穿心莲内酯分子印迹隐性药物载体及其制备方法

本发明涉及纳米级药物载体领域，特别是一种穿心莲内酯分子印迹隐性药物载体及其制备方法。

背景技术：

1、穿心莲内酯(andrographolide，adr)是爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和保肝利胆等作用。但穿心莲内酯本身存在稳定性差、水溶性低和生物利用度低等诸多不足，这极大限制了其临床应用。

2、分子印迹聚合物(molecular imprinted polymer,mip)是一种能够与特定模板分子具有亲和力的聚合物，目前，分子印迹聚合物已应用于纳米级药物载体领域，特别是在药物传递系统(drug delivery systems,dds)中显示出控释和大载药量的潜力。然而，对于尺寸在纳米级的mip药物载体，在生物体内常被免疫系统误判为病原体或其它有害实体，随后便被生物体内的免疫细胞清除，这使得携带药物的mip药物载体在血液中的循环时间较短，部分药物来不及释放便被清除，降低了治疗效果。

3、综上所述，基于分子印迹技术开发一种具有免疫逃逸性能的穿心莲内酯mip药物载体意义重大。

技术实现思路

1、本发明的目的是克服现有技术的不足，而提供一种穿心莲内酯分子印迹隐性药物载体及其制备方法，它解决了穿心莲内酯目前的临床应用存在稳定性差、水溶性低和生物利用度低的问题，还解决了mip药物载体在生物体内容易被免疫系统清除，导致治疗效果降低的问题。

2、本发明的技术方案是：穿心莲内酯分子印迹隐性药物载体，其组成原材料及各原材料重量份数如下：2-乙基-2-恶唑啉2.5～4.3份；碘1.529～2.584份；乙酸酐2.28～4.573份；粗载体0.332～0.968份；粗载体为穿心莲内酯分子印迹材料。

3、本发明进一步的技术方案是：其组成原材料及各原材料的重量份数如下：2-乙基-2-恶唑啉3.427份；碘2.03份；乙酸酐3.375份；粗载体0.578份。

4、本发明进一步的技术方案是：其组成原材料及各原材料的重量份数如下：2-乙基-2-恶唑啉3.427份；碘1.529份；乙酸酐2.28份；粗载体0.332份。

5、本发明进一步的技术方案是：其组成原材料及各原材料的重量份数如下：2-乙基-2-恶唑啉3.427份；碘2.584份；乙酸酐4.573份；粗载体0.968份。

6、本发明的技术方案是：一种制备穿心莲内酯分子印迹隐性药物载体的方法，步骤如下：

7、s01，制备粗载体：

8、a，制备涂有sio2薄层的fe3o4微球；

9、b，制备带有多层sio2的空心磁性介孔sio2微球；

10、c，将丙烯酰化β-环糊精接枝到b分步骤制备所得物；

11、d，c分步骤制备所得物与穿心莲内酯反应形成包合物；

12、e，d分步骤制备所得物中的穿心莲内酯与功能单体通过非共价键结合；

13、f，洗脱e分步骤制备所得物中的穿心莲内酯得到粗载体adr-mmip；

14、s02，制备药物载体：

15、a，基于碘与粗载体的取代反应制备adr/i-mmip；

16、b，将adr/i-mmip中的活性基团乙酰化；

17、c，基于聚(2-乙基-2-恶唑啉)与活性基团乙酰化的adr/i-mmip取代反应制备药物载体adr/peox-mmip。

18、本发明进一步的技术方案是：s01步骤还包括前置ⅰ和前置ⅱ步骤，前置ⅰ步骤设在a分步骤之前，前置ⅱ步骤设在c分步骤之前；前置ⅰ与前置ⅱ步骤无先后次序；

19、前置ⅰ：制备fe3o4微球：将fecl3·6h2o、c6h5o7na3·h2o和尿素溶解于超纯水中，充分搅拌，再加入聚丙烯酰胺继续搅拌直至完全溶解，得到ⅰ号溶液；将ⅰ号溶液转移至聚四氟乙烯衬里的高压釜中，200℃下加热12h，之后自然冷却至室温，用磁铁收集所得产物，再反复洗涤，最后真空干燥，得到fe3o4微球；

20、前置ⅱ：制备丙烯酰化β-环糊精：将β-环糊精溶解于koh溶液中，得到ⅱ号溶液；将ⅱ号溶液置于0～5℃的冰浴中，逐滴加入丙烯酰氯，得到带有絮状物的ⅲ号溶液；将ⅲ号溶液在40℃下反应6h，生成白色沉淀；分离沉淀物并置于乙醇中，将其置于0～12℃的冰箱中储存12h，最后真空干燥，得丙烯酰化β-环糊精，记为aa-β-cd。

21、本发明再进一步的技术方案是：s01步骤的各个分步骤详细展开如下：

22、a，制备涂有sio2薄层的fe3o4微球：取0.204份fe3o4微球超声分散于1号溶液中，得到fe3o4悬浮液；1号溶液由80.026份乙醇、20.627份超纯水和2.452份质量浓度为28％的氨水组成；将fe3o4悬浮液在搅拌条件下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后继续搅拌1h，之后用磁铁分离所得产物，再反复洗涤，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2；

23、b，制备带有多层sio2的空心磁性介孔sio2微球：取0.204份fe3o4&sio2真空干燥的粉末超声分散于120.364份乙醇中，再加入2.452份质量浓度为28％的氨水，得到2号溶液；取0.623份制孔剂超声分散并溶解于160份纯净水中，得到3号溶液；将2号溶液和3号溶液搅拌混合，得到1号混合液，将1号混合液保持搅拌状态下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后继续搅拌6h，之后用磁铁分离所得产物，再反复洗涤；然后将所得产物置于含有质量浓度为0.6％的nh4no3无水乙醇溶液中，于70℃下冷凝回流反应24h，以去除制孔剂，再用磁铁分离所得产物，之后反复洗涤，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2&msio2；

24、c，将丙烯酰化β-环糊精接枝到b分步骤制备所得物：取0.328份aa-β-cd溶解于10.01份有机溶剂中，加入氢化钠，在氮气氛围下搅拌，再过滤掉未反应的氢化钠，得到4号溶液；将4号溶液置于90℃下，搅拌添加0.124份3-缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷，添加完成后，在氮气氛围下继续搅拌5h，再加入0.423份fe3o4&sio2&msio2，于120℃下冷凝回流反应20h，之后用磁铁分离所得产物，再充分洗涤，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd；

25、d，c分步骤制备所得物与穿心莲内酯反应形成包合物：取0.223份fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd超声分散于30.267份超纯水中，再加入35.112份穿心莲内酯，继续超声分散6h后置于0～12℃的冰箱中储存12h，之后用磁铁分离所得产物，再反复洗涤，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd/adr；

26、e，d分步骤制备所得物中的穿心莲内酯与功能单体通过非共价键结合：取0.08份fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd/adr超声分散于17.235份甲醇中，再加入0.029份功能单体，功能单体为4-氨基-4'-甲基丙烯酰胺基偶氮苯，于室温下反应12h，使穿心莲内酯与功能单体充分预聚合；再加入0.446份二醇二甲基丙烯酸酯、0.13份n,n’-双(丙烯酰)胱胺、0.062份偶氮二异丁腈、0.0012份溴化铜和0.002份五甲基二乙烯三胺，在氮气氛围中置于70℃下反应24h，之后用磁铁分离所得产物，再充分洗涤，最后真空干燥，

27、得到未洗脱穿心莲内酯的adr-mmip；

28、f，洗脱e分步骤制备所得物中的穿心莲内酯得到粗载体adr-mmip：将未洗脱穿心莲内酯的adr-mmip用甲醇多次冲洗后，置于索氏提取器中，然后以体积分数为70％的甲醇和体积分数为30％的乙酸配置成的洗脱液反复洗脱穿心莲内酯，直至洗脱液中检测不到穿心莲内酯为止，再以甲醇反复洗涤，

29、最后真空干燥，即得到粗载体，记为adr-mmip。

30、本发明更进一步的技术方案是：s02步骤的各个分步骤详细展开如下：

31、a，基于碘与粗载体的取代反应制备adr/i-mmip；在烧瓶中加入4.732～6.874份二甲基甲酰胺、0.510～1.852份三苯基膦和1.529～2.584份碘，加热到70℃时加入0.332～0.968份粗载体，在氮气氛围下反应20h，然后加入1.5-4.6份的3mol/l的甲醇钠溶液，得到2号混合液，将2号混合液置于0～5℃的冰浴中反应20min，用磁铁分离所得产物，再反复洗涤，最后真空干燥，得到adr/i-mmip；

32、b，将adr/i-mmip中的活性基团乙酰化：在烧瓶中加入0.279～0.849份经真空干燥的adr/i-mmip、2.28～4.573份乙酸酐、0.003～0.005份4-二甲氨基吡啶及3.590～4.734份吡啶，在氮气氛围下，室温冷凝回流反应48h，得到5号溶液；将5号溶液倒入125.75～180.632份0～5℃的冰水中，之后用磁铁分离所得产物，再反复洗涤，最后真空干燥，得到活性基团乙酰化的adr/i-mmip；

33、c，基于聚(2-乙基-2-恶唑啉)与活性基团乙酰化adr/i-mmip取代反应制备药物载体adr/peox-mmip：在烧瓶中加入0.052～0.194份活性基团乙酰化adr/i-mmip、2.5～4.2份2-乙基-2-恶唑啉和14.209～16.305份乙腈，在氮气氛围下，于80℃冷凝回流反应72h，之后用磁铁分离所得产物，再反复洗涤，最后真空干燥，得到穿心莲内酯分子印迹隐性药物载体：adr/peox-mmip；反应过程中，2-乙基-2-恶唑啉通过阳离子开环聚合得到亲水性长链聚合物：聚(2-乙基-2-恶唑啉)。

34、本发明进一步的技术方案是：s01和s02步骤中涉及的物料份数均为重量份。

35、本发明再进一步的技术方案是：s01步骤b分步骤中的制孔剂为十六烷基三甲基溴化铵，s01步骤c分步骤中两次提及的有机溶剂均为n,n-二甲基甲酰胺。

36、s02步骤中，涉及的物料份数均为重量份。

37、本发明与现有技术相比具有如下优点：

38、1.其选用具有光/ph双响应特性的功能单体“4-氨基-4'-甲基丙烯酰胺基偶氮苯”和具有氧化还原响应特性的交联剂“n,n’-双(丙烯酰)胱胺”，并运用分子印迹技术及反向原子转移自由基聚合法，制备具有ph/氧化还原/光响应的粗载体；粗载体上引入聚(2-乙基-2-恶唑啉)，制备得到隐性穿心莲内酯印迹的聚(2-乙基-2-恶唑啉)药物载体adr/peox-mmip。

39、2.隐性穿心莲内酯印迹的聚(2-乙基-2-恶唑啉)药物载体adr/peox-mmip相比传统的穿心莲内酯药物制剂具有稳定性好、载药量大、精准释放及毒性低等特点。

40、3.药物载体(adr/peox-mmip)中引入的隐性材料聚(2-乙基-2-恶唑啉)，使药物载体能抑制巨噬细胞摄取，从而增加穿心莲内酯在血液中的循环时间，提升了治疗效果。

41、以下结合图和实施例对本发明作进一步描述。