一种含有纳米硒的生物刺激素CMCS@AZO@SeNPs的制备方法与流程

本发明涉及一种含有纳米硒的生物刺激素cmcs@azo@se nps的制备方法，属于农药制剂研制。

背景技术：

1、嘧菌酯(azo)属于甲氧基丙烯酸酯类难溶性化合物，既能抑制菌丝生长又能抑制孢子萌发并且对几乎所有真菌病害都具有保护、治疗和铲除作用，并且还具有一定内吸性和横向输导作用。由于它杀菌效果极佳、杀菌范围极宽，毒性小，对现有杀菌剂无交互抗性和适用作物广，因而成为目前使用最广泛的杀菌剂之一。利用创新纳米技术来提高其溶解性等，改善农药的有效利用率，增强对植物病害的防治能力，从而实现农药提质增效。农药的纳米配方、纳米封装和功能化纳米材料的使用为植物提供了精准且可控的活性成分，并减少了流失，利用纳米形式的智能输送系统为农业可持续发展开辟了新途径。近年来，纳米材料由于抗菌活性好，不产生抗性等优势被越来越多地应用于新型抗菌药物的开发。

技术实现思路

1、本发明针对上述现有问题，提供一种含有纳米硒的生物刺激素cmcs@azo@se nps的制备方法。

2、为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：一种含有纳米硒的生物刺激素cmcs@azo@se nps的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

3、步骤s1、纳米硒se nps的制备；

4、1.095gctab(十六烷基三甲基溴化铵)和160ml去离子水加入圆底烧瓶中进行加热搅拌，直至ctab完全溶解后降至室温，再依次加入405mg na2seo3和150mg zno，并在室温下搅拌6h；6h后通过超声溶解850mg维生素c(40ml)加入反应液，并将溶液ph值调节至7.4，在35℃条件下继续搅拌12h；再通过离心收集红色沉淀，再将红色沉淀重新超声分散于100ml乙醇-盐酸溶液中，并在70℃下酸洗回流12h后离心收集沉淀，用乙醇洗涤2遍，去离子水洗涤1遍；最后将所得沉淀进行冷冻干燥12h，得到黑色固体纳米硒se nps；

5、步骤s2、纳米硒m se nps的制备；

6、将经步骤s1合成得到的se nps超声分散于含有1.2g聚乙二醇400的70ml溶液当中，并在35℃条件下搅拌24h；然后在10000转/分的转速下离心收集se nps，并用去离子水洗涤2次，冷冻干燥12h后获得修饰后的纳米硒m se nps；

7、步骤s3、载嘧菌酯纳米颗粒azo@se nps的制备；

8、400mg azo(嘧菌酯)置于丙酮当中进行超声分散处理，配制质量浓度为5mg/ml的嘧菌酯溶液；然后加入200mg m se nps并进行超声处理，使m se nps完全分散于溶液当中；在室温下密闭搅拌12h，再开盖继续搅拌直至丙酮完全挥发；用乙醇和去离子水各洗涤1遍，冷冻干燥后得到azo@se nps；

9、步骤s4、cmcs@azo@se nps的制备；

10、200mg cmcs(羧甲基壳聚糖)溶解在30ml含有ph值为5.8的0.1mol/lmes(2-(n-吗啉)乙磺酸)的水溶液中，先在85℃下以800转/分转速搅拌1h，然后温度降至35℃后继续搅拌0.5h；再将550mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入上述溶液搅拌活化0.5h，之后再加入300mg n-羟基丁二酰亚胺继续活化1.5h；将上述合成的100mg azo@senps均匀分散于20ml纯水中，加入到反应溶液中，降低转速至500转/分继续搅拌24h，通过离心收集沉淀，用乙醇洗涤1遍和去离子水洗涤2遍后进行冷冻干燥，得到固体cmcs@azo@senps。

11、步骤s1中，所述乙醇-盐酸溶液，乙醇与盐酸的比例为95:5。

12、对步骤s1制备的纳米硒se nps进行表征时，表征方法为：

13、①形貌观察：将se nps样品镀金后利用扫描电镜观察样品形态；将se nps超声分散于乙醇后，取少量样品置于铜网上通过透射电镜进行观察；

14、②动态粒径测定：将se nps超声分散于去离子水中，并使用激光光散射仪器对纳米颗粒的粒径进行分析；

15、③介孔结构分析：称取一定量的se nps样品，在脱气温度120℃、脱气时间120min、环境温度30℃、饱和蒸气压101.49kpa和恒浴温度77.3k的条件下采用比表面积测定仪测定se nps的比表面积、孔径以及孔容，并评价se nps的介孔结构。

16、所述azo@se nps和cmcs@azo@se nps的表征时，方法为:

17、①红外光谱分析：将azo@se nps和cmcs@azo@se nps样品与溴化钾混合制成溴化钾压片，利用红外光谱仪对样品进行红外光谱分析；

18、②载药率测定：将50mg azo@se nps超声分散于乙腈当中，通过高效液相色谱测定载药率；azo高效液相色谱法检测条件为：色谱柱：c18色谱柱(250mm×0.46mm)；检测波长为210nm，温度为25℃；进样量为10μl，速度设定为1ml/min；流动相为乙腈/水＝60/40(v/v)，并根据下列公式计算载药率：

19、

20、③热重分析：将azo@se nps和cmcs@azo@se nps样品置于800℃和氮气条件下采用热重分析仪对样品进行热重分析。

21、利用上述方法制备的含有纳米硒的生物刺激素cmcs@azo@se nps对番茄晚疫病菌的抑菌效果。

22、硒作为一种微量元素，能促进作物生长，改善作物品质；以纳米硒为载体制备新型农药制剂对开发高效、低毒以及智能响应型环保农药有重要意义。本专利采用模板法制备se nps(纳米硒)，通过溶剂挥发法将azo(嘧菌酯)负载到se nps中，制备纳米颗粒azo@senps。研究结果表明azo已成功负载到se nps的孔道中，并且cmcs(羧甲基壳聚糖)成功对其进行包封，se nps对azo的载药率为19％，cmcs@azo@se nps的载药率为14.3％；释放试验表明cmcs@azo@se nps纳米颗粒呈ph响应特性；cmcs@azo@se nps对番茄植株有较好的安全性。本专利所制备的cmcs@azo@se nps为纳米农药新制剂的开发提供了理论基础，也为减药增效控害提供了新的途径。

23、通过本发明，本发明以na2seo3(亚硒酸钠)为硒源，采用模板法制备se nps，通过溶剂挥发法对嘧菌酯进行负载，再利用cmcs(羧甲基壳聚糖)对其进行包封，制备cmcs@azo@senps，并研究其载药能力、缓释性能、抑菌活性和对番茄植株的安全性。制备的嘧菌酯纳米农药可作为有效抑制植物病原菌的新型抗菌剂，为研发更多的用于植物病原菌防控的新型纳米抗菌剂提供了参考价值。

技术特征：

1.一种含有纳米硒的生物刺激素cmcs@azo@se nps的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种含有纳米硒的生物刺激素的制备方法，其特征是，步骤s1中，所述乙醇-盐酸溶液，乙醇与盐酸的比例为95:5。

3.根据权利要求1所述的一种含有纳米硒的生物刺激素的制备方法，其特征是，对步骤s1制备的纳米硒se nps进行表征时，表征方法为：

4.根据权利要求1所述的一种含有纳米硒的生物刺激素的制备方法，其特征是，所述azo@se nps和cmcs@azo@se nps的表征时，方法为:

5.利用权利要求1所述的方法制备的含有纳米硒的生物刺激素cmcs@azo@se nps对番茄晚疫病菌抑制作用。

技术总结本发明涉及一种含有纳米硒的生物刺激素CMCS@AZO@Se NPs的制备方法，包括以下步骤：步骤S1、纳米硒SE NPS的制备；步骤S2、纳米硒M Se NPs的制备；步骤S3、载嘧菌酯纳米颗粒Azo@Se NPs的制备；步骤S4、CMCS@Azo@Se NPs的制备；通过本发明，本发明以Na<subgt;2</subgt;SeO<subgt;3</subgt;（亚硒酸钠）为硒源，采用模板法制备Se NPs，通过溶剂挥发法对AZO（嘧菌酯）进行负载，再利用CMCS（羧甲基壳聚糖）对其进行包封，制备CMCS@AZO@Se NPs，并研究其载药能力、缓释性能、抑菌活性和对番茄植株的安全性。制备的嘧菌酯纳米农药可作为有效抑制植物病原菌的新型抗菌剂，为研发更多的用于植物病原菌防控的新型纳米抗菌剂提供了参考价值。技术研发人员：顾赟童,王子建,陈小军,王登伟,王智超,孟志远,胡婕妤,范添乐,任亚军,孙成受保护的技术使用者：上善康禾生物技术（扬州）有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/2