一种疫苗及其制备方法与流程

本发明属于疫苗，特别涉及一种疫苗及其制备方法。

背景技术：

1、蛋白抗原是一种能刺激免疫系统产生抗体的蛋白质，是疫苗的活性成分，根据其所带电荷量的情况可分为酸性蛋白抗原和碱性蛋白抗原，具体地，当整个蛋白质所带负电荷多，则为酸性蛋白抗原(等电点偏向酸性)，例如诺如gi.1抗原，而当所带正电荷多时，则为碱性蛋白抗原(等电点偏向碱性)，例如新冠抗原od-rbd。

2、现有技术公开的关于疫苗的制备方法，对于以上不同蛋白抗原的针对性研究较少。cn113730566a公开了一种流感新冠联合疫苗及其制备方法，包括：将含rbd-fc融合蛋白的重组新冠疫苗用pbs磷酸缓冲液稀释后与氢氧化铝溶液混合，得到疫苗a。cn114129719a公开了广谱疫苗的制备方法，包括：获取病原体的重组蛋白；将重组蛋白用低温缓冲液稀释，再用交联剂稀释液稀释，之后冷藏，加入甘氨酸，在37℃放置至少2小时后浓缩并收集，清冼，过滤、浓缩并收集后与铝佐剂搭配混合。cn115300620a公开了一种新型复合佐剂二价新冠疫苗的制备方法，将0.19mg/ml自制纳米铝与10μgcpg形成的复合佐剂(nano al-cpg)加入疫苗原液中。然而，现有的这些疫苗制备方法，特别是用于碱性蛋白抗原的制备时，抗原吸附率总体不高，影响了疫苗的免疫效果，成为亟待解决的技术难题。

技术实现思路

1、鉴于现有技术的不足，本发明提供一种疫苗及其制备方法，该方法能够明显提升铝佐剂对酸性蛋白抗原以及碱性蛋白抗原的吸附率，提升疫苗质量。

2、本发明的第一方面，提供一种疫苗的制备方法，其制备原料包括：a)第一抗原溶液：含磷酸盐缓冲液的酸性蛋白抗原溶液；或者，第二抗原溶液：含磷酸盐缓冲液的碱性蛋白抗原溶液；b)铝佐剂；以及可选的c)含磷酸根离子的溶液，制备方法包括：

3、将第一抗原溶液与铝佐剂混合使磷铝摩尔比在0.9以下，得到酸性蛋白疫苗；或者，将铝佐剂与含磷酸根离子的溶液混合使磷铝摩尔比在0.2以上，之后再与第二抗原溶液混合，得到碱性蛋白疫苗；

4、其中，酸性蛋白抗原为带净负电荷的任意一种蛋白抗原；碱性蛋白抗原为带净正电荷的任意一种蛋白抗原。

5、蛋白质是由氨基酸组成的，氨基酸分为酸性氨基酸和碱性氨基酸，当蛋白质含有较多的酸性氨基酸时，则整个蛋白质带净负电荷，此时，较多的酸性氨基酸在水溶液中解离时释放出质子，从而增加了蛋白质周围环境的酸性而使得此类蛋白质的等电点偏向酸性(pl<7)，故也称为酸性蛋白。相反，碱性氨基酸带正电荷，酸性氨基酸带负电荷。当蛋白质含有较多的碱性氨基酸时，则整个蛋白质带净正电荷，此时，较多的碱性氨基酸在水溶液中解离时吸收质子，从而降低了蛋白质周围环境的酸性而使得此类蛋白质的等电点偏向碱性(pl>7)，故也称为碱性蛋白。

6、根据本发明的具体实施方式，酸性蛋白抗原为诺如抗原。

7、根据本发明的具体实施方式，碱性蛋白抗原为新冠抗原。

8、根据本发明的具体实施方式，酸性蛋白疫苗的制备方法包括：将第一抗原溶液与铝佐剂混合使磷铝摩尔比在0.2～0.9。

9、根据本发明的具体实施方式，碱性蛋白疫苗的制备方法包括：将铝佐剂与含磷酸根离子的溶液混合使磷铝摩尔比在0.2-0.6，优选为0.4～0.6，之后再与第二抗原溶液混合。

10、根据本发明的具体实施方式，第二抗原溶液中不含钠离子和/或氯离子。

11、根据本发明的具体实施方式，第二抗原溶液中还含有有机糖类和组氨酸。

12、根据本发明的具体实施方式，有机糖类的终浓度为1.8～3.0％w/v，所述组氨酸的终浓度为24mm。

13、根据本发明的具体实施方式，第一抗原溶液中还含有组氨酸；优选地，所述组氨酸的终浓度为20mm。

14、本发明的第二方面，提供前述的制备方法制备得到的疫苗。

15、本发明的有益效果为：

16、本发明提供的制备方法，根据蛋白抗原带净电荷情况调节磷铝摩尔比至特定范围，可有效改变铝佐剂的等电点，使其携带的电荷与蛋白抗原携带的电荷相反，进而通过静电作用相互吸引。本发明方法制备的疫苗抗原吸附率高，稳定性好，制备方法简单，适合产业化应用。

技术特征：

1.一种疫苗的制备方法，其特征在于，所述疫苗的制备原料包括：a)第一抗原溶液：含磷酸盐缓冲液的酸性蛋白抗原溶液；或者，第二抗原溶液：含磷酸盐缓冲液的碱性蛋白抗原溶液；b)铝佐剂；以及可选的c)含磷酸根离子的溶液；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸性蛋白抗原为诺如抗原。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白抗原为新冠抗原。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸性蛋白疫苗的制备方法包括：将第一抗原溶液与铝佐剂混合使磷铝摩尔比在0.2～0.9。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白疫苗的制备方法包括：将铝佐剂与含磷酸根离子的溶液混合使磷铝摩尔比在0.2-0.6，优选为0.4～0.6，之后再与第二抗原溶液混合。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二抗原溶液中不含钠离子和/或氯离子。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述第二抗原溶液中还含有有机糖类和组氨酸。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述有机糖类的终浓度为1.8～3.0％w/v，所述组氨酸的终浓度为24mm。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述第一抗原溶液中还含有组氨酸；优选地，所述组氨酸的终浓度为20mm。

10.权利要求1～9所述的制备方法制备得到的疫苗。

技术总结本发明公开了一种疫苗及其制备方法，该制备方法包括：将含磷酸盐缓冲液的酸性蛋白抗原溶液与铝佐剂混合使磷铝摩尔比在0.9以下，得到酸性蛋白疫苗；或者，将铝佐剂与含磷酸根离子的溶液混合使磷铝摩尔比在0.2以上，之后再与含磷酸盐缓冲液的碱性蛋白抗原溶液混合，得到碱性蛋白疫苗；其中，酸性蛋白抗原为带净负电荷的任意一种蛋白抗原；碱性蛋白抗原为带净正电荷的任意一种蛋白抗原。本发明提供的制备方法，根据蛋白抗原带净电荷情况调节磷铝摩尔比至特定范围，可有效改变铝佐剂的等电点，使其携带的电荷与蛋白抗原携带的电荷相反，进而通过静电作用相互吸引。本发明方法制备的疫苗抗原吸附率高，稳定性好，制备方法简单，适合产业化应用。技术研发人员：佘广彪,张艳玲,闫亚丽,孙明慧,沈振,吴常伟,黄恩启,杨世龙受保护的技术使用者：安徽智飞龙科马生物制药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/11