一种用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料及其质量检测方法

本发明涉及中草药和饲料添加剂领域，更具体的说是涉及一种用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性饲用天然植物组合物及其质量检测方法，以及含该天然植物组合物的功能性颗粒饲料的质量检测方法。

背景技术：

1、在国家颁布禁止在动物饲料添加促生长类药物饲料添加剂(中药除外)的政策法规下，以及长期生产实践中草药表现出的绿色天然、安全无污染且兼有营养和药用双重作用，使得中药饲用产品开发正逐步成为畜牧行业的研究热点。在中药饲用产品开发研究中，饲用产品质量问题是其健康发展的重要因素，因此，本发明中所涉及到的天然植物组合物的质量检测方法是保证奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎饲用天然植物组合物质量稳定及保障其功能稳定发挥的重要手段。

2、在奶牛养殖行业中，较为突出的问题之一是奶牛隐性乳房炎，表现为乳房受病原微生物侵染，乳汁体细胞数升高，进而危害奶牛健康并影响产奶量和乳品质，主要是泌乳阶段和干乳阶段，因此帮助奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的中药饲用产品开发十分重要，而中药饲用产品功能的稳定发挥更离不开产品的质量控制。目前大部分中草药饲用产品的企业标准按照普通的饲料质量要求进行质量控制，包括水分、灰分和微生物等，缺乏主要指标性化学成分的含量测定，这也是导致中草药饲用产品质量参差不齐的重要原因，已成为中草药在养殖领域健康发展的重要因素。此外指纹图谱技术是一种表征中药所含成分与其质量关系的有效手段，已成为国内外广泛认可的重要质量评价模式。因此，建立饲用中草药产品的快速、高效、高通量特征指纹图谱方法，从整体上全面反映产品内在质量，为其质量控制提供一种提供直观、简便、有效的手段。

3、综上，如何提供一种简单、快速、易操作、重复性好的用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性饲用天然植物组合物及其制备的含药颗粒饲料的质量控制方法尤为重要，是奶牛产后的保健用品质量控制的重要保障。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性饲用天然植物组合物及其制备的功能性颗粒饲料及其质量检测方法。

2、技术方案：为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料，包括以下步骤：

4、(1)取杜仲叶10-50份、白芍5-25份、菟丝子10-40份、蒲公英10-40份、紫苏叶5-20份、白扁豆10-30份和甘草5-20份，混合均匀后，采用循环水冷研磨至过20-300目筛网，得原料粉末；

5、(2)取步骤(1)制备得到的原料粉末与基础饲料豆粕、玉米、麦麸、酵母粉、亚麻籽粕、食盐、棕榈油混合均匀，经过颗粒机制粒，即得功能性颗粒饲料。

6、作为优选方案，以上所述的一种用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料，原料组成为杜仲叶25份、白芍15份、菟丝子20份、蒲公英20份、紫苏叶15份、白扁豆10份和甘草10份。

7、一种用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料的质量检测方法，包括化学成分的含量测定和指纹图谱的建立，具体步骤如下：

8、(1)供试品溶液的制备：精密称取杜仲叶、白芍、菟丝子、蒲公英、紫苏叶、白扁豆和甘草，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇25，称重，静置，超声提取，放冷补足失重，摇匀取适量，过0.45μm的微孔滤膜，得续滤液作为供试品溶液；

9、(2)对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、芍药苷、菊苣酸、紫苏酮、甘草酸加入甲醇配制成混合母液，并逐级稀释，配制7个不同浓度的对照品溶液；

10、(3)含量测定方法：分别精密吸取步骤(1)供试品溶液和步骤(2)的5个不同浓度的对照品溶液各2μl，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线，然后依据标准曲线计算供试品中主要化学成分的含量；

11、(4)指纹图谱的建立：分别精密吸取步骤(1)供试品溶液和步骤(2)的对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，在232nm吸收波长下记录色谱图，色谱图结果导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件进行分析，采用“中位数法”，时间宽度设置为0.2min，对各指纹图谱色谱峰进行多点校正和自动匹配生成指纹图谱共有模式，得到指纹图谱，进行相似度分析。

12、作为优选方案，以上所述的用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料的质量检测方法，步骤(1)供试品溶液的制备：精密称取杜仲叶、白芍、菟丝子、蒲公英、紫苏叶、白扁豆和甘草，置于具塞锥形瓶中，加入体积浓度80％的甲醇25ml，称重，静置0.5h，超声提取1h，放冷补足失重，摇匀取适量，过0.45μm的微孔滤膜，得续滤液作为供试品溶液。

13、作为优选方案，以上所述的用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料的质量检测方法，步骤(2)对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、芍药苷、菊苣酸、紫苏酮、甘草酸加入甲醇配制成浓度分别为100.3μg/ml、180μg/ml、99.5μg/ml、100.2μg/ml、98.5μg/ml的混合母液，并逐级稀释，配制7个不同浓度的对照品溶液。

14、作为优选方案，以上所述的用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性颗粒饲料的质量检测方法，步骤(3)液相及色谱条件为：色谱系统：waters2695高效液相色谱系统、waters 2998 pda检测器、empowertm色谱工作站软件；采用acquitytm uplc beh c18色谱柱，规格100mm×2.1mm，1.7μm；柱温：30℃；进样体积：2μl；流动相：乙腈-0.1％磷酸水，梯度洗脱；流速：0.4ml/min；检测波长232nm。

15、以上所述的用于奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎的功能性饲用天然植物组合物的质量检测方法，所述的梯度洗脱条件如下：

16、 时间(min) 流速(ml/min) 乙腈(％) 0.1％磷酸水(％) 0 0.4 5 95 10 0.4 12 88 18 0.4 16 84 22 0.4 27 73 30 0.4 60 40 31 0.4 95 5 32 0.4 5 95

17、。

18、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

19、中草药饲用产品质量是其健康发展的重要保障，目前市面上的中草药饲用产品多以饲料原料作为质量标准，包括水分、灰分和微生等指标的测定。然而作为中草药产品，其发挥作用具有较强的物质基础，常规的中草药饲用原料难以反映物质基准质量的优劣。作为衡量物质基准对应实物是否与物质基准基本一致的标准参照物，其质量应加强专属性鉴别和多成分、整体质量控制。本发明的质量控制方法，包括主要化学成分的含量测定和指纹图谱鉴别，更加能够保证其发挥作用的。

20、本天然植物组合物，由多种天然可饲植物组成，功能成分丰富多样，要求检测的化学成分多，本发明通过优化色谱条件与系统适用性，建立了利用高效液相色谱法同时测定5种化合物的含量，包括绿原酸、芍药苷、菊苣酸、紫苏酮、甘草酸。与此同时，本发明建立饲用中草药产品的快速、高效、高通量紫外特征图谱方法，从整体上全面反映内在质量，为其质量控制提供一种提供直观、简便、有效的手段。此外本发明的质量检测方法不仅包括对天然植物组合物的质量检测方法，还提供了有效组分在利用该天然植物组合物制备的颗粒饲料的检测方法。此检测方法具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现安全有效、质量可控。

21、本发明中所涉及到的功能性饲用天然植物组合物的质量检测方法是保证奶牛怀孕泌乳期预防隐性乳房炎饲用天然植物组合物质量稳定、规范化生产及保障其功能发挥的重要手段。