毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途

本发明属于生物医药领域，具体涉及源于中药钩藤的单体提取物毛钩藤碱在制药中新的药用用途，尤其涉及改善脂肪肝炎及肝纤维化的功能评价和用途。

背景技术：

1、毛钩藤碱是一种从中药钩藤中提取的吲哚类生物碱，具有极强的类药性和药理学活性，聚集了许多研究者的广泛关注。有文献记载毛钩藤碱主要具有抗高血压以及心血管保护的作用。

2、肝脏对脂质代谢调控处于中枢地位，非酒精性脂肪性肝病(nafld)是全球最常见的慢性肝病之一，影响到大约四分之一的全球人口，预计到2030年将成为肝移植的主要迹象，对全球健康造成重大负担。nafld始于肝脏中的脂肪长期过度堆积，发病初期通常被忽视，但是因其进一步发展导致的死亡率等令其并不如想象中那般“良性”。据统计nafld患病率在男性中约为30-40％，在女性中约为15-20％，在2型糖尿病(t2dm)人群中发病率甚至更高，可达70％，预计到2030年将成为肝移植常见的指征。非酒精性脂肪性肝炎(nash)被认为是nafld的进一步形式，其特征是肝脏脂肪变性、炎症、肝细胞损伤和不同程度的纤维化。其中纤维化是长期慢性肝炎症和损伤引起的，导致肝细胞外基质(ecm)蛋白(包括胶原蛋白)过度积累。nafld会增加患2型糖尿病(t2dm)、心血管(cvd)和心脏疾病以及慢性肾病(ckd)的风险，而nash以及肝纤维化发展到后期导致肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌的发病和死亡，是现在肝脏相关发病率和死亡率的主要原因。根据对40项研究的荟萃分析，估计nash会使肝脏相关死亡的风险增加约5-10倍(主要取决于肝纤维化的程度)，且经报道，肝纤维化阶段是组织学确诊的nafld患者(平均随访时间为26.4年)全因和疾病特异性死亡率的最强预测因子。因此对nash特别是肝纤维化的控制成为了现今医疗领域关注的重点之一。

3、尽管nafl/nash发病率高且对全球健康的影响日益加大，但目前尚无经由美国fda批准的针对nafl/nash的治疗方法。由于nafdl/nash是一种进程性疾病，其发病机理复杂，虽然在理解nafl/nash病理生理学和确定治疗靶点方面取得了稳步进展，但即使经过多年的研究，在nafl/nash各个方面的治疗进展仍相对缓慢，因此从中药中提取更有效的天然化合物挖掘新的治疗药物成为了现在关注的热点。人们期盼更加安全有效的抗nash及抗肝纤维化药物早日问世。

4、作为中医中药应用史中很常见的中药，钩藤以带钩的茎枝入药，性凉味甘，入肝经和心包经，在中医长期应用中主清热平肝，息风定惊，已被临床经验以及现代研究证实具有抗高血压的作用，其提取物对心血管及中枢神经系统疾病具有显著疗效。其中的单体提取物毛钩藤碱也被证实具有降血压、抗心律失常，抗心肌缺血等作用与活性。越来越多的报道发现吲哚类生物碱除了上述药理活性，还具有降糖的潜在治疗可能，但作为一种吲哚类生物碱，毛钩藤碱对代谢类疾病特别是脂肪肝以及其进一步形式肝纤维化的作用尚未有报道，故此，本发明旨在挖掘毛钩藤碱在制药中新的药用用途，为nash以及肝纤维化用药领域填补空白。

技术实现思路

1、有鉴于此，有必要提供一种毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途。

2、毛钩藤碱药物改善体内及体外脂肪肝炎及肝纤维化。

3、毛钩藤碱又名二氢柯楠因碱，属四环杂育亨宾类生物碱，其分子式为c22h28n2o3，分子量为368.5，符合里宾斯基的类药五规则。

4、本发明采用不同程度的肝纤维化小鼠模型，包括自发性形成糖尿病和脂肪肝(包括轻微肝纤维化)的db/db小鼠，长期高脂饮食喂养加低剂量多次链脲佐菌素(stz)腹腔注射诱导的nash小鼠模型以及(mcd:methionine-and choline deficient diet)喂养导致的nash小鼠模型，灌胃毛钩藤碱以探索其对这些模型肝脏脂质堆积以及肝纤维化的治疗效果，其中病理切片用苏木精—伊红染色法(h&e)观察肝脏切片病理变化、油红o染色法观察肝脏切片脂质沉积情况、马松或天狼猩红染色用于观察肝脏切片肝纤维化程度。脂肪肝活动系数(nas)为观察h&e染色后对不同组别小鼠肝脏的脂肪肝/炎程度的评估。各组小鼠的血浆收集用于检测小鼠血中甘油三酯及胆固醇水平、谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)水平，同时小鼠肝脏中的甘油三酯和胆固醇含量用于量化油红染色观察到的脂质沉积情况。免疫组化及免疫荧光法观察小鼠肝脏炎症及肝纤维化相关指标的蛋白表达情况。q-pcr实验用于检测模型及给药小鼠肝脏中炎症及肝纤维化相关指标的转录表达水平。体外实验分别采用油酸/棕榈酸诱导hepg2细胞形成肝脏脂质堆积的脂肪肝模型，以及用tgfβ诱导的lx2细胞形成肝纤维化模型，并用不同浓度的毛钩藤碱给药观察体外治疗效果。其中油红o染色及细胞内甘油三酯和胆固醇含量用于观察脂肪肝模型的细胞内脂质沉积情况，q-pcr和western blot实验分别用于检测肝纤维化细胞模型中的纤维化相关基因及蛋白的表达变化。

5、本发明运用不同程度的nash和肝纤维化动物模型以及脂肪肝和肝纤维化细胞模型，用h&e病理切片等作为金指标进行药效观察和评价，验证出了毛钩藤碱在体内及体外均能起到良好的抑制肝脏脂质沉积及改善肝纤维化的效果，并检测了炎症和纤维化相关的基因和蛋白表达，从分子水平验证了毛钩藤碱对相关基因和蛋白表达的抑制作用，表明毛钩藤碱从不同角度均可显示出对脂肪肝及肝纤维化的良好治疗效果。同时，由于脂肪肝和肝纤维化是症状不同的病程，脂肪肝是各种原因引起的以肝细胞弥漫性脂肪变为病理特征的一种临床综合征，而肝纤维化慢性肝脏疾病发展的过程中，肝细胞被反复破坏后再生，胶原、糖蛋白、蛋白多糖等细胞外基质在肝脏中弥漫性过度沉积与异常分布的症状，尽管肝纤维化很大程度上是脂肪肝进展到一定程度的结果，二者的治疗上也有区别，能改善脂肪肝并不意味着能改善肝纤维化，例如有研究表明抗氧化剂维生素e以及降糖药吡格列酮能一定程度上改善患者肝脏脂肪变性及炎症，但对肝纤维化病变几乎没有改变(clinicaltrials.gov number,nct00063622)。因此，在改善nash的基础上能改善肝纤维化是区别于仅仅减轻肝脏脂肪堆积的，本发明的毛钩藤碱对nash及肝纤维化治疗的新发现具有重要的应用价值。

技术特征：

1.一种毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物改善体内及体外脂肪肝炎及肝纤维化。

2.如权利要求1所述的毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物改善糖尿病病体中自发形成的肝纤维化。

3.如权利要求1所述的毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物改善糖尿病合并脂肪肝及肝纤维化。

4.如权利要求1所述的毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物改善对蛋氨酸-胆碱联合缺乏导致的脂肪肝炎的改善。

5.如权利要求1所述的毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物改善脂质沉积。

6.如权利要求1所述的毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物改善肝纤维化病体的细胞指标。

7.如权利要求1所述的毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途，其特征在于：毛钩藤碱药物对脂肪肝和肝纤维化相关药理途径中作用通路的影响。

技术总结本发明涉及毛钩藤碱药物领域，特别涉及一种毛钩藤碱在制备防治脂肪肝和肝纤维化药物中的用途。毛钩藤碱药物改善体内及体外脂肪肝炎及肝纤维化。本发明运用不同程度的NASH和肝纤维化动物模型以及脂肪肝和肝纤维化细胞模型，用H&E病理切片等作为金指标进行药效观察和评价，验证出了毛钩藤碱在体内及体外均能起到良好的抑制肝脏脂质沉积及改善肝纤维化的效果，并检测了炎症和纤维化相关的基因和蛋白表达，从分子水平验证了毛钩藤碱对相关基因和蛋白表达的抑制作用，表明毛钩藤碱从不同角度均可显示出对脂肪肝及肝纤维化的良好治疗效果，具有重要的应用价值。技术研发人员：朱依谆,胡葳,朱依纯,丁倩受保护的技术使用者：澳门科技大学技术研发日：技术公布日：2024/6/13