与箭筈豌豆抗旱性紧密连锁的分子标记Vs_Chr2_184572096及应用

本发明属于生物，具体涉及一种与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记。

背景技术：

1、育种技术正在迅速发展，目前育种方式主要分为分子育种和传统育种。育种过程中，目标性状的选择很大程度上取决于基因型和表型。传统育种技术主要通过表型鉴定，但这种方法周期长且容易受到环境影响。分子育种相对于传统育种的周期短且更具有精准性，但目前很难落实到生产之中。分子标记辅助育种是利用分子标记与决定目标性状基因紧密连锁的特点，通过检测分子标记，即可检测到目的基因的存在，达到选择目标性状的目的，具有快速、准确、不受环境条件干扰的优点。借助分子标记对目标性状基因型进行选择，以此缩短育种年限，加快了育种进程，提高了育种效率，克服了很多常规育种方法中的困难。目前，分子标记辅助选择技术具有准确、迅速、高效等优势，在越来越多的作物目的性状中得到广泛应用。基于全基因组关联分析的分子标记技术的研发与应用，成为当前育种领域的重要热点和竞争领域之一。

2、箭筈豌豆(vicia sativa l.)是一种重要的自花授粉一年生饲料豆科植物。箭筈豌豆主要分布在土耳其、澳大利亚、新西兰和中国的各地等。由于箭筈豌豆具有较高的营养价值和良好的适口性，且不会对反刍动物青贮饲料的发酵产生不利影响，是制作饲料的重要原料。同时，箭筈豌豆可作为一种优质绿肥，其与谷物的混合生长良好，并具有固氮的能力。如果管理得当，种植箭筈豌豆后可以减少下一个种植季节的非豆科作物病害的发病率。箭筈豌豆不仅是生产中良好的饲草和绿肥，还是耐寒作物的极佳选择，在环境保护和生态修复方面也有广阔的应用前景。因此，分子标记的开发和辅助选择育种也在箭筈豌豆中逐渐展开，但是还严重缺乏大量可靠的分子标记。

3、通过评价箭筈豌豆叶片失水率性状以此筛选其抗旱性种质对于提高作物耐旱性、增加产量、降低资源消耗至关重要。在气候变化和水资源日益紧缺的背景下，开发抗旱品种能够提高农作物在干旱条件下的生长适应能力，减少灾害风险，维护农业生产稳定性，促进农业可持续发展，同时为农民增加经济效益，对于保障粮食安全和生态环境的持续改善具有重要意义。但是箭筈豌豆的育种起步晚，标记开发与定位等报道非常有限。因此，通过gwas全基因组关联分析结合分子标记开发箭筈豌豆抗旱性状相关分子标记，以此预测和筛选其耐旱种质，对于构建辅助选择育种体系、种质资源的改良、新品种选育等具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供了一种与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记。

2、本发明的目的之二在于提供上述与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记的应用。

3、为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

4、本发明公开了一对与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记，位于箭筈豌豆的第2号染色体上，所述分子标记vs_chr2_184572096。

5、扩增与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记的引物对，所述分子标记vs_chr2_184572096对应的引物对序列为：

6、vs_chr2_184572096-f：acttagttccttagaaacgtgcttagtc(seq id no.1所示)；

7、vs_chr2_184572096-r：ctataggcataattgttataggagtctcaa(seq id no.2所示)。

8、本发明还公开了上述分子标记引物对在箭筈豌豆抗旱辅助育种中的应用。也就是说本发明的分子标记可用于今后的分子标记辅助育种中，通过苗期提取叶片的dna，检测是否存在本发明的分子标记，进而来鉴定箭筈豌豆种质的抗旱能力。所述检测可以使用pcr检测的方法，具体可以使用上述的分子标记引物对，所述检测还可以通过测序方法进行。

9、本发明还公开了上述分子标记在鉴定箭筈豌豆抗旱性状中的应用，尤其是在筛选和鉴定箭筈豌豆抗旱性高低中的应用，具体地，用于鉴定箭筈豌豆是否具有抗旱性状的具体步骤如下：

10、(1)以供试种质的dna为pcr扩增的模板，以标记vs_chr2_184572096为引物，pcr扩增的反应体系如表1：

11、表1 pcr扩增的反应体系

12、

13、pcr扩增程序：94℃预变性4min；94℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸20s，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。

14、(2)pcr产物的琼脂糖凝胶电泳检测：取2.5μl，根据条带的结果判断箭筈豌豆抗旱的结果。

15、利用引物对vs_chr2_184572096-f，vs_chr2_184572096-r进行pcr扩增，如果pcr扩增产物仅有一条如seq id no.4所示的长度为214bp的特征条带，则箭筈豌豆为抗旱类型(即耐旱类型)；如果pcr扩增产物仅有一条如seq id no.5所示的长度为132bp的特征条带，则箭筈豌豆为不抗旱类型(即不耐旱类型)。

16、另外，本发明还保护一种用于鉴定箭筈豌豆抗旱性状的试剂盒，所述试剂盒中包含引物对vs_chr2_184572096-f、vs_chr2_184572096-r。所述试剂盒的其它成分均属于常规的试剂。具体还包括10×pcrbuffer、dntp和taq dna聚合酶。本发明对所述引物对的浓度没有特殊限制，采用本领域所熟知的引物浓度即可。本发明对所述10×pcrbuffer、dntp和taq dna聚合酶的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的普通pcr扩增用试剂即可。

17、采用本发明的试剂盒可以快速的鉴定箭筈豌豆的抗旱性状，还可以快速的鉴定箭筈豌豆的抗旱基因型。具体方法参照鉴定箭筈豌豆是否具有抗旱性状的具体步骤，通过对pcr扩增产物进行电泳检测和/或测序，如果pcr扩增产物仅有一条如seq id no.4所示的长度为214bp的特征条带，则箭筈豌豆为纯合抗旱基因型；如果pcr扩增产物仅有一条如seqid no.5所示的长度为132bp的特征条带，则箭筈豌豆为纯合不抗旱基因型。

18、本发明具有如下优点：

19、(1)本发明的发明人筛选出了一个与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记vs_chr2_184572096来进行筛选，该分子标记位于2号染色体上。采用本发明的分子标记有利于分子标记辅助选择育种，其方法简单可行，有利于提高效率，节省成本。

20、(2)本发明的分子标记具有检测方便、扩增产物稳定、特异性高的特点，可以简便、快速、高通量地应用于预测及筛选箭筈豌豆抗旱育种实践及品种鉴定。

技术特征：

1.与箭筈豌豆抗旱性状紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记为

2.权利要求1中所述的分子标记在箭筈豌豆分子标记辅助育种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述分子标记用于鉴定或辅助鉴定箭筈豌豆抗旱性状。

4.一种箭筈豌豆抗旱性状鉴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

5.一种用于鉴定箭筈豌豆抗旱性状的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1中所述的引物对。

6.权利要求5所述的试剂盒在鉴定箭筈豌豆抗旱基因型方面的应用。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，提取待测箭筈豌豆基因组dna，以所提取基因组dna为模板，利用权利要求1所述分子标记的引物对进行pcr扩增，对pcr扩增产物进行电泳检测和/或测序，如果pcr扩增产物仅有一条如seq id no.4所示的长度为214bp的特征条带，则箭筈豌豆为纯合抗旱基因型；如果pcr扩增产物仅有一条如seq id no.5所示的长度为132bp的特征条带，则箭筈豌豆为纯合不抗旱基因型。

技术总结本发明公开了一种与箭筈豌豆抗旱性紧密连锁的分子标记Vs_Chr2_184572096及应用，属于生物技术领域。所述InDel分子标记位于箭筈豌豆第2号染色体上，插入或缺失片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示。用于扩增InDel分子标记的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明所述InDel分子标记及其引物对能够快速鉴定或辅助鉴定箭筈豌豆抗旱性状。同时本发明还提供了利用所述InDel分子标记快速鉴定箭筈豌豆抗旱性的方法，该方法简便快捷，鉴定结果准确，具有良好的推广应用前景。技术研发人员：刘文献,赵相龙,陈基伟,刘志鹏受保护的技术使用者：兰州大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18