一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法与流程

本发明涉及烟叶醇化，特别涉及一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法。

背景技术：

1、烟叶醇化可改善烟叶的外观，协调烟叶内在化学成分，使香气显露，生青杂气减少，吃味更加醇和，是卷烟工业企业烟叶原料保障的重要环节。对烤烟烟叶进行发酵和醇化是改善烟叶品质的一个重要生化过程，其机理主要分为酶作用、微生物作用和化学作用3大类。烟叶表面微生物能够合成分泌多种胞外水解酶，这些酶可以加快淀粉、果胶、纤维素、蛋白质和木质素等大分子物质的降解，将其转化为一些小分子化合物，使化学成分协调，减轻辛辣和杂气，增加香气化合物含量，最终改善烟草品质。

2、随着对烟叶微生物研究的不断深入，外源添加烟叶内微生物或其他有益微生物被认为能够缩短烟叶醇化周期、增加烟叶香气、提升烟叶品质和提高烟叶安全性。外源微生物在被制作成菌剂的过程中需要利用液体培养基对菌株进行富集。常规使用的液体培养基有lb(细菌)与ypd(真菌、酵母菌)培养基，亦或是用无菌水重悬离心得到的菌体以获得菌液。然而经lb与ypd富集培养的微生物菌剂带有培养基杂气，同时在喷施烟叶后进行感官评吸时会有液体培养基的残留气味，影响烟叶感官品质。而无菌水重悬菌体获得的菌剂中因缺乏营养物质致使菌株生长缓慢，均无法达到理想的菌剂发酵烟叶效果。

3、因此，本发明设计了一种草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法。

技术实现思路

1、本发明提供了一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其目的是为了解决常规lb与ypd液体培养基富集菌株及菌液发酵烟叶时带来杂气与培养基残留气味的问题。

2、为了达到上述目的，本发明的实施例提供了一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，该方法利用待试烟叶制作烟草源液体培养基对目标菌株进行富集，富集后的菌液对待试烟叶进行喷施发酵。具体包括如下步骤：将待试烟叶原料加入蒸馏水中混合搅拌均匀，放置于恒温摇床中充分震荡，过滤，过滤后的液体经高压灭菌，得到烟草源液体培养基；将纯化的目标菌株接种至所述烟草源液体培养基中，置于恒温摇床中培养，获得富集菌液；将所述富集菌液按比例喷施待试烟叶；将喷施后的待试烟叶进行发酵。本发明能够减少常规lb、ypd等液体培养基富集菌株时产生的不良气味，进而消除菌液喷施烟叶时给烟叶带来的杂气，达到提高微生物发酵烟叶质量，改善卷烟感官品质的目的。

3、本发明的实施例提供了一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，包括如下步骤：

4、s1.将待试烟叶原料加入蒸馏水中混合搅拌均匀，放置于恒温摇床中充分震荡，过滤，过滤后的液体经高压灭菌，得到烟草源液体培养基；

5、s2.将纯化划线的目标菌株接种至所述烟草源液体培养基中，置于恒温摇床中培养，获得富集菌液；

6、s3.将所述富集菌液按比例喷施待试烟叶；

7、s4.将喷施后的待试烟叶进行发酵。

8、优选地，步骤s1中待试烟叶原料为50g，蒸馏水1l。

9、优选地，步骤s1中烟草源液体培养基浓度为50g/l。

10、优选地，步骤s1中搅拌速度为200r/min，搅拌温度为30℃。

11、优选地，步骤s1中恒温摇床在200r/min条件下振荡30min，温度为30℃。

12、优选地，步骤s2中培养条件为：在温度30℃、200r/min的恒温摇床中培养24～48h。

13、更优选地，步骤s2中培养条件为：在温度30℃、200r/min的恒温摇床中培养36h。

14、优选地，步骤s3中富集菌液与待试烟叶按照4％比例喷施。

15、优选地，步骤s4中发酵条件：在温度25℃、湿度30％的环境下发酵2～5天。

16、更优选地，步骤s4中发酵条件：在温度25℃、湿度30％的环境下发酵2天。

17、本发明的上述方案有如下的有益效果：

18、(1)相较于常规用于富集菌株的液体培养基如lb与ypd等，采用烟叶作为富集培养基原料，即需要处理哪种烟叶则用该烟叶作为前期制作液体富集培养基的原料，整体而言为菌株提供适应与驯化的过程。

19、(2)本发明的方法提前为待试菌株创造特定生长环境，在菌株富集的环节中适应后期喷施烟叶的生长环境，避免后期喷施于烟叶上时生长环境改变，菌株无法生长，菌剂效果降低的问题。

20、(3)本发明的烟叶源富集培养基中的成分为菌株提供生长所需的营养物质。

21、(4)本发明以烟草源作为富集培养基，解决了常规培养基会产生非烟草类杂气影响感官品质的问题。

技术特征：

1.一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s1中待试烟叶原料为50g，蒸馏水1l。

3.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s1中烟草源液体培养基浓度为50g/l。

4.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s1中搅拌速度为200r/min，搅拌温度为30℃。

5.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s1中恒温摇床在200r/min条件下振荡30min，温度为30℃。

6.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s2中培养条件为：在温度30℃、200r/min的恒温摇床中培养24～48h。

7.根据权利要求6所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s2中培养条件为：在温度30℃、200r/min的恒温摇床中培养36h。

8.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s3中富集菌液与待试烟叶按照4％比例喷施。

9.根据权利要求1所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s4中发酵条件：在温度25℃、湿度30％的环境下发酵2～5天。

10.根据权利要求9所述一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，其特征在于，步骤s4中发酵条件：在温度25℃、湿度30％的环境下发酵2天。

技术总结本发明提供了一种烟草源培养基富集菌株发酵烟叶的方法，该方法利用待试烟叶制作烟草源液体培养基对目标菌株进行富集，富集后的菌液对待试烟叶进行喷施发酵。具体包括如下步骤：将待试烟叶原料加入蒸馏水中混合搅拌均匀，放置于恒温摇床中充分震荡，过滤，过滤后的液体经高压灭菌，得到烟草源液体培养基；将纯化的目标菌株接种至所述烟草源液体培养基中，置于恒温摇床中培养，获得富集菌液；将所述富集菌液按比例喷施待试烟叶；将喷施后的待试烟叶进行发酵。本发明能够减少常规LB、YPD等液体培养基富集菌株时产生的不良气味，进而消除菌液喷施烟叶时给烟叶带来的杂气，达到提高微生物发酵烟叶质量，改善卷烟感官品质的目的。技术研发人员：张翼鹏,黎娟,陈薇,秦天,陈兴,雷佳,彭琪媛受保护的技术使用者：云南中烟工业有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/2/19