一种莱略特菌及其在生防促生中的应用

本发明涉及农业微生物，具体而言，涉及一种莱略特菌及其在生防促生中的应用。

背景技术：

1、天麻是兰科植物，其块茎经干燥处理后是我国著名的传统名贵中药材，药食两用。天麻是一种异养型多年生草本植物，无根无叶绿体，既不能进行光合作用，又不能大量吸收土壤中的养分，依赖伴生蜜环菌从青冈木等木材中吸取木质素等营养。随着人们健康和保健意识提高，国内外市场对天麻产品的质量和产量的需求大幅上升，以及天麻由于野生天麻的价格居高不下。因此，天麻多为人工栽培和仿野生栽培，且栽培面积也随之扩大。萌发的种子在萌发菌的作用下长成白麻，再由蜜环菌提供营养长成箭麻，这一从种子萌发到长成箭麻的过程称为天麻的有性繁殖过程。

2、天麻栽培过程中，其生长发育不仅受到蜜环菌和种植温度、湿度、土壤的影响，菌材的品质和土壤微生物的影响也至关重要。在陕西汉中地区栽种天麻多采用青冈木树棒，天麻依靠蜜环菌从青冈木中吸收生长发育所需的营养。但是，据实地调研和当地种植户反应，青冈木滋生的一种真菌性白腐病害，严重干扰了蜜环菌对树棒营养的吸收，导致了天麻的减产或绝收。

3、天麻是异养植物，天麻、根际环境、微生物之间存在着一定的营养和生态循环关系，微生物在天麻的生长发育过程中及土壤环境中扮演者至关重要的角色。植物根际促生菌具有防治植物病害和促进植物生长的双重作用，采用植物根际有益细菌调控天麻生长的根际环境，降低不利因素对天麻的影响，可达到天麻高产优品的目的。

4、因此，针对天麻产量和品质有待提高的需求，以及青冈木滋生白腐病害的问题。筛选一种具有生防和促生潜力的有益细菌，一方面能够有效促进生长提高天麻产量，另一方面能够有效防治青冈木白腐病害，对于节约树木资源和绿色可持续种植天麻具有广泛的应用前景。

5、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种莱略特菌及其在生防促生中的应用以解决上述技术问题。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供了一种莱略特菌(lelliottia sp.)物种的细菌在防治植物白腐病害中的应用，莱略特菌的保藏号为cgmccno.27274。

4、本发明从天麻表面的根际土壤中分离筛选获得一株细菌(rt0s1)，经过鉴定，该菌株的16s rdna近缘序列为lelliottia aquatilis strain 6331-17,相似度达99.24％；lelliottia jeotgali strain pfl01,相似度达99.23％；lelliottia nimipressuralisstrain lmg 10245,相似度达99.09％。因此该菌株rt0s1属于莱略特菌属。

5、莱略特菌rt0s1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2023年05月06日，保藏名称为lelliottia sp.rtos1，保藏编号为cgmcc no.27274，鉴定结果为存活。分类命名为：莱略特菌lelliottiasp.。

6、在本发明应用较佳的实施方式中，莱略特菌物种的细菌通过合成铁载体以高效吸收三价铁，竞争病原菌的铁营养以限制其生长，以减少病原体对植物的伤害。

7、在本发明应用较佳的实施方式中，莱略特菌物种的细菌的16srrna与seq id no.1所示的序列具有至少96％的同一性。

8、例如具有至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的同一性。seq id no.1所示的序列为保藏号为cgmcc no.27061的菌的16srrna序列。

9、对于微生物而言，菌种是微生物分类的基本单位，由于微生物的种是一个基本分类单元，它是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近、与同属内的其他物种有着明显差异的一大群菌株的总称。同一微生物，会具有该种微生物共有相同或高度类似的表型特征和作用性质；且同一种微生物的不同菌株在作为分类鉴定上，其基因组是高度相似的，其在主要性状上是相同的，功能也是高度类似的。因此，同属于莱略特菌(lelliottia sp.)属的细菌也具有类似的生防效果。可以通过产铁载体减少病原体对植物的伤害。

10、在一种可选的实施方式中，莱略特菌物种的细菌的16s rrna与seq id no.1所示的序列具有至少99％的同一性。例如100％的同一性。

11、在本发明应用较佳的实施方式中，植物白腐病为天麻种植时天麻种植植物上的白腐病。

12、在本发明应用较佳的实施方式中，天麻种植植物选自植物的树干、树枝和树叶中的至少一种。

13、此外，天麻种植植物也可以是植物的锯末、基质等。

14、在本发明应用较佳的实施方式中，天麻种植植物选自青冈、栎树、槲栎、桦树、樱桃树和栗树中的任一种；

15、樱桃树包括不限于野樱桃，桦树包括不限于白桦树。

16、在一种可选的实施方式中，将莱略特菌物种的细菌对天麻种植植物进行浸泡、将莱略特菌物种的细菌喷施到天麻种植植物上。

17、通过浸泡能够对天麻种植植物的病原菌进行有效防治，本领域的技术人员容易实施：将天麻种植物完全浸没在生防菌液中，或者先对天麻种植物的其中一端或其中一部分进行浸泡，然后对天麻种植物的另外一端或另外一部分进行浸泡。

18、喷施的方式包括不限于：将待喷施菌的菌粉制备菌液，然后进行喷施；或者将菌液与溶剂配伍后，用于喷施。配伍比例根据病害的严重情况进行调整。

19、喷施可以针对天麻种植植物的表层进行喷施，喷施次数和剂量可以根据需要进行自适应调整。表层包括不限于上表层和下表层。

20、在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-120min；在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-60min；在一种可选的实施方式中，天麻种植植物表面干燥后进行天麻的有性种植或无性种植。

21、浸泡时间例如是10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min或60min，也可以是选自10-60min之间的任意一个点值。优选为30min。

22、在一种可选的实施方式中，莱略特菌物种的细菌用于防治天麻有性繁殖期和育棒阶段的青冈木白腐病害。

23、在一种可选的实施方式中，莱略特菌物种的细菌的活菌数为1×106cfu/ml-1×108cfu/ml。在一种可选的实施方式中，莱略特菌物种的细菌的活菌数为1×106cfu/ml、1×107cfu/ml或1×108cfu/ml。

24、在一种可选的实施方式中，莱略特菌物种的细菌的活菌数为1×106cfu/ml-1×107cfu/ml；

25、在一种可选的实施方式中，天麻种植植物白腐病害是指由真菌引起的白腐病。

26、在本发明应用较佳的实施方式中，莱略特菌物种的细菌是指：莱略特菌物种的细菌或其培养物；

27、在一种可选的实施方式中，培养物是指莱略特菌物种的细菌的发酵液、发酵上清液、菌泥或发酵液的溶出物。

28、菌泥可以是离心或静置沉降获得。

29、在一种可选的实施方式中，上述米氏假单胞菌物种的细菌包括不限于米氏假单胞菌物种的细菌的浓缩物、糊化物、干燥物、液态物、稀释物和破碎物中的至少一种。干燥物包括不限于喷雾干燥物、冷冻干燥物、真空干燥物、滚筒干燥物等。

30、第二方面，本发明还提供了一种莱略特菌物种的细菌在促进天麻生长中的应用，莱略特菌的保藏号为cgmcc no.27274；

31、在一种可选的实施方式中，莱略特菌通过如下至少一种方式促进天麻生长：

32、(1)分泌iaa；(2)溶解有机磷；(3)溶解无机磷；(4)产铁载体；(5)提高天麻的数量；(6)提高天麻的总重量和/或单个天麻的平均重量；和(7)促进天麻地下根的生长。

33、发明人发现，莱略特菌能够分泌iaa、溶解无机磷和有机磷，能够产铁载体，能够促进天麻地下根的生长，可以提高天麻的数量和重量。上述促生包括不限于：略微或明显提高天麻的数量，和/或，略微或明显重量(包括不限于单个天麻的重量)。

34、在一种可选的实施方式中，将莱略特菌物种的细菌对天麻种植植物进行浸泡、将莱略特菌物种的细菌喷施到天麻种植植物上；

35、在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-120min。在一种可选的实施方式中，浸泡时间为10-60min。

36、在一种可选的实施方式中，每1l的包括莱略特菌物种的细菌的菌液浸泡表面积0.8-1.5平方米的天麻种植植物。例如每1l的包括莱略特菌物种的细菌的菌液浸泡表面积1平方米的天麻种植植物。

37、在一种可选的实施方式中，天麻种植植物表面干燥后进行天麻的有性种植或无性种植；

38、在一种可选的实施方式中，莱略特菌物种的细菌的活菌数为1×106cfu/ml-1×108cfu/ml。

39、第三方面，本发明还提供了一种莱略特菌，其保藏号为cgmccno.27274。

40、第四方面，本发明还提供了一种菌剂，其包括上述的莱略特菌。

41、在一种可选的实施方式中，菌剂为固体、液体或半固体；

42、在一种可选的实施方式中，菌剂还包括载体和/或辅助材料；

43、在一种可选的实施方式中，载体或辅助材料选自：

44、保护剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、香料、防腐剂、稳定剂、悬浮剂、分散剂和稀释剂中的至少一种。

45、示例包括：赋形剂，例如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙、碳酸钙；粘合剂，例如纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖、淀粉；崩解剂，例如淀粉、水解淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙盐、羟丙基淀粉、乙二醇淀粉钠、碳酸氢钠、磷酸钙、柠檬酸钙；润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、月桂基硫酸钠；香料，例如柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸、橙粉；防腐剂，例如苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯)；稳定剂，例如柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸和来自titriplex系列的多羧酸，例如二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)；悬浮剂，例如甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸铝；分散剂；稀释剂，例如水、有机溶剂；蜡、脂肪和油，例如蜂蜡、可可脂；聚乙二醇；白凡士林等。

46、第五方面，本发明还提供了上述菌剂的制备方法，将上述的莱略特菌进行活化培养后，在30±0.5℃培养；

47、在一种可选的实施方式中，活化培养是将莱略特菌接种于lb液体培养基中，27.5-30.5℃培养20-24h制成种子液。

48、第六方面，本发明还提供了一种组合物，其包括上述的莱略特菌。

49、组合物的形态包括不限于固体、液体或半固体。半固体例如是膏剂等。将该组合物用于天麻种植植物的生物防治和/或促生。

50、本发明具有以下有益效果：

51、本发明分离筛选出的天麻生防促生莱略特菌rt0s1，能够分泌iaa、铁载体、溶解无机磷和有机磷。该菌株制备的菌剂对天麻具有促生效果，尤其是有性繁殖期的天麻。对天麻菌材青冈木滋生的白腐病害具有明显的生防效果，rt0s1菌株兼具促生和防病作用，施用后能够降低化学农药的使用量，促进天麻产业绿色发展，具有广阔的应用前景。