基于UPLC-Q-TOFMS技术鉴定苦杏仁的方法与流程

本发明属于中药材鉴定，具体涉及一种基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法。

背景技术：

1、中药在我国有着几千年的应用历史，是我国传统医药的重要组成部分。中药质量是确保中药临床应用安全、有效的前提，而中药存在不同基原、不同产地、不同用药部位等多方面因素，加大了中药质量评价的难度。早期的中药质量评价方法主要是通过对性状的鉴别(外观形状、颜色、气味等)进行感官评价；目前中药质量控制评价模式主要包括：基于单一指标成分的质量控制、基于多成分的整体质量控制、基于生物活性成分的质量控制、基于临床用药的质量控制和“辨状论质”质量评价体系等。随着现代科技的发展，借助现代仪器分析技术对中药化学成分进行分析，并运用化学模式识别方法构建中药质量化学评价模式，有利于保障中药临床使用的安全、有效。

2、苦杏仁始载于《神农本草经》，后被历版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)收载。其来源于蔷薇科植物山杏prunus armeniaca var.ansu，西伯利亚杏p.sibirica，东北杏p.mandshurica或杏p.armeniaca的干燥成熟种子，有小毒，具有降气止咳平喘、润肠通便之功效，主要用于治疗咳嗽气喘、胸满痰多、肠燥便秘等，在中药制剂中广泛使用。不同基原苦杏仁的化学成分含量差异较大，严重影响了苦杏仁的用药安全和质量。目前，鉴别苦杏仁的方法有很多，如中国专利申请cn113008817a公开了一种基于高光谱成像技术快速鉴别苦杏仁真伪优劣的方法，通过采集不同产地苦杏仁样本及易混淆品种桃仁样本的高光谱图像，基于不同预处理方法和分类模型成对组合比较，实现了苦杏仁药材不同产地分类及真伪鉴别；进一步基于苦杏仁苷含量的特征波段提取方法，建立了苦杏仁药材中苦杏仁苷含量的预测模型，实现了苦杏仁药材的品质优劣鉴别。然而该方法操作复杂，不能对不同基原苦杏仁药材进行鉴别。因此研发出一种操作简单，易于实施，能够快速有效地鉴别不同基原苦杏仁药材的方法迫在眉睫。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法。本发明的方法操作简单，易于实施，能够快速有效地鉴别山杏、东北杏、北杏、甜杏仁和杏5种不同苦杏仁药材，并对其差异成分进行鉴别，为多来源药材的鉴别和质量评价提供了技术支撑。

2、本发明的技术方案是：

3、一种基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(uplc-q-tofms)技术对样品进行测定，包括以下步骤：

4、s1供试品溶液制备：

5、s2采用uplc-q-tofms技术对步骤s1所得供试品溶液进行检测，得到化学成分物质色谱峰；

6、s3利用agilent mass hunterprofinder软件对供试品溶液的质谱数据进行处理，提取形成总离子流图，并根据已知基原样品寻找差异特征性成分。

7、进一步地，超高效液相色谱条件包括：

8、色谱柱为150×2.1mm，16μm cortecs t3色谱柱；流动相a为乙腈，流动相b为体积分数为0.1％的甲酸水溶液；梯度洗脱条件为：0～1min，流动相a为2％；1.0～12.0min，流动相a为2％→9％；12.0～20.0min，流动相a为9％→60％；20.0～35.0min，流动相a为60％→95％；35.0～40.0min，流动相a为95％；40.0～40.1min，流动相a为95％→2％；40.1～45min，流动相a为2％；流速为0.3ml/min；进样量为5μl。

9、进一步地，柱温为28-32℃。

10、进一步地，质谱条件包括：

11、agilent dual ajs esi离子源，正负离子扫描；干燥气为n2，干燥气温度为280-320℃；雾化气为n2，雾化气压力为30-40psi；干燥气的流量为6-10l/min；鞘气温度为320-360℃；鞘气流量为9-12l/min；电喷雾电压为3000-4000v；毛细管出口电压为150-180v；锥孔电压为60-70v；八极杆电压为700-800v；扫描范围：m/z 100-1000。

12、进一步地，所述步骤s1供试品溶液制备的具体方法为：取供试品，粉碎后过二号筛，取过筛后的粉末，置于20ml量瓶中，加入甲醇水溶液，超声，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

13、进一步地，取0.2g过筛后的粉末。

14、进一步地，所述甲醇水溶液的体积分数为70-80％。

15、进一步地，所述甲醇水溶液的体积分数为75％。

16、进一步地，超声时间为25-35min，超声功率为150-250w。

17、《中国药典》(2020年版)中苦杏仁的基原为蔷薇科植物山杏prunus armeniacal.var.ansu maxim.、西伯利亚杏prunus sibirica l.、东北杏prunus mandshurica(maxim.)koehne或杏prunus armeniaca l.。目前，市场销售的不同基原苦杏仁药材，其性状、含量和特征图谱没有差异。现在区分药材不同基原一般采用dna条形码鉴定或原植物形态鉴定两种方式，但是苦杏仁在培育过程过程中存在杂交、基因交流等情况，难以通过上述两种方式区分不同基原。本发明采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(uplc-q-tofms)技术对样品进行测定，能够对差异成分峰进行定性识别，从而明确并识别3种不同基原苦杏仁的差异成分，这些成分可以作为快速区分不同基原苦杏仁药材的指标，为苦杏仁药材的质量控制和综合利用提供科学依据。

18、与现有技术相比，本发明具有以下优势：

19、(1)本发明提供的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法操作简单，易于实施。

20、(2)本发明提供的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法能够快速区分不同基原苦杏仁药材，为苦杏仁药材的质量控制和临床疗效具有重要的意义。

21、(3)本发明提供uplc-q-tofms方法测定不同基原的苦杏仁总离子图，并通过提取离子色谱图，确认其中4个成分能成为区分山杏、东北杏、北杏和杏的差异成分。

22、(4)本发明不局限于本研究的三种苦杏仁，采用同样的方法和手段也可以建立用于其他苦杏仁药材(如北杏仁、甜杏仁等)的鉴别方法。

23、(5)本发明建立的苦杏仁的uplc-q-tofms鉴定方法，可以更快、更直接地获得苦杏仁药材基原信息，减少了主观判断植物形态而人为处理的可能性。

技术特征：

1.一种基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱串联色谱四级杆飞行时间质谱连用技术对样品进行测定，包括以下步骤：s1供试品溶液制备：

2.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，超高效液相色谱条件包括：色谱柱为150×2.1mm，16μm cortecs t3色谱柱；流动相a为乙腈，流动相b为体积分数为0.1％的甲酸水溶液；梯度洗脱条件为：0～1min，流动相a为2％；1.0～12.0min，流动相a为2％→9％；12.0～20.0min，流动相a为9％→60％；20.0～35.0min，流动相a为60％→95％；35.0～40.0min，流动相a为95％；40.0～40.1min，流动相a为95％→2％；40.1～45min，流动相a为2％；流速为0.3ml/min；进样量为5μl。

3.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，柱温为28-32℃。

4.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，质谱条件包括：agilent dual ajs esi离子源，正负离子扫描；干燥气为n2，干燥气温度为280-320℃；雾化气为n2，雾化气压力为30-40psi；干燥气的流量为6-10l/min；鞘气温度为320-360℃；鞘气流量为9-12l/min；电喷雾电压为3000-4000v；毛细管出口电压为150-180v；锥孔电压为60-70v；八极杆电压为700-800v；扫描范围：m/z 100-1000。

5.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，所述步骤s1供试品溶液制备的具体方法为：取供试品，粉碎后过二号筛，取过筛后的粉末，置于20ml量瓶中，加入甲醇水溶液，超声，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

6.根据权利要求5所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，取0.2g过筛后的粉末。

7.根据权利要求5所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，所述甲醇水溶液的体积分数为70-80％。

8.根据权利要求7所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，所述甲醇水溶液的体积分数为75％。

9.根据权利要求5所述的基于uplc-q-tofms技术鉴定苦杏仁的方法，其特征在于，超声时间为25-35min，超声功率为150-250w。

技术总结本发明属于中药材鉴定技术领域，具体涉及一种基于UPLC‑Q‑TOFMS技术鉴定苦杏仁的方法。本发明提供的基于UPLC‑Q‑TOFMS技术鉴定苦杏仁的方法，采用超高效液相色谱串联色谱四级杆飞行时间质谱连用技术对样品进行测定，包括以下步骤：S1供试品溶液制备：S2采用UPLC‑Q‑TOFMS技术对步骤S1所得供试品溶液进行检测，得到化学成分物质色谱峰；S3利用Agilent Mass HunterProfinder软件对供试品溶液的质谱数据进行处理，提取形成总离子流图，并根据已知基原样品寻找差异特征性成分。本发明操作简单，易于实施，能够快速有效地鉴别不同基原苦杏仁药材，并对其差异成分进行鉴别，为多来源药材的鉴别和质量评价提供了技术支撑。技术研发人员：陈锦霞,周熙,高永坚,林碧珊,黄芳,洪婉婷,李培荣,杨敏娟,谢瑞强,李娜,汤春花受保护的技术使用者：国药集团广东环球制药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/21