一种抗中药复合微生物悬浮菌液及其中药固体发酵料的制作方法

本发明涉及水产养殖，具体为一种抗中药复合微生物悬浮菌液及其中药固体发酵料。

背景技术：

1、近年来，随着水产养殖业的快速发展，养殖病害日趋严重，养殖用药种类越来越多，用药数量不断增加，由于水产养殖用药管理滞后，在养殖过程中滥用药物的现象比较严重，导致水产养殖环境和水产品质量安全问题日益突出，在一定程度上制约了水产业的健康发展。

2、发酵饲料作为一种绿色、环保的新型饲料，已经成为当今动物营养研究的热点，发酵饲料能够提高饲料转化效率以及某些营养物质(蛋白、氨基酸、维生素等)的水平，降低饲料中可能存在的有害物质含量，增加饲料中益生菌数量，减少抗生素在生产中的使用，是未来饲料的发展的趋势，但是目前发酵饲料的应用主要在畜禽方面，用于水产养殖的发酵料很少，对此，本发明提出一种抗中药复合微生物悬浮菌液及其中药固体发酵料。

技术实现思路

1、本发明目的是提供一种抗中药复合微生物悬浮菌液及其中药固体发酵料，以解决现有技术中用于水产养殖的发酵料很少的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：本发明第一方面提供一种中药固体发酵料，所述中药固体发酵料由固体发酵主料、中药组分、复合微生物组分和生物酶组分组成；

3、所述固体发酵主料包括花生壳粉、玉米粉、大豆粉、腐殖酸钠、氨基酸、葡萄糖、蒙脱石和食盐；

4、所述中药组分包括松针粉、淫羊藿、麦芽、黄芪、杜仲、大枣、党参、蒲公英、当归、山楂和艾草；

5、所述复合微生物组分包括芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌和丁酸梭菌；所述芽孢杆菌由枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌按比例混合得到；所述乳酸菌由乳酸片球菌、粪肠球菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌按比例混合得到；

6、所述生物酶组分包括蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶。

7、优选的，以质量份数计，所述复合微生物组分的各组成成分含量为芽孢杆菌20-30份、乳酸菌60-70份、酵母菌20-30份和丁酸梭菌20-30份；

8、所述芽孢杆菌的组分含量为枯草芽孢杆菌50-60份和地衣芽孢杆菌40-50份；

9、所述乳酸菌的组分含量为乳酸片球菌30-40份、粪肠球菌30-40份、植物乳杆菌20-30份和嗜酸乳杆菌10-20份。

10、优选的，以质量份数计，所述固体发酵主料的各组成成分含量如下：

11、花生壳粉20-30份、玉米粉15-30份、大豆粉15-30份、腐殖酸钠10-20份、氨基酸5-10份、葡萄糖5-10份、蒙脱石1-5份和食盐0.5-1份；

12、将以上发酵料混合均匀，即为中药固体发酵主料。

13、优选的，以质量份数计，所述生物酶组分的各组成成分含量如下：

14、蛋白酶30-40份、纤维素酶40-50份和脂肪酶20-30份；

15、以质量份数计，所述中药组分的各组成成分含量如下：

16、松针粉20-30份、淫羊藿20-30份、麦芽20-30份、黄芪20-30份、杜仲10-20份、大枣10-20份、党参5-10份、蒲公英2-5份、当归2-5份、山楂2-5份和艾草1-2份；

17、将以上中药经过晒干后粉碎过80目筛，可得到中药混合中药粉；混合中药粉加入5倍70-80℃的水，恒温浸泡2-3个小时，沉淀过滤后可得到混合中药液。

18、优选的，所述复合微生物组分中芽孢杆菌的驯化培养步骤如下：

19、s101，抗中药乳酸菌单菌种的驯化培养：

20、将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌分别接种于lb液体培养基中，添加混合中药液的起始浓度为5％，30-37℃的温度条件下，ph为6.5-7.0，不断的添加混合中药液，使混合中药液的终浓度为20％-30％，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的有效活菌数分别≥1×1010cfu/ml，即为驯化培养得到抗中药枯草芽孢杆菌菌液、抗中药地衣芽孢杆菌菌液；

21、s102，抗中药复合乳酸菌的驯化培养：

22、将驯化培养得到抗中药枯草芽孢杆菌菌液、抗中药地衣芽孢杆菌菌液同时接种于lb液体培养基中，添加混合中药液的浓度为20-30％，30-37℃的温度条件下，ph为6.5-7.0，培养至枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的有效活菌数分别≥5×109cfu/ml，总的芽孢杆菌总数1×1010cfu/ml，即为抗中药复合芽孢杆菌菌液。

23、优选的，所述复合微生物组分中乳酸菌的驯化培养步骤如下：

24、s201，抗中药乳酸菌单菌种的驯化培养：

25、将乳酸片球菌、粪肠球菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌分别接种于mrs液体培养基中，添加混合中药液的起始浓度为5％，32-37℃的温度条件下，ph为5.5-6.5，不断的添加混合中药液，使混合中药液的终浓度为20％-30％，乳酸片球菌、粪肠球菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的有效活菌数分别≥2×1010cfu/ml，即为驯化培养得到的抗中药乳酸片球菌菌液、抗中药粪肠球菌菌液、抗中药植物乳杆菌菌液、抗中药嗜酸乳杆菌菌液；

26、s202，抗中药复合乳酸菌的驯化培养：

27、将驯化培养得到的抗中药乳酸片球菌菌液、抗中药粪肠球菌菌液、抗中药植物乳杆菌菌液、抗中药嗜酸乳杆菌菌液同时接种于mrs液体培养基中，添加混合中药液的浓度为20-30％，32-37℃的温度条件下，ph为5.5-6.5，培养至乳酸片球菌的活菌总数≥5×109cfu/ml，粪肠球菌的活菌总数≥8×109cfu/ml，植物乳杆菌的活菌总数≥5×109cfu/ml，嗜酸乳杆菌的活菌总数≥2×109cfu/ml，总的有效活菌数≥2×1010cfu/ml，即得到驯化培养的抗中药复合乳酸菌菌液。

28、优选的，所述复合微生物组分中酵母菌的驯化培养步骤为：

29、酿酒酵母接种于ypd液体培养基中，添加混合中药液的起始浓度为5％，28-32℃的温度条件下，ph为5.0-6.0，不断的添加混合中药液，使混合中药液的终浓度为20％-30％，酿酒酵母的有效活菌数为≥1×1010cfu/ml，即为驯化培养得到的抗中药酿酒酵母菌液。

30、优选的，所述复合微生物组分中丁酸梭菌的驯化培养步骤为：

31、接种丁酸梭菌的培养基配方为：胰蛋白胨15g/l、酵母粉5.0g/l、葡萄糖10.0g/l、硫乙醇酸钠3.0g/l、l-半胱氨酸盐酸盐0.5g/l、氯化钠2.5g/l，ph为6.8-7.2，添加混合中药液的起始浓度为5％，培养过程中，不断的添加混合中药液，使混合中药液的终浓度为20％-30％，丁酸梭菌的有效活菌数为≥2×1010cfu/ml，即为驯化培养得到的抗中药丁酸梭菌菌液。

32、本发明第二方面提供一种本发明第一方面所述的中药固体发酵料的制备方法，包括以下步骤：

33、取固体发酵主料60-70份、混合中药粉20-30份、生物酶组分1-10份、水30-40份，混合搅拌均匀，制备成中药固体发酵料，接种抗中药复合微生物悬浮菌液20-30份，再次混合搅拌均匀，在常温条件下静置发酵24-72小时，单菌种的有效活菌数≥2×109cfu/ml，总的有效活菌数总数≥2×1010cfu/ml，即为中药固体发酵料。

34、本发明第三方面提供一种本发明第二方面所述的一种抗中药复合微生物悬浮菌液的制备方法，所述抗中药复合微生物悬浮菌液的驯化培养方法如下：

35、取固体发酵主料60-70份，混合中药粉20-30份，生物酶组分1-10份，水60-80份，混合搅拌均匀，制备成发酵培养基悬浮液，接种微生物组分20-30份；

36、在28-37℃，ph6.0-7.0，搅拌速度为60～120r/min条件下培养，培养至单菌种的有效活菌数≥5×109cfu/ml，总的有效活菌数总数≥5×1010cfu/ml，驯化结束。

37、本发明至少具备以下有益效果：

38、(1)本发明提供的一种抗中药复合微生物悬浮菌液及其中药固体发酵料，发酵的复合微生物经过逐级、逐步的驯化培养，具有很强抗中药的能力，在发酵过程中，将物料发酵彻底、充分，有效活菌总数含量高；

39、(2)本发明提供的一种抗中药复合微生物悬浮菌液及其中药固体发酵料，中药固体发酵料用于水产养殖，可以水生动物的平衡肠道菌群，增强免疫力；中药固体发酵料具有特殊发酵香味，代谢产物丰富，具有各类消化酶、小肽蛋白、短链脂肪酸、维生素、氨基酸、促生长因子和抗菌肽等生物活性成分，不含有害物质。