mRNA疫苗组合物的制作方法

背景技术：

1、由新型冠状病毒引起的新出现的急性呼吸道病毒感染是一个重大的公共卫生问题。sarscov-2病毒引起的大流行病已被世界卫生组织(world health organization，who)命名为covid-19(2019冠状病毒病)。sars-cov-2引起的公共卫生危机凸显了快速开发针对这些病毒的有效、容易扩展且稳定的疫苗递送的重要性。

2、rna疫苗最近显示出巨大的前景。因此，需要开发一种增强的rna递送系统，以实现更有效、容易扩展且稳定的疫苗递送。

技术实现思路

1、在一个方面中，本文提供一种核酸疫苗，其包含一种或多种多核苷酸，所述一种或多种多核苷酸编码来源于引起感染性疾病、病症或病状的感染原的一种或多种抗原多肽。所述一种或多种多核苷酸配制在包含天然脂质和可电离脂质的脂质重构植物信使包(lpmp)内。所述可电离脂质具有两个或更多个以下所列特征：

2、(i)至少2个可电离胺；

3、(ii)至少3个脂质尾部，其中各脂质尾部的长度为至少6个碳原子；

4、(iii)pka为约4.5至约7.5；

5、(iv)由至少两个原子的链分开的可电离胺和杂有机基团；以及

6、(v)n:p比率为至少10。

7、在另一方面，本文提供了一种用于制备核酸疫苗的方法。所述方法包含在可电离脂质存在下重构包含纯化的pmp脂质的膜，以产生包含所述可电离脂质的脂质重构植物信使包(lpmp)。所述可电离脂质具有两个或更多个以下所列特征：

8、(i)至少2个可电离胺；

9、(ii)至少3个脂质尾部；其中各脂质尾部的长度为至少6个碳原子；

10、(iii)pka为约4.5至约7.5；

11、(iv)由至少两个原子的链分开的可电离胺和杂有机基团；以及

12、(v)n:p比率为至少10。

13、所述方法进一步包含将一种或多种多核苷酸负载到所述lpmp中，所述一种或多种多核苷酸编码来源于引起感染性疾病、病症或病状的感染原的一种或多种抗原多肽。

14、在一些实施例中，所述多核苷酸是多核苷酸构建体，其编码一种或多种野生型或工程化抗原(或抗原的抗体)。所述抗原可以来源于感染原。在一些实施例中，所述感染原是病毒，例如选自由以下组成的群组的病毒：流感病毒、冠状病毒、蚊传播病毒、肝炎病毒和hiv病毒。在一些实施例中，所述感染原是病毒，例如呼吸道合胞病毒、鼻病毒、腺病毒或副流感病毒。举例来说，所述感染原可以是病毒的一种或多种病毒株。

15、在一些实施例中，由所述多核苷酸编码的抗原多肽是冠状病毒或其片段或亚基。在一些实施例中，所述抗原多肽是mers病毒(mers-cov)、sars病毒(sars-cov)或其片段或亚基的刺突蛋白(s)。

16、在一些实施例中，所述抗原多肽是sars病毒或其片段或亚基。所述抗原多肽可以是sars-cov-2刺突蛋白或sars-cov-2刺突糖蛋白。在一个实施例中，所述抗原多肽是野生型sars-cov-2刺突糖蛋白。

17、在一些实施例中，所述多核苷酸可以是mrna、sirna或sirna前驱体、微小rna(mirna)或mirna前驱体、质粒、dicer底物小干扰rna(dsirna)、短发夹rna(shrna)、不对称干扰rna(airna)、肽核酸(pna)、吗啉代、锁核酸(lna)、piwi相互作用rna(pirna)、核酶、脱氧核酶(dnazyme)、适体、环状rna(circrna)、向导rna(grna)或编码这些rna中的任一者的dna分子。在一个实施例中，所述多核苷酸是mrna。

18、在一些实施例中，所述mrna来源于(a)dna分子或(b)rna分子。在所述mrna中，t任选地被u取代。

19、在一些实施例中，所述mrna来源于dna分子。所述dna分子可进一步包含启动子。在一些实施例中，所述启动子是t7启动子、t3启动子或sp6启动子。在一些实施例中，所述启动子位于5'utr处。

20、在一些实施例中，所述mrna是rna分子。所述rna分子可以是自复制rna分子。

21、在一些实施例中，所述mrna是rna分子。所述rna分子可进一步包含5'帽。所述5'帽可具有cap 1结构、cap 1(m6a)结构、cap 2结构、cap3结构、cap 0结构或其任何组合。

22、在一些实施例中，所述mrna包含编码具有双脯氨酸稳定突变的sars-cov-2刺突(s)糖蛋白的开放阅读框(orf)。在一个实施例中，所述双脯氨酸稳定突变位于对应于野生型sars-cov-2s糖蛋白的k986和v987的位置处。

23、在一些实施例中，所述mrna包含5'非翻译区(utr)和/或3'utr。

24、在一些实施例中，所述mrna包含5'utr。所述5'utr可以包含kozak序列。

25、在一些实施例中，所述mrna包含3'utr。在一些实施例中，所述3'utr包含衍生自氨基末端分裂增强子(aes)的一个或多个序列。在一些实施例中，所述3'utr包含衍生自线粒体编码的12s rrna(mtrnrl)的序列。

26、在一些实施例中，所述mrna包含poly(a)序列。在一个实施例中，所述poly(a)序列是由30个腺苷残基序列、10个核苷酸连接子序列和70个腺苷残基序列组成的110个核苷酸序列。

27、在一些实施例中，所述多核苷酸由所述脂质重构植物信使包(lpmp)包封。在一些实施例中，所述多核苷酸嵌入所述lpmp的表面上。在一些实施例中，所述多核苷酸与所述lpmp的表面缀合。

28、在一些实施例中，所述lpmp通过包含脂质挤出的方法产生。在一些实施例中，所述lpmp通过包含以下的方法产生：在包含水相的微流体装置中处理包含所述pmp的脂质提取物的溶液，从而产生所述lpmp。在一些实施例中，所述水相包含所述多核苷酸。

29、在一些实施例中，所述lpmp的所述天然脂质是从柠檬或藻类中提取。

30、在一些实施例中，所述lpmp的所述可电离脂质是选自由以下组成的群组：1,1'-((2-(4-(2-((2-(双(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)乙基)氮二基)双(十二烷-2-醇)(c12-200)、md1(ckk-e12)、of2、epc、za3-ep10、tt3、lp01、5a2-sc8、lipid 5、sm-102(lipid h)和alc-315。

31、在一个实施例中，所述可电离脂质是c12-200。

32、在一些实施例中，所述可电离脂质是(i)，其中r是c8-c14烷基。

33、在一些实施例中，所述重构是在固醇存在下进行，从而产生包含天然脂质、可电离脂质和固醇的lpmp。在一些实施例中，所述固醇是胆固醇或谷固醇。

34、在一些实施例中，所述重构是在聚乙二醇化脂质(或peg-脂质缀合物)存在下进行，从而产生包含天然脂质、可电离脂质和peg-脂质缀合物的lpmp。在一些实施例中，所述peg-脂质缀合物是c14-peg2k、c18-peg2k或dmpe-peg2k。在一些实施例中，所述peg-脂质缀合物是peg-dmg或peg-pe。在一些实施例中，所述peg-dmg是peg2000-dmg或peg2000-pe。

35、在一些实施例中，所述lpmp进一步包含固醇和聚乙二醇(peg)-脂质缀合物。

36、在一些实施例中，所述lpmp包含：

37、约20mol％至约50mol％的所述可电离脂质，

38、约20mol％至约60mol％的所述天然脂质，

39、约7mol％至约20mol％的所述固醇，以及

40、约0.5mol％至约3mol％的所述聚乙二醇(peg)-脂质缀合物。

41、在一些实施例中，所述lpmp包含：

42、约35mol％的所述可电离脂质，

43、约50mol％的所述天然脂质，

44、约12.5mol％的所述固醇，以及

45、约2.5mol％的所述聚乙二醇(peg)-脂质缀合物。

46、在一个实施例中，所述lpmp包含摩尔比为约35:50:12.5:2.5的可电离脂质:天然脂质:固醇:peg-脂质。在一个实施例中，所述lpmp包含摩尔比为约35:20:42.5:2.5的可电离脂质:天然脂质:固醇:peg-脂质。

47、在一些实施例中，所述lpmp包含：

48、从柠檬或藻类中提取的天然脂质，

49、c12-200，

50、胆固醇，以及

51、dmpe-peg2k。

52、在一个实施例中，所述lpmp包含：

53、从柠檬中提取的天然脂质，

54、c12-200，

55、胆固醇，以及

56、dmpe-peg2k。所述lpmp可以包含摩尔比为约35:50:12.5:2.5的c12-200:柠檬脂质:胆固醇:dmpe-peg2k。

57、在一个实施例中，所述lpmp包含：

58、从藻类中提取的天然脂质，

59、c12-200，

60、胆固醇，以及

61、dmpe-peg2k。所述lpmp可以包含摩尔比为约35:20:42.5:2.5的c12-200:藻类脂质:胆固醇:dmpe-peg2k。

62、在一些实施例中，所述lpmp是选自由以下组成的群组的亲脂性部分：脂复合体、脂质体、脂质纳米颗粒、基于聚合物的载体、外来体、层状体、胶束和乳液。在一个实施例中，所述lpmp是选自由以下组成的群组的脂质体：阳离子脂质体、纳米脂质体、蛋白脂质体、单层脂质体、多层脂质体、含神经酰胺的纳米脂质体和多囊脂质体。在一个实施例中，所述lpmp是脂质纳米颗粒。

63、在一些实施例中，所述lpmp的尺寸小于约200nm。在一个实施例中，

64、所述lpmp的尺寸小于约150nm。在一个实施例中，所述lpmp的尺寸小于约100nm。在一个实施例中，所述lpmp的尺寸为约55nm至约80nm。

65、在一些实施例中，所述核酸疫苗的总脂质:多核苷酸重量比为约50:1至约10:1。在一个实施例中，所述核酸疫苗的总脂质:多核苷酸重量比为约44:1至约24:1。在一个实施例中，所述核酸疫苗的总脂质:多核苷酸重量比为约40:1至约28:1。在一个实施例中，所述核酸疫苗的总脂质:多核苷酸重量比为约38:1至约30:1。在一个实施例中，所述核酸疫苗的总脂质:多核苷酸重量比为约37:1至约33:1。

66、在一些实施例中，所述核酸疫苗，例如所述水相进一步包含hepes或tris缓冲液。所述hepes或tris缓冲液的ph可为约7.0至约8.5。所述hepes或tris缓冲液的浓度可为约7mg/ml至约15mg/ml。所述水相可进一步包含约2.0mg/ml至约4.0mg/ml的nacl。

67、在一些实施例中，所述核酸疫苗，例如所述水相包含水、pbs或柠檬酸盐缓冲液。在一个实施例中，所述水相包含ph为约3.2的柠檬酸盐缓冲液。

68、在一些实施例中，所述水相和所述脂质溶液以3:1的体积比混合。

69、在一些实施例中，所述核酸疫苗进一步包含一种或多种低温保护剂。所述一种或多种低温保护剂可以是蔗糖、甘油或其组合。在一个实施例中，所述核酸疫苗包含浓度为约70mg/ml至约110mg/ml的蔗糖和浓度为约50mg/ml至约70mg/ml的甘油的组合。

70、在一些实施例中，所述核酸疫苗是冻干组合物。所述冻干核酸疫苗可以包含一种或多种冻干保护剂。所述冻干核酸疫苗可以包含泊洛沙姆(poloxamer)、山梨酸钾、蔗糖或其任何组合。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188。

71、在一些实施例中，所述核酸疫苗是冻干组合物。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约0.01％至约1.0％w/w的所述多核苷酸。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约1.0％至约5.0％w/w的脂质。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约0.5％至约2.5％w/w的tris缓冲液。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约0.75％至约2.75％w/w的nacl。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约85％至约95％w/w的糖，例如蔗糖。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约0.01％至约1.0％w/w的泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188。在一个实施例中，所述冻干核酸疫苗包含约1.0％至约5.0％w/w的山梨酸钾。

72、本发明的各方面还提供预防或减少感染性疾病、病症或病状的传播的方法。所述方法包含向受试者施用本发明的上述方面中所描述的核酸疫苗，从而预防或减少感染性疾病、病症或病状的传播。在一些实施例中，所述方法将感染性疾病、病症或病状的传播减少至少5％(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。或者，所述方法包括向受试者施用本发明的上述方面中所描述的核酸疫苗，从而将感染性疾病、病症或病状向另一受试者的传播水平降低至小于10％(例如，小于5％、小于4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.4％、小于0.3％、小于0.2％或小于0.1％)。

73、定义

74、如本文所使用，术语“有效量”、“有效浓度”或“有效……的浓度”是指足以实现所述结果或达到在目标生物体内或目标生物体上的目标水平(例如，预定或阈值水平)的lpmp或核酸组合物的量。

75、如本文所使用，术语「治疗剂」是指可以作用于动物例如哺乳动物(例如人类)、动物病原体或病原体载体的药剂，例如抗真菌剂、抗细菌剂、杀病毒剂、抗病毒剂、杀虫剂、杀线虫剂、抗寄生虫剂或驱虫剂。

76、如本文所定义，术语“核酸”和“多核苷酸”可互换，且是指直链或支链、单链或双链的rna或dna或其杂合体，不管长度如何(例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100、150、200、250、500、1000个或更多个核酸)。该术语还涵盖rna/dna杂合体。核苷酸通常通过磷酸二酯键连接在核酸中，但术语“核酸”还涵盖具有其它类型的键联或主链(例如磷酰胺、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、o-甲基氨基磷酸酯、吗啉代、锁核酸(lna)、甘油核酸(gna)、苏糖核酸(tna)和肽核酸(pna)键联或主链等)的核酸类似物。核酸可以是单链的、双链的或含有单链和双链序列的部分。核酸可以含有脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的任何组合，以及碱基的任何组合，包括例如腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶和经修饰或非规范的碱基(包括例如次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶)。

77、如本文所使用，术语“肽”、“蛋白质”或“多肽”涵盖天然或非天然存在的氨基酸(d-氨基酸或l-氨基酸)的任何链，不管长度如何(例如至少2、3、4、5、6、7、10、12、14、16、18、20、25、30、40、50、100个或更多个氨基酸)、存在或不存在翻译后修饰(例如糖基化或磷酸化)或存在例如一个或多个与肽共价连接的非氨基酰基(例如糖、脂质等)，并且包括例如天然蛋白质、合成或重组多肽和肽、杂合分子、类肽或拟肽。

78、如本文所使用，两个序列之间的“一致性百分比”是通过blast 2.0算法确定，所述算法描述于altschul等人,(1990)分子生物学杂志(j.mol.biol.)215:403-410中。用于进行blast分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(national center forbiotechnology information)公开获得。

79、如本文所使用，术语“植物”是指整个植物、植物器官、植物组织、种子、植物细胞、种子和其后代。植物细胞包括但不限于来自种子、悬浮培养物、胚芽、分生组织区、愈合组织、叶、根、芽、配子体、孢子体、花粉和小孢子的细胞。植物部分包括分化和未分化的组织，包括但不限于以下：根、茎、芽、叶、花粉、种子、果实、收获物、肿瘤组织、汁液(例如木质部汁液和韧皮部汁液)以及各种形式的细胞和培养物(例如单细胞、原生质体、胚芽和愈合组织)。植物组织可以在植物中或在植物器官、组织或细胞培养物中。

80、如本文所使用，术语“经修饰的pmp”或“经修饰的lpmp”是指包括多个pmp或lpmp的组合物，所述pmp或lpmp包括一种或多种异源试剂(例如一种或多种外源脂质，例如可电离脂质，例如包含可电离脂质和固醇和/或聚乙二醇化脂质的pmp或lpmp)，相对于未经修饰的pmp或lpmp，所述一种或多种异源试剂能够增加pmp或lpmp或其部分或组分的细胞摄取(例如，动物细胞摄取、植物细胞摄取、细菌细胞摄取或真菌细胞摄取)；能够实现或增加通过pmp或lpmp向细胞递送异源功能剂(例如农药或治疗剂)；和/或能够实现或增加异源功能剂(例如农药或治疗剂)的负载(例如负载效率或负载能力)。pmp或lpmp可以在体外或体内经修饰。

81、如本文所使用，术语“未经修饰的pmp”或“未经修饰的lpmp”是指包括多个pmp或lpmp的组合物，所述pmp或lpmp不含有能够增加pmp的细胞摄取(例如，动物细胞摄取、植物细胞摄取、细菌细胞摄取或真菌细胞摄取)的异源细胞摄取剂。

82、如本文所使用，术语“细胞摄取”是指细胞例如动物细胞、植物细胞、细菌细胞或真菌细胞对pmp或lpmp或其部分或组分(例如，pmp或lpmp携带的多核苷酸)的摄取。举例来说，摄取可以涉及pmp(例如，lpmp)或其组分的部分从细胞外环境到细胞膜、细胞壁、细胞外基质中或跨细胞膜、细胞壁、细胞外基质的转移，或到细胞的细胞内环境中的转移)。pmp(例如，lpmp)的细胞摄取可以经由主动或被动细胞机制发生。细胞摄取包括其中整个pmp(例如，lpmp)被细胞摄取，例如通过内吞作用摄取的方面。在一些实施例中，一种或多种多核苷酸在内吞作用和内体逃逸之后暴露于目标细胞的细胞质。在一些实施例中，相对于未经修饰的lpmp，经修饰的lpmp(例如，包含可电离脂质的lpmp，例如包含可电离脂质和固醇和/或聚乙二醇化脂质的lpmp)具有增加的内体逃逸率。细胞摄取还包括其中pmp(例如，lpmp)与目标细胞的膜融合的方面。在一些实施例中，一种或多种多核苷酸在膜融合之后暴露于目标细胞的细胞质。在一些实施例中，相对于未经修饰的lpmp，lpmp与目标细胞的膜的融合率更高(例如，更具融合性)。

83、如本文所使用，术语“细胞穿透剂”是指以相对于未与试剂接触的细胞来说促进细胞摄取增加的方式改变细胞(例如，动物细胞、植物细胞、细菌细胞或真菌细胞)的细胞壁、细胞外基质或细胞膜的特性(例如，通透性)的试剂。

84、如本文所使用，术语“植物细胞外囊泡”、“植物ev”或“ev”是指天然存在于植物中的封闭的脂质双层结构。任选地，植物ev包括一种或多种植物ev标记物。如本文所使用，术语“植物ev标记物”是指与植物天然相关的组分，例如植物蛋白、植物核酸、植物小分子、植物脂质或其组合，包括但不限于附录中列出的任何植物ev标记物。在一些情况下，植物ev标记物是植物ev的识别标记物，但不是杀有害生物剂(pesticidal agent)。在一些情况下，植物ev标记物是植物ev的识别标记物并且也是杀有害生物剂(例如，与多个pmp或lpmp缔合或由多个pmp或lpmp包封，或不直接与多个pmp或lpmp缔合或由多个pmp或lpmp包封)。

85、如本文所使用，术语“植物信使包”或“pmp”是指来源于植物源或其片段、部分或提取物(例如，从其富集、分离或纯化)的直径为约5至2000nm(例如，至少5至1000nm、至少5至500nm、至少400至500nm、至少25至250nm、至少50至150nm或至少70至120nm)的脂质结构(例如，脂质双层、单层、多层结构；例如，囊泡脂质结构)，其包括与其相关且已从植物、植物部分或植物细胞富集、分离或纯化的脂质或非脂质组分(例如，肽、核酸或小分子)，所述富集或分离从来源植物去除一种或多种杂质或非所需组分。pmp可以是天然存在的ev的高度纯化制剂。优选地，至少1％的来自来源植物的杂质或非所需组分被移除，例如至少2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、98％、99％或100％的一种或多种来自来源植物的杂质或非所需组分被去除，所述杂质或非所需组分例如植物细胞壁组分；果胶；植物细胞器(例如，线粒体；质体，例如叶绿体、白色体或造粉体；和细胞核)；植物染色质(例如，植物染色体)；或植物分子聚集体(例如，蛋白质聚集体、蛋白质-核酸聚集体、脂蛋白聚集体或脂质-蛋白质结构)。优选地，pmp关于一种或多种来自来源植物的杂质或非所需组分具有至少30％纯度(例如，至少40％纯度、至少50％纯度、至少60％纯度、至少70％纯度、至少80％纯度、至少90％纯度、至少99％纯度或100％纯度)，通过重量(w/w)、光谱成像(透射率％)或电导率(s/m)所测量。

86、本文中使用脂质重构pmp(lpmp)。术语“脂质重构pmp”和“lpmp”是指由来源于植物源(例如，从其富集、分离或纯化)的脂质结构(例如，脂质双层、单层、多层结构；例如，囊泡脂质结构)衍生得到的pmp，其中所述脂质结构被破坏(例如，通过脂质提取破坏)且使用标准方法在液相(例如，含有运载物的液相)中重新组装或重构，例如通过包含脂质膜水合和/或溶剂注射的方法重构，以产生lpmp，如本文所描述。如果需要，所述方法进一步包含超声处理、冷冻/解冻处理和/或脂质挤出，例如以减小重构pmp的尺寸。或者，lpmp可以使用微流体装置(例如ignitetm微流体仪器(precision nanosystems))产生。

87、如本文所使用，术语“阳离子脂质”是指含有阳离子基团(例如，阳离子头部基团)的带正电荷的两亲分子(例如，脂质或类脂质(lipidoid))。

88、如本文所使用，术语“可电离脂质”是指含有可在给定条件(例如ph)下电离例如解离以产生一种或多种带电荷物质的基团(例如，头部基团)的两亲分子(例如，脂质或类脂质，例如合成脂质或类脂质)。

89、出人意料地发现，包含具有多个不饱和位点例如至少两个或三个不饱和位点的烷基链的可电离脂质尤其适用于形成膜流动性增加的脂质颗粒。适用于本文的多种可电离脂质和相关类似物已描述于以下文献中：美国专利公开案第20060083780号和第20060240554号；美国专利第5,208,036号、第5,264,618号、第5,279,833号、第5,283,185号、第5,753,613号和第5,785,992号；和pct公开案第wo 96/10390号，所述文献的公开内容出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。

90、在一些实施例中，可电离脂质是可电离的，使得所述脂质可以根据ph解离而以带正电荷形式存在。可电离脂质的电离影响包含所述可电离脂质的脂质纳米颗粒在不同ph条件下的表面电荷。脂质纳米颗粒的表面电荷又可影响其血浆蛋白吸收、血液清除和组织分布(semple,s.c.等人,高级药物递送综述(adv.drug deliv rev)32:3-17(1998))以及其形成内体溶解的非双层结构的能力(hafez,i.m.等人,基因疗法(gene ther)8:1188-1196(2001))，前述各者可影响核酸的细胞内递送。

91、在一些实施例中，可电离脂质是例如在生理ph(例如ph约7)下通常呈中性，但在酸性ph或碱性ph下可以携带一个或多个净电荷的脂质。在一个实施例中，可电离脂质是在ph约7下通常呈中性，但在酸性ph下可以携带一个或多个净电荷的脂质。在一个实施例中，可电离脂质是在ph约7下通常呈中性，但在碱性ph下可以携带一个或多个净电荷的脂质。

92、在一些实施例中，可电离脂质不包括在生理ph(例如ph约7)下通常携带一个或多个净电荷的那些阳离子脂质或阴离子脂质。

93、如本文所使用，术语“类脂质”是指具有脂质的一个或多个特性的分子。

94、如本文所使用，术语“稳定的lpmp制剂”是指在一段时间(例如，至少24小时、至少48小时、至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少30天、至少60天或至少90天)内具有以下特性的lpmp组合物：任选地在所规定的温度范围(例如，至少24℃(例如至少24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃)、至少20℃(例如至少20℃、21℃、22℃或23℃)、至少4℃(例如至少5℃、10℃或15℃)、至少-20℃(例如至少-20℃、-15℃、-10℃、-5℃或0℃)或-80℃(例如至少-80℃、-70℃、-60℃、-50℃、-40℃或-30℃)的温度)下，相对于lpmp制剂中的lpmp数量(例如，生产或配制时)保留至少5％(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)的初始lpmp数量(例如每毫升溶液的lpmp)；或任选地在所规定的温度范围(例如，至少24℃(例如至少24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃)、至少20℃(例如至少20℃、21℃、22℃或23℃)、至少4℃(例如至少5℃、10℃或15℃)、至少-20℃(例如至少-20℃、-15℃、-10℃、-5℃或0℃)或-80℃(例如至少-80℃、-70℃、-60℃、-50℃、-40℃或-30℃)的温度)下，相对于lpmp的初始活性(例如，生产或配制时)保留至少5％(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)其活性(例如，细胞壁穿透活性和/或配制在lpmp内的mrna的活性)。