NIT2在胃癌化疗增敏中的应用

本发明属于生物医药领域，涉及nit2在胃癌化疗增敏中的应用。

背景技术：

1、由于缺乏有效的非侵入性诊断技术，导致大多数胃癌患者确诊时已经处于胃癌发生的中晚期，使得治疗难度增加和预后不佳。目前，胃癌的治疗主要包括手术切除、化疗、放疗和靶向治疗等多种方法。对于早期胃癌患者，手术切除是主要的治疗手段，可以获得较好的治疗效果。对于晚期胃癌患者，化疗和放疗则可以帮助控制病情、减轻症状，并延长患者的生存时间。截至目前，晚期胃癌治疗原则是以全身化疗为主的综合治疗，其一线化疗方案是以氟尿嘧啶(5fu)单药或以5fu为基础的化疗方案。5fu作为一线化疗方案的关键基础药物，其有效率仍然偏低，5fu化疗敏感性差已成为晚期胃癌患者术后复发及生存率低的重要原因，目前提升5fu耐药的有效途径十分有限。因此，筛选并鉴定调控胃癌5fu化疗敏感性的关键标志物并加以临床转化，是提升胃癌化疗疗效的关键所在。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术中胃癌患者化疗效果差、易产生化疗耐受性的问题，从而针对胃癌化疗耐受的发生机制进行了深入研究，明确了nit2是与胃癌化疗抵抗相关的重要靶点，通过检测胃癌细胞中nit2的表达水平判断胃癌患者化疗耐药及预后情况，且可通过提高nit2的表达或抑制nit2的降解能够有效提高胃癌化疗敏感性，为后期的治疗方案的制订以及预后评估提供科学依据。

2、为了解决上述技术问题，本发明是通过如下技术方案得以实现的。

3、本发明第一方面提供了nit2在制备用于评估胃癌对化疗药物治疗敏感性和/或预后的产品中的应用。

4、作为优选地，所述化疗药物选自蒽环类化疗药、苯环类化疗药中的一种或多种。

5、作为优选地，所述化疗药物选自氟尿嘧啶(5-fu)、二甲双胍(met)中的一种或多种。

6、作为优选地，通过对nit2表达水平进行检测以评估胃癌对化疗药物治疗敏感性和/或预后。

7、作为优选地，所述检测的方法选自pcr、免疫组织化学、wester n blot中的一种或多种。

8、作为优选地，所述nit2表达水平选自nit2基因表达水平和/或nit2蛋白表达水平。

9、作为优选地，所述nit2基因表达水平通过如下引物对进行检测：

10、所述引物对的上游引物序列如seq id no：1所示(ttgggagtta cttcagcg)，下游引物序列如seq id no：2所示(ccaggcaacatagg agg)。

11、作为优选地，所述nit2蛋白表达水平通过nit2单克隆抗体和/或nit2多克隆抗体进行检测；最优选地，所述nit2蛋白表达水平通过anti-nit2抗体进行检测，例如可选自pa5-49733(thermo fishe r scientific)、ab254759(abcam)、nbp1-89486(novus)中的一种或多种。

12、本发明第二方面提供了nit2在制备提高化疗药物对胃癌治疗敏感性的产品中的应用。

13、作为优选地，所述化疗药物选自蒽环类化疗药、苯环类化疗药中的一种或多种。

14、作为优选地，所述化疗药物选自氟尿嘧啶(5-fu)、二甲双胍(met)中的一种或多种。

15、本发明第三方面提供了nit2活性剂在制备提高化疗药物对胃癌治疗敏感性的产品中的应用，所述nit2活性剂选自nit2-k60r突变体，其序列如seq id no：3所示。

16、作为优选地，所述化疗药物选自蒽环类化疗药、苯环类化疗药中的一种或多种。

17、作为优选地，所述化疗药物选自氟尿嘧啶(5-fu)、二甲双胍(met)中的一种或多种。

18、本发明第四方面提供了一种用于治疗胃癌的药物组合物，包括nit2核苷酸、nit2蛋白、nit2活性剂中的一种或多种，以及至少一种化疗药物；所述nit2活性剂选自nit2-k60r突变体，其序列如se q id no：3所示。

19、作为优选地，所述化疗药物选自蒽环类化疗药、苯环类化疗药中的一种或多种。

20、作为优选地，所述化疗药物选自氟尿嘧啶(5-fu)、二甲双胍(met)中的一种或多种。

21、本发明第五方面提供了检测nit2表达水平的试剂在制备用于评估胃癌对化疗药物治疗敏感性和/或预后的产品中的应用。

22、作为优选地，所述化疗药物选自蒽环类化疗药、苯环类化疗药中的一种或多种。

23、作为优选地，所述化疗药物选自氟尿嘧啶(5-fu)、二甲双胍(met)中的一种或多种。

24、作为优选地，所述检测nit2表达水平的试剂包括检nit2基因表达水平的引物和/或检测nit2蛋白表达水平的试剂。

25、作为优选地，所述检测nit2基因表达水平的引物选自如下引物对：所述引物对的上游引物序列如seq id no：1所示，下游引物序列如seq id no：2所示。

26、作为优选地，所述检测nit2蛋白表达水平的试剂选自nit2单克隆抗体和/或nit2多克隆抗体。

27、作为优选地，所述检测nit2蛋白表达水平的试剂选自anti-nit 2抗体，例如可选自pa5-49733(thermo fisher scientific)、ab254759(abcam)、nbp1-89486(novus)中的一种或多种。

28、本发明第六方面提供了一种用于评估胃癌对化疗药物治疗敏感性和/或预后的试剂盒，包括检测nit2表达水平的试剂；以及pcr酶、pcr缓冲液、dntps、荧光底物中的一种或多种。

29、作为优选地，所述化疗药物选自蒽环类化疗药、苯环类化疗药中的一种或多种。

30、作为优选地，所述化疗药物选自氟尿嘧啶(5-fu)、二甲双胍(met)中的一种或多种。

31、作为优选地，所述检测nit2表达水平的试剂包括检nit2基因表达水平的引物和/或检测nit2蛋白表达水平的试剂。

32、作为优选地，所述检测nit2基因表达水平的引物选自如下引物对：所述引物对的上游引物序列如seq id no：1所示，下游引物序列如seq id no：2所示。

33、作为优选地，所述检测nit2蛋白表达水平的试剂选自nit2单克隆抗体和/或nit2多克隆抗体。

34、作为优选地，所述检测nit2蛋白表达水平的试剂选自anti-nit 2抗体，例如可选自pa5-49733(thermo fisher scientific)、ab254759(abcam)、nbp1-89486(novus)中的一种或多种。

35、作为优选地，所述荧光底物选自syber green或荧光标记的探针。

36、应理解的是，在没有特别说明的情况下，在本发明上下文中，所述nit2包括了nit2核苷酸以及nit2核苷酸所编码的nit2蛋白等成分；nit2活性剂是指能够特异性活化nit2功能和/或抑制nit2活性丧失或降解的产物，例如本发明示例性展示的nit2-k60r突变体可通过对nit2第60位赖氨酸位点突变为精氨酸，从而抑制nit2的降解。所述nit2抑制剂是指能够特异性下调nit2表达水平和/或其成熟mr na的转录水平和/或nit2蛋白表达水平或活性的物质，例如采用反义寡核苷酸、sirna、shrna、sgrna、antagomirs、mirna海绵、mir naerasers、target masking和/或多靶点等方法以下调nit2表达水平和/活性，只要是能够实现nit2的水平和/或活性降低均可。所述引物和/或引物对是指用于在pcr中合成nit2基因cdna链的pcr引物，从而用于检测nit2基因mrna的表达水平。除本发明所列出的引物和/或引物对外，本领域技术人员完全有能力根据nit2的基因序列采用包括但不限于分子生物学等本领域的常规方法手段进行相应引物和/或引物对的设计，并通过常规实验手段对所设计的引物和/或引物对进行筛选，只要能够实现特异性检测nit2表达水平即可；亦可以采用本领域的常规抗体对nit2蛋白表达水平进行检测。

37、本发明相对于现有技术具有如下技术效果：

38、(1)本发明通过临床胃癌患者标本、队列随访数据发现nit2是一个与胃癌化疗抵抗极为相关的基因，其在胃癌组织中表达水平显著降低。nit2的表达水平与胃癌患者化疗后的不良预后呈现明显的负相关性，进而可以用以预测胃癌化疗耐受以及敏感程度，为患者接受术前治疗的方案提供提前评估。

39、(2)本发明通过一系列体内体外实验证实了nit2可促进胃癌细胞对化疗药物的敏感性。通过促进nit2表达、抑制nit2降解或失活等手段以维持或提升细胞内nit2表达水平能够明显降低化疗药物对胃癌治疗的耐受性，提高其治疗活性。本发明通过揭示nit2与胃癌化疗耐受的关联性，其对于解决个体间临床疗效差异与退缩效果/预后评估空白的难题，更好地实现精准治疗具有重要的现实意义。为人类攻克胃癌提供了一个新的药物治疗靶点，从而为后续的药物研发、临床治疗等提供了一个新的方向，具有极高的社会价值和市场应用前景。