生物标志物在制备诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用的制作方法

本公开涉及生物医学，尤其涉及一种生物标志物在制备诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用。

背景技术：

1、真皮成纤维细胞(fibroblast，fb)是皮肤真皮层的主要细胞类型，负责合成胶原蛋白、弹性蛋白和其他细胞外基质(ecm)蛋白，这些蛋白对于维持皮肤的结构和功能至关重要。随着年龄的增长，真皮成纤维细胞会出现衰老现象，这通常被称为细胞衰老或复制性衰老，这一过程与皮肤的整体衰老密切相关。细胞衰老的特征包括细胞增殖能力的下降、细胞形态和功能的变化、细胞周期的停滞以及细胞分泌表型的改变。在真皮成纤维细胞中，衰老会导致胶原蛋白和弹性蛋白的合成减少，同时增加基质金属蛋白酶(mmps)的表达，这些酶可以降解ecm蛋白，导致皮肤弹性和紧致度的下降。此外，衰老的成纤维细胞还会产生更多的促炎细胞因子和自由基，如白细胞介素(ils)、肿瘤坏死因子α(tnf-α)和活性氧物种(ros)，这些分子可以引发或加剧炎症反应，损害周围的健康细胞，并加速皮肤老化过程。皮肤衰老的另一个重要特征是dna损伤的积累，这会影响到真皮成纤维细胞的正常功能。随着时间的推移，dna损伤的修复能力下降，导致基因稳定性和细胞功能的进一步恶化。总的来说，真皮成纤维细胞的衰老与皮肤衰老有着密切的联系。随着成纤维细胞功能的下降，皮肤的再生能力和修复能力减弱，最终导致皮肤的外观和功能发生明显的衰老变化。因此，研究如何延缓或逆转成纤维细胞的衰老过程，对于开发抗衰老治疗策略具有重要意义。

2、micrornas(mirnas)是一类在转录后水平调控基因表达的短非编码rna分子。它们通过与目标mrna的3'utr(非翻译区)结合，调控细胞的分化、增殖、凋亡和衰老等过程。mirnas在成纤维细胞衰老中的作用表明，它们可以作为细胞衰老状态的生物标志物，并且可能成为抗衰老治疗的新靶点。尽管已有研究揭示了mirnas在细胞衰老中的作用，但关于很多mirnas作为成纤维细胞衰老标志物的具体应用尚未明确。

技术实现思路

1、为克服相关技术中存在的问题，本说明书提供了一种生物标志物在制备诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用，在对成纤维细胞衰老机制的深入研究、衰老标志物的发现、以及潜在的抗衰老治疗手段方面均具有重要意义。

2、根据本公开的第一方面，提供一种生物标志物在制备诊断、辅助诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用，所述生物标志物为成纤维细胞衰老生物标志物，包括：

3、mir-503-5p，核苷酸序列如seq id no:1所示。

4、在一些示例性实施例中，所述mir-503-5p在衰老成纤维细胞中的表达量高于在年轻成纤维细胞中的表达量。

5、根据本公开的第二方面，提供一种用于检测体外真皮层组织的试剂盒组，包括rna逆转录试剂盒和pcr扩增试剂盒，所述rna逆转录试剂盒用于将包含成纤维细胞衰老生物标志物的rna进行逆转录合成cdna，所述pcr扩增试剂盒用于将逆转录合成的cdna进行扩增；

6、其中，所述成纤维细胞衰老生物标志物包括mir-503-5p，核苷酸序列如seq idno:1所示。

7、在一些示例性实施例中，所述rna逆转录试剂盒包括：

8、反转录引物，核苷酸序列如seq id no:2所示。

9、在一些示例性实施例中，所述pcr扩增试剂盒包括：

10、正向引物，核苷酸序列如seq id no:3所示；

11、反向引物，核苷酸序列如seq id no:4所示。

12、根据本公开第三方面，提供一种检测体外真皮层组织的方法，采用如第二方面所述的用于体外真皮层组织样本检测的试剂盒组进行检测。

13、在一些示例性实施例中，检测体外真皮层组织的方法包括：

14、提取真皮层组织中的rna，采用所述rna逆转录试剂盒逆转录合成cdna；

15、采用所述pcr扩增试剂盒将逆转录合成的cdna进行扩增；

16、测定所述mir-503-5p的表达量。

17、根据本公开第四方面，提供一种改善真皮层组织衰老的药物，包括：

18、mir-503-5p抑制剂，用于下调衰老成纤维细胞中mir-503-5p的表达量，所述mir-503-5p的核苷酸序列如seq id no:1所示。

19、在一些示例性实施例中，所述mir-503-5p抑制剂能够提升衰老成纤维细胞的活率。

20、根据本公开第五方面，提供如第二方面所述的用于检测体外真皮层组织的试剂盒组、如第三方面所述的检测体外真皮层组织的方法或如第四方面所述的改善真皮层组织衰老的药物在制备诊断、辅助诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用。

21、本公开提供的技术方案可以包括以下有益效果：

22、本公开采集了20-30岁之间人群(年轻组，y组)和50-70岁之间的人群(衰老组，s组)的真皮层组织样本，利用rt-pcr技术检测两组人群真皮层组织内mir-503-5p的表达量差异。结果显示，衰老组内mir-503-5p的表达量明显高于年轻组，说明mir-503-5p可能是一种潜在的真皮层组织衰老的标志物。

23、本公开利用自然传代的方式体外诱导成纤维细胞衰老，构建了fb细胞衰老模型(将4代fb细胞设置为年轻组，20代细胞设置为衰老组)，并利用rt-pcr技术检测两组人群真皮层组织内mir-503-5p的表达量差异。结果显示，衰老组内mir-503-5p的表达量明显高于年轻组，进一步说明mir-503-5p可能是一种潜在的真皮层组织衰老的标志物。

24、本公开对mir-503-5p抑制剂在fb细胞上的抗衰效果进行验证，将年轻fb细胞和衰老fb细胞分别作为对照组中的年轻组和衰老组，用转染mir-503-5p抑制剂(mir-503-5pinhibitor)的衰老fb细胞作为药物处理组(mir-503-5p-in)。结果显示，采用c12fdg染色法，相对于年轻组，衰老组中c12fdg染色的平均荧光强度显著增加，而相对于衰老组，药物处理组组平均荧光强度显著降低。采用cck8试剂盒，相较于年轻组，衰老组的衰老fb细胞活率有明显的下降，而相较于衰老组，药物处理组的fb细胞活率明显上升。以上说明mir-503-5p-in可以恢复衰老fb细胞的细胞活率。

25、本公开通过一系列实验，发现mir-503-5p在年轻与衰老人群中的表达存在显著差异，这一结果为识别和监测皮肤衰老提供了一个新的特异性的生物标志物。该生物标志物的发现，提供了一种可能改善皮肤健康、增强皮肤再生能力和延缓衰老过程的新方法。

26、综上，本公开在对成纤维细胞衰老机制的深入研究、衰老标志物的发现、以及潜在的抗衰老治疗手段方面均具有重要意义。

27、应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本说明书。

技术特征：

1.一种生物标志物在制备诊断、辅助诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为成纤维细胞衰老生物标志物，包括：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述mir-503-5p在衰老成纤维细胞中的表达量高于在年轻成纤维细胞中的表达量。

3.一种用于检测体外真皮层组织的试剂盒组，其特征在于，包括rna逆转录试剂盒和pcr扩增试剂盒，所述rna逆转录试剂盒用于将包含成纤维细胞衰老生物标志物的rna进行逆转录合成cdna，所述pcr扩增试剂盒用于将逆转录合成的cdna进行扩增；

4.根据权利要求3所述的用于检测体外真皮层组织的试剂盒组，其特征在于，所述rna逆转录试剂盒包括：

5.根据权利要求3所述的用于检测体外真皮层组织的试剂盒组，其特征在于，所述pcr扩增试剂盒包括：

6.一种检测体外真皮层组织的方法，其特征在于，采用如权利要求3至5任一项所述的用于体外真皮层组织样本检测的试剂盒组进行检测。

7.根据权利要求6所述的检测体外真皮层组织的方法，其特征在于，包括：

8.一种改善真皮层组织衰老的药物，其特征在于，包括：

9.根据权利要求8所述的改善真皮层组织衰老的药物，其特征在于，所述mir-503-5p抑制剂能够提升衰老成纤维细胞的活率。

10.如权利要求3至5任一项所述的用于检测体外真皮层组织的试剂盒组、如权利要求6或7所述的检测体外真皮层组织的方法或如权利要求8或9所述的改善真皮层组织衰老的药物在制备诊断、辅助诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用。

技术总结本公开提供一种生物标志物在制备诊断、治疗真皮层组织衰老的产品中的应用，属于生物医学技术领域，生物标志物为成纤维细胞衰老生物标志物，该成纤维细胞衰老生物标志物包括miR‑503‑5p，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本公开在对成纤维细胞衰老机制的深入研究、衰老标志物的发现、以及潜在的抗衰老治疗手段方面均具有重要意义。技术研发人员：饶翔,李宏宇,高云亮,黄汇,吴理达,唐杰,牛萌萌受保护的技术使用者：南京安生诺科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/12/2