何首乌外泌体样囊泡及其用途的制作方法

本发明属于天然药物领域，涉及何首乌外泌体样囊泡及其用途，所述用途包括制备用于促进生发或防止脱发的药物。

背景技术：

1、在头发养护领域中要实现的作用通常包括三个方面：(1)促进生发、(2)防止脱发、和(3)乌发。这三个方面的治疗机理、对象和所涉及的靶点都各不相同。

2、就生发作用而言，在毛发生长过程中，人毛乳头细胞能够产生大量的细胞因子、生长因子和其他生物分子，刺激毛发周期的进行与毛发生长。碱性磷酸酶(alpl)在整个毛发生长周期中高度表达，其活性已被广泛视作毛乳头细胞的标志物和头发生长的指标；wnt通路是毛乳头细胞增殖的重要信号通路，dikkopf1(dkk-1)是wnt信号通路的负调控因子，能够抑制wnt通路的信号转导，进而抑制毛发的生长。促进alpl的表达与抑制dkk-1的表达均可以发挥一定的促进生发的作用。

3、就防止脱发作用而言，二氢睾酮(dht)是导致脱发的重要因素。dht在头皮中过度累积时，毛囊对dht敏感性提高，进而开始萎缩，在一系列的头发循环中，头发逐渐变得稀疏。srd5a1和srd5a2是5α-还原酶的两种亚型，能够将体内游离睾酮转化为dht，睾酮和dht均可与雄激素受体(androgen acceptor，ar)结合进而影响细胞功能。因此，抑制5α-还原酶及雄激素受体的表达能够发挥防脱发的作用。

4、就乌发作用而言，其是中药何首乌的传统功效。乌发作用与黑色素的分泌密切相关。根据cn116889543a的记载，酪氨酸酶是黑色素生成的关键酶，黑色素细胞中酪氨酸在酪氨酸酶的作用下，生成多巴、多巴醌，最后生成真黑素，其是头发呈现黑色的关键物质；此外，抗氧化是抵御头发变白的一个有效途径。该文献进一步使用黑色素瘤细胞测定了黑色素含量和酪氨酸酶活性，由此验证了含有多种中药提取物以及少量植物外泌体的组合物在乌发方面的作用，但不涉及生发或防止脱发的作用。

5、何首乌属于蓼科植物，以块根入药，《本草纲目》记载其具有“养血益肝，健筋骨，乌发”的功效。对于生发和防止脱发的作用，现有技术只对于何首乌提取物对毛囊的作用进行了泛化的研究(例如参见shin jy，choi yh，kim j，et al.2020；20(1):144，doi:10.1186/s12906-020-02940-5)，但其中能够调控具体靶点的具体活性成分仍尚未明晰。

6、植物细胞能够释放各种具有脂质双层膜的囊泡，其直径约为20nm-5μm，根据其功能、粒径、组成等特征可以分为多种类群，例如外泌体、核外粒体、微胞、微粒等。植物外泌体样囊泡(包括外泌体)已被证明在植物免疫、植物-微生物共生中起着重要作用，且在体外与体内的活性研究中亦体现出其抗癌、抗炎、抗氧化等活性，证明了植物外泌体样囊泡在疾病治疗中的潜力。植物外泌体样囊泡具有脂质双分子层，能够很好地保护其中的活性物质使其易于被细胞摄取，大部分植物的可食用性也侧面体现了其较低的生物毒性与免疫原性，这些特征表明植物外泌体样囊泡可能成为一种良好的治疗药物。植物外泌体样囊泡的提取分离和鉴定的一般方法也是已知的，例如但不限于参见cn108135831b及其中所引用的现有技术文献。

7、综上所述，迄今为止仍未有关于何首乌外泌体样囊泡在生发和防止脱发中的效果与作用机制的研究，特别是何首乌外泌体样囊泡是否能够调控与生发或防止脱发相关的5α-还原酶、碱性磷酸酶(alpl)、雄激素受体、dkk-1等基因的表达仍是未知的。

技术实现思路

1、本发明的发明人意外地发现，何首乌的外泌体样囊泡在促进生发与防止脱发方面取得了显著优于现有技术的何首乌提取物的效果，由此完成了本发明。因此，本发明包括以下技术内容。

2、1.一种外泌体样囊泡，所述外泌体样囊泡由何首乌提取分离。

3、2.根据技术内容1所述的外泌体样囊泡，所述外泌体样囊泡由何首乌的块根提取分离。

4、3.根据技术内容1或2所述的外泌体样囊泡，所述外泌体样囊泡的粒径为20-500nm。

5、4.根据技术内容中1-3中任一项所述的外泌体样囊泡，所述外泌体样囊泡具有杯状形态。

6、5.根据技术内容1-4中任一项所述的外泌体样囊泡在制备用于促进生发或防止脱发的药物中的用途。

7、6.根据技术内容1-4中任一项所述的外泌体样囊泡在制备用于以下任一项的药物中的用途：

8、-促进毛囊真皮乳头细胞的增殖；

9、-抑制5α-还原酶基因的表达；

10、-抑制dkk-1基因的表达；

11、-促进碱性磷酸酶基因的表达；

12、-抑制雄激素受体的基因表达。

13、7.根据技术内容1-4中任一项所述的外泌体样囊泡的制备方法，其包括以下步骤：

14、a.使用何首乌块根，任选向其中加入缓冲液，进行匀浆，以获得匀浆液；

15、b.将匀浆液进行离心，收集上清液；

16、c.将前一步骤所获得的上清液进行离心，弃上清液，保留底部沉淀物；

17、d.向前一步骤所获得的沉淀物中加入缓冲液重悬，得到悬浮液，对悬浮液进行离心，弃上清液，保留底部沉淀物；

18、e.任选重复执行步骤d一次以上。

技术特征：

1.一种外泌体样囊泡在制备用于促进生发或防止脱发的药物中的用途，其中所述外泌体样囊泡由何首乌提取分离。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述外泌体样囊泡由何首乌的块根提取分离。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述外泌体样囊泡的粒径为20-500nm。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述外泌体样囊泡具有杯状形态。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其为在制备用于以下任一项或多项的药物中的用途：

6.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其为在制备用于以下任一项或多项的药物中的用途：

技术总结本发明属于天然药物领域，涉及何首乌外泌体样囊泡及其用途，所述用途包括制备用于促进生发或防止脱发的药物。技术研发人员：卓鑫杰,姚玲玲受保护的技术使用者：北京焕生汇生物技术研究院有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/11