一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基及方法与流程

本发明涉及生物医学，尤其是涉及一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基及方法。

背景技术：

1、外泌体是细胞分泌的直径在30~150 nm的双层膜小囊泡，含有特异性蛋白、脂质和核酸，可以作为细胞通讯的信号分子，在疾病诊断、治疗以及婴幼儿生长发育等方面具有重要作用。母乳来源外泌体能够预防坏死性小肠结肠炎，影响婴幼儿精神发育、学龄前语言及心理发育。此外，双重动物实验及临床实验证实，食用缺乏外泌体的牛乳会导致体内嘌呤代谢物增加，引发高尿酸等健康问题。虽然乳源外泌体具有重要的功能，但是由于乳源外泌体难以获得，限制了乳源外泌体的科学研究和临床应用。

2、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基，以解决现有技术中细胞产类母乳外泌体低，乳源外泌体难以获得的技术问题。

2、本发明的目的之二在于提供一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的方法。

3、为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

4、第一方面，本发明提供了一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基，在mepicm培养基中加入雌激素和葡萄糖；

5、所述雌激素的摩尔浓度为50~200μm，所述葡萄糖的摩尔浓度为10~30mm；

6、所述诱导培养基的ph为6.4~7.1。

7、进一步的，所述ph为6.7，所述葡萄糖的浓度为20mm，所述雌激素的浓度为50μm。

8、进一步的，所述ph为6.4，所述葡萄糖的浓度为30mm，所述雌激素的浓度为100μm。

9、进一步的，所述ph为6.7，所述葡萄糖的浓度为10mm，所述雌激素的浓度为100μm。

10、进一步的，所述ph为6.7，所述葡萄糖的浓度为10mm，所述雌激素的浓度为50μm。

11、进一步的，所述雌激素为雌酮。

12、进一步的，还包括质量浓度为0.5~1.0%的生长因子，质量浓度≤10%的血清。

13、进一步的，所述生长因子为mepicgs、egf或fgf；

14、所述血清为胎牛血清、马血清或人脐带血清。

15、第二方面，本发明提供了一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的方法，包括使用上述的诱导培养基培养乳腺上皮细胞。

16、进一步的，所述诱导培养基培养乳腺上皮细胞包括将乳腺上皮细胞接种至诱导培养基中培养至细胞贴壁覆盖率为70%~80%；

17、所述培养乳腺上皮细胞的条件包括在温度35~40℃，4~6%co2的环境中培养。

18、本发明提供的一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基，通过调节ph形成酸性微环境，提高细胞膜的通透性，激活细胞内信号通路，同时添加50~200μm的雌激素和10~30mm葡萄糖，与ph形成的酸性微环境相互作用，使雌激素、葡萄糖调控乳腺上皮细胞分泌外泌体，达到诱导乳腺上皮细胞分泌外泌体的效果，提高上清液中外泌体蛋白浓度，便于提取外泌体，解决现有技术中细胞产类母乳外泌体低，母乳外泌体难以获得的技术问题。

技术特征：

1.一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基，其特征在于，在mepicm培养基中加入雌激素和葡萄糖；

2.根据权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述ph为6.7，所述葡萄糖的浓度为20mm，所述雌激素的浓度为50μm。

3.根据权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述ph为6.4，所述葡萄糖的浓度为30mm，所述雌激素的浓度为100μm。

4.根据权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述ph为6.7，所述葡萄糖的浓度为10mm，所述雌激素的浓度为100μm。

5.根据权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述ph为6.7，所述葡萄糖的浓度为10mm，所述雌激素的浓度为50μm。

6.根据权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述雌激素为雌酮。

7.根据权利要求1~6任一项所述的诱导培养基，其特征在于，还包括质量浓度为0.5~1.0%的生长因子，质量浓度≤10%的血清。

8.根据权利要求7所述的诱导培养基，其特征在于，所述生长因子为mepicgs、egf或fgf；

9.一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的方法，其特征在于，包括使用权利要求1~8任一项所述的诱导培养基培养乳腺上皮细胞。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述诱导培养基培养乳腺上皮细胞包括将乳腺上皮细胞接种至诱导培养基中培养至细胞贴壁覆盖率为70%~80%；

技术总结本发明提供了一种促进乳腺上皮细胞分泌类乳源外泌体的诱导培养基及方法，涉及生物医学技术领域，包括在MEpiCM培养基中加入雌激素和葡萄糖；所述雌激素的摩尔浓度为50~200μM，所述葡萄糖的摩尔浓度为10~30mM；所述诱导培养基的pH为6.4~7.1，通过调节pH形成酸性微环境，提高细胞膜的通透性，激活细胞内信号通路，同时添加50~200μM的雌激素和10~30mM葡萄糖，与pH形成的酸性微环境相互作用，使雌激素、葡萄糖调控乳腺上皮细胞，诱导乳腺上皮细胞分泌外泌体。技术研发人员：陈历俊,党兴芬,张珍珍,乔为仓,赵军英,蒋钰受保护的技术使用者：北京三元食品股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/18