ATAP多肽及其疫苗的制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药，具体涉及atap多肽及其疫苗的制备方法和应用，特别涉及atap多肽疫苗在预防癌症中的应用，具体涉及atap-cd8t细胞表位多肽或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

背景技术：

1、atap(amphipathic tail-anchoring peptide)是从bfl-1(氨基酸147-175)衍生的一个新型的双亲尾锚多肽。实验表明，atap可以特异性靶向线粒体触发凋亡。相比其它线粒体靶向的肽类药物，atap有着独特的可以不依赖bcl-2家族蛋白而独立诱导有效凋亡的优势。尤其，atap可以不在bax和bak的参与下透过线粒体膜，bax和bak通常会影响携带药物的功能以及影响携带药物在癌症细胞内的表达。此外，atap诱导的凋亡不受bcl-2或其他抗凋亡家族成员的影响，bcl-2或其他抗凋亡家族成员常常在癌细胞中过表达。

2、atap-m8是一种含38个氨基酸残基的多肽，它是天然atap序列经优化和改造而来。为了改进理化性质、促进临床应用，对天然atap序列进行氨基酸取代和化学修饰以提高其生物活性。atap-m8系atap结构与irgd序列融合，经结构修饰得到的融合多肽。irgd序列能够高度靶向结合在很多肿瘤细胞表面高表达的整合素受体(integrin)。atap-m8能特异性识别细胞线粒体膜，经特殊的双亲螺旋结构定位在线粒体膜上打孔，物理性破坏线粒体结构，诱导细胞凋亡。通过将atap连接至内化的rgd肽(irgd)，实现了atap对肿瘤细胞的选择性靶向。atap能够有效的识别癌细胞与正常细胞，定向将多肽带入到肿瘤细胞区域，特异性杀死肿瘤细胞而降低对正常细胞的损伤。

3、获得的修饰肽atap-m8，其序列如下所示：

4、

5、其中：在氨基酸位置30和38的两个cys残基之间形成分子内二硫键。

6、分子量为：4375.20。

7、结构式如下：

8、

9、癌症疫苗是肿瘤免疫治疗的重要手段之一，是当前实现预防和治疗肿瘤的最为有效方式。寻找安全、有效、广谱的癌症疫苗，是医学界科技创新的前沿和热点问题。因此，申请人尝试研究atap-m8相关的防癌疫苗。

技术实现思路

1、本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

2、本发明还有一个目的是提供atap多肽。

3、本发明再有一个目的是提供atap多肽疫苗的制备方法。

4、本发明另有一个目的是提供所述的atap多肽或其药学上可接受的盐在制备用于预防和治疗癌症的药物中的应用。

5、为此，本发明提供的技术方案为：

6、atap多肽，所述atap多肽提供预防和治疗癌症的作用，所述atap多肽为如下a)或b)的蛋白质：

7、a)如seq id no：1、2、3、4所示的氨基酸序列中的任意一种，

8、

9、

10、其中，seq id no：1、2、3、4中氨基酸位置30和38的两个cys残基之间形成分子内二硫键

11、b)在a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有预防癌症作用的由a)衍生的蛋白质。

12、一种药物，，其包含一种或几种所述的atap多肽或其药学上可接受的盐。

13、优选的是，所述的药物中，所述药物为疫苗。

14、一种dna分子，所述dna分子编码所述的atap多肽。

15、一种atap多肽疫苗的制备方法，包括如下步骤：

16、取一种或几种如权利要求1所述的atap多肽或其药学上可接受的盐，配置得到多肽混合液，之后将所述多肽混合液与相同浓度佐剂按照等体积混合，得到atap多肽疫苗。

17、优选的是，所述的atap多肽疫苗的制备方法中，所述佐剂为：聚肌苷酸-聚胞嘧啶核苷酸或磷酸铝。

18、优选的是，所述的atap多肽疫苗的制备方法中，将所述atap多肽使用无菌水制备成50mg/ml的溶液，再使用pbs缓冲剂配制至浓度为15mg/ml，得到所述多肽混合液。

19、所述的atap多肽或其药学上可接受的盐在制备用于预防和治疗癌症的药物中的应用。

20、优选的是，所述的应用中，所述应用包括在制备用于预防癌症的疫苗中的应用。

21、优选的是，所述的应用中，所述癌症为胶质母细胞瘤、食管鳞状细胞癌、急性骨髓性白血病、肝癌、胃癌、肾癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌和结肠癌。

22、本发明至少包括以下有益效果：

23、一般短肽疫苗仅诱导特异性细胞毒性t淋巴细胞(ctl)细胞，引起的免疫反应不够充分，需辅以对应设计的长肽加强免疫反应以达到治疗效果。本发明的atap多肽为38肽，本身有较好的抗癌活性，通过与cd8t细胞表位多肽结合，增强免疫应答，接种后能更迅速有效地诱导宿主产生抗肿瘤免疫力。

24、本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

技术特征：

1.atap多肽，所述atap多肽提供预防和治疗癌症的作用，其特征在于，所述atap多肽为如下a)或b)的蛋白质：

2.一种药物，其特征在于，其包含一种或几种如权利要求1所述的atap多肽或其药学上可接受的盐。

3.如权利要求2所述的药物，其特征在于，所述药物为疫苗。

4.一种dna分子，所述dna分子编码如权利要求1所述的atap多肽。

5.一种atap多肽疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.如权利要求5所述的atap多肽疫苗的制备方法，其特征在于，所述佐剂为：聚肌苷酸-聚胞嘧啶核苷酸或磷酸铝。

7.如权利要求5所述的atap多肽疫苗的制备方法，其特征在于，将所述atap多肽使用无菌水制备成50mg/ml的溶液，再使用pbs缓冲剂配制至浓度为15mg/ml，得到所述多肽混合液。

8.如权利要求1所述的atap多肽或其药学上可接受的盐在制备用于预防和治疗癌症的药物中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用包括在制备用于预防癌症的疫苗中的应用。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述癌症为胶质母细胞瘤、食管鳞状细胞癌、急性骨髓性白血病、肝癌、胃癌、肾癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌和结肠癌。

技术总结本发明公开了ATAP多肽及其疫苗的制备方法和应用，ATAP多肽为如下a)或b)的蛋白质：a)如SEQ ID NO：1、2、3、4所示的氨基酸序列中的任意一种，其中，SEQ ID NO：1、2、3、4中氨基酸位置30和38的两个Cys残基之间形成分子内二硫键，b)在a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有预防癌症作用的由a)衍生的蛋白质。本发明还公开了ATAP多肽或其药学上可接受的盐在制备用于预防和治疗癌症的药物中的应用。技术研发人员：郭晓春受保护的技术使用者：北京爱泰浦生物医药科技有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/6/18