一种牙髓干细胞微组织的制备方法及其应用

本发明属于组织工程，尤其涉及一种牙髓干细胞微组织的制备方法及其应用。

背景技术：

1、骨再生是目前临床面临的重大挑战。牙周骨缺损甚至颌骨缺损不仅严重影响面部外观和咀嚼功能，降低人们的生活质量，还会导致全身性疾病的发生。目前，有望采用骨引导再生法重建牙周骨，但自体骨或外源性骨替代材料与原位骨长期结合有时不稳定，治疗周期通常较长。干细胞移植在治疗多种疾病和损伤方面极具潜力。牙髓干细胞是一类由神经脊发育且位于牙髓组织内的间充质干细胞，具有高度增殖能力和多向分化潜能。相较于其他来源的间充质干细胞(如骨髓、脂肪等)，增殖能力更强。牙髓干细胞(dental pulpstemcells，dpscs)可从因正畸需要而拔除的健康前磨牙和第三磨牙中分离培养，取材方便、创伤小，不存在道德伦理问题。因此，牙髓干细胞可作为修复骨缺损的组织工程策略的种子细胞。

2、目前，组织工程技术将行使组织再生的种子细胞与提供三维空间的生物材料支架进行整合，以此促进高效的组织再生。因此，需要构建具有持久生物活性的组织工程体系用于牙周骨再生的临床治疗。为此我们提出一种牙髓干细胞微组织的制备方法及其应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种牙髓干细胞微组织的制备方法及其应用，旨在解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种牙髓干细胞微组织的制备方法，包括以下步骤：

4、步骤一、gelma微球合成：通过明胶和甲基丙烯酸酐反应合成gelma；将gelma、tween 60和苯基锂(2，4，6-三甲基苯甲酰)膦酸盐在40℃下混合于双蒸馏水中以形成gelma前体溶液；将gelma前体溶液滴加到含有span 80的液体石蜡中，搅拌以形成乳液，并在冰浴中保持15min，得到gelma微球，然后将gelma微球暴露于uv光以引发光交联，然后用丙酮洗涤两次以分离油相，并用乙醇洗涤两次以分离丙酮；

5、步骤二、hdpscs微组织构建：将1×105个第3代hdpscs和10mg无菌gelma微球加入24孔板transwell的上室中，使用完全培养基进行细胞培养3d。

6、进一步的，所述步骤一中，gelma前体溶液和含有span 80的液体石蜡的体积比为1∶20。

7、进一步的，所述步骤一中，搅拌速度为300rpm，搅拌时间为15min。

8、进一步的，所述步骤一中，gelma微球经uv光照射灭菌至少2h。

9、进一步的，所述步骤一中，uv光的发射波长为365nm。

10、一种如上述所述的制备方法制得的牙髓干细胞微组织。

11、一种如上述所述的牙髓干细胞微组织在制备治疗牙周炎药物中的应用。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

13、本发明中的gelma微球辅助hdpscs三维培养可自主形成微组织，是一种高效、具有成骨潜能的生物活性材料；将牙髓干细胞微组织(hdpscs微组织)应用于治疗牙周骨缺损中，具有良好的开发潜力与应用价值。

技术特征：

1.一种牙髓干细胞微组织的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的牙髓干细胞微组织的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，gelma前体溶液和含有span 80的液体石蜡的体积比为1：20。

3.根据权利要求1所述的牙髓干细胞微组织的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，搅拌速度为300rpm，搅拌时间为15min。

4.根据权利要求1所述的牙髓干细胞微组织的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，gelma微球经uv光照射灭菌至少2h。

5.根据权利要求1所述的牙髓干细胞微组织的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，uv光的发射波长为365nm。

6.一种根据权利要求1-5任一所述的制备方法制得的牙髓干细胞微组织。

7.一种根据权利要求6所述的牙髓干细胞微组织在制备治疗牙周炎药物中的应用。

技术总结本发明适用于组织工程技术领域，提供了一种牙髓干细胞微组织的制备方法及其应用，制备方法包括以下步骤：明胶和甲基丙烯酸酐反应合成GelMA；将GelMA、Tween 60和LAP混合于双蒸馏水中以形成GelMA前体溶液；将其滴加到含有Span 80的液体石蜡中，搅拌以形成乳液，并在冰浴中保持，将得到的GelMA微球暴露于UV光，然后分别用丙酮和乙醇洗涤两次；将第3代hDPSCs和无菌GelMA微球加入transwell的上室中进行细胞培养。本发明中的GelMA微球辅助hDPSCs三维培养可自主形成微组织，是一种高效、具有成骨潜能的生物活性材料，在制备治疗牙周炎药物中具有良好的开发潜力与应用价值。技术研发人员：李道伟,翟文昊,孙宏晨,王卓然,黄蕾受保护的技术使用者：吉林大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18