包括68种结构蛋白和100多种非结构蛋白。以asfvp72基因c端478bp可变区的核苷酸序列为基础，asfv可分为24种基因型。asfv颗粒是直径为200nm的二十面体多层结构，从外到内包括包膜、衣壳、内囊膜、核壳和内核。ph108r蛋白位于病毒粒子内层囊膜中，其n-末端含有一段跨膜结构域。ph108r蛋白在asfv感染晚期表达，该蛋白能够引起免疫反应，对于病毒的复制和形态发生发挥着重要作用。有研究发现，h108r基因是一种新的病毒毒力决定簇，将它从asfv-g基因组中删除后，可显著降低病毒在家猪体内的毒力。此外在接种含有h108r基因缺失的重组病毒asfv-g-δh108r后存活下来的动物，可以抵御强毒性亲本病毒的攻击。尽管asfv-g-δh108r具有残留毒性，但即使在低剂量下也能提供保护作用，这表明其有可能作为一种额外的基因缺失，以增加现有候选疫苗的安全性。

3、目前，有关asfvph108r蛋白的研究甚少。对ph108r蛋白进行重组表达，并制备其特异性的单克隆抗体，进而利用扫描多肽技术对ph108r蛋白进行筛选和鉴定，对深入研究ph108r蛋白生物学功能具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的抗原表位及基于此的单克隆抗体及相关应用，该单克隆抗体能够特异性识别非洲猪瘟病毒ph108r蛋白上的40snihipyqwla50序列区域，这是首次报道的ph108r蛋白的b细胞表位，为现有技术研发相关技术奠定相关研发基础。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供了一种非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的抗原表位，所述抗原表位位于非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的40～50位处，所述抗原表位的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明还提供了非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的抗原表位在制备非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体中的应用，所述抗原表位如上所示。

5、本发明还提供了一种抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与上述的抗原表位特异性结合。

6、在本发明中，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示。

7、本发明还提供了一种编码抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体的核酸，所述编码单克隆抗体的重链可变区的核酸如seq id no.4所示，所述编码单克隆抗体的轻链可变区的核酸如seq id no.5所示。

8、本发明还提供了一种表达载体，所述表达载体包括权上述的核酸。

9、本发明还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括上述的表达载体。

10、本发明还提供了一种检测非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括上述的抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体和/或上述的核酸和/或上述的表达载体和/或上述的宿主细胞。

11、本发明还提供了上述的抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体和/或上述的核酸和/或上述的表达载体和/或上述的宿主细胞在制备抑制和/或中和非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的药物中的应用。

12、本发明公开了以下技术效果：

13、本发明提供的非洲猪瘟病毒ph108r蛋白单克隆抗体利用大肠杆菌表达系统表达ph108r蛋白，再将纯化的ph108r蛋白作为免疫原，通过免疫学方法免疫balb/c小鼠制备而成。该单克隆抗体能够特异性的识别并结合非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的40～50位特定的线性b细胞表位区域，具有特异性强、稳定性好的优势，这为进一步研究ph108r蛋白的生物学功能提供了有价值的工具。

技术特征：

1.一种非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的抗原表位，其特征在于，所述抗原表位位于非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的40～50位处，所述抗原表位的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的抗原表位在制备非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体中的应用，其特征在于，所述抗原表位如权利要求1所示。

3.一种抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体能够与权利要求1所述的抗原表位特异性结合。

4.根据权利要求1所述抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示。

5.一种编码抗非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的单克隆抗体的核酸，其特征在于，所述编码单克隆抗体的重链可变区的核酸如seq id no.4所示，所述编码单克隆抗体的轻链可变区的核酸如seq id no.5所示。

6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求5所述的核酸。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求6所述的表达载体。

8.一种检测非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的单克隆抗体和/或权利要求5所述的核酸和/或权利要求6所述的表达载体和/或权利要求7所述的宿主细胞。

9.权利要求3所述的单克隆抗体和/或权利要求5所述的核酸和/或权利要求6所述的表达载体和/或权利要求7所述的宿主细胞在制备抑制和/或中和非洲猪瘟病毒ph108r蛋白的药物中的应用。

技术总结本发明公开了一种非洲猪瘟病毒pH108R蛋白的抗原表位及基于此的单克隆抗体及相关应用，属于基因工程技术领域，本发明以pH108R重组蛋白作为免疫原免疫小鼠，利用细胞融合以及亚克隆技术得到细胞株产生的单克隆抗体，该单克隆抗体可特异性识别并结合pH108R蛋白上的<supgt;40</supgt;SNIHIPYQWLA<supgt;50</supgt;序列区域。本发明鉴定得到了非洲猪瘟pH108R表位肽，并制备得到了与非洲猪瘟pH108R蛋白特异性结合的单克隆抗体，为制备非洲猪瘟检测试剂盒奠定了基础。技术研发人员：王爱萍,刘燕凯,张改平,周景明,张勇,陈玉梅,王选年受保护的技术使用者：郑州大学技术研发日：技术公布日：2024/11/18