一种从木贼麻黄中提取的化合物及其制备方法和应用

本发明涉及医药，特别是一种从木贼麻黄中提取的化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、哮喘是由多种细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细胞、t淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病，主要表现为喘息、胸闷、咳嗽以及可逆性气道阻塞。哮喘是世界范围内最常见的慢性病之一，发病率高且治疗较为困难，给患者带来较为沉重的经济负担。目前，有研究表明哮喘患者的发病率和致死率正在逐年上升(papia,brightling c,pedersen s,et al.asthma[j].lancet,2018,391(10122):783)。肥大细胞是参与哮喘的核心效应细胞，哮喘时会发生肥大细胞脱颗粒，即组胺(histamine)、β-氨基己糖苷酶(β-hex)等的释放，在哮喘的发病过程中起关键作用(martinsson j h,enriquez e m.mast cells and their progenitors in allergic asthma[j].frontimmunol,2019,10:821)；而大鼠嗜碱性细胞白血病细胞株(rbl-2h3)能够模拟哮喘中肥大细胞活化脱颗粒，可用于化合物抗哮喘活性筛选(sun n,zhou c,zhou x,et al.use of arat basophil leukemia(rbl)cell-based immunological assay for allergenidentification,clinical diagnosis of allergy,and identification of anti-allergy agents for use in immunotherapy[j].j immunotoxicol,2015,12(2):199-205)。

2、木贼麻黄传统上以干燥草质茎入药，在医药典籍中最早出自《神农本草经》，具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿之功效，用于风寒感冒、胸闷咳喘、风水浮肿等症。麻黄当中含有生物碱、黄酮、有机酸、鞣质、挥发油以及多糖等多种类型的化合物，其中生物碱是其主要成分。在多种治疗哮喘相关疾病的方剂中，麻黄均是重要的组成部分，如麻黄射干汤、麻杏石甘汤(张诗瑜,黄贵锐,候丹,等.5个常用经典名方治疗儿童哮喘急性发作疗效的网状meta分析[j].中国实验方剂学杂志,2022,28(02):67-78)。

3、现代药理活性研究表明麻黄当中的生物碱通过促进去甲肾上腺素、肾上腺素等神经递质的以及阻止过敏介质的释放从而发挥抗哮喘作用(miao s m,zhang q,bi x b,etal.a review of the phytochemistry and pharmacological activities of ephedraherb[j].chin j nat med,2020,18:321-344)，而麻黄当中的多糖通过缩短咳嗽时间，延长咳嗽潜伏期达到抗哮喘的目的(赵云生,毛福英,姚海花,等.麻黄多糖发汗、止咳与利尿活性研究[j].亚太传统医药,2014,10(16):11-13)；此外草麻黄中的四甲基吡嗪以及l-α-松油醇也具有一定的抗哮喘活性(miao s m,zhang q,bi x b,et al.a review of thephytochemistry and pharmacological activities of ephedra herb[j].chin j natmed,2020,18:321-344)。麻黄属植物以及其单体化合物确有抗哮喘活性，但对木贼麻黄单体化合物的抗哮喘活性研究较少，本发明涉及的3个新型化合物关于其制备方法及抗过敏性哮喘的研究尚未见报道。

技术实现思路

1、针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从木贼麻黄中提取的化合物及其制备方法和应用，可有效解决过敏性哮喘的用药问题。

2、本发明解决的技术方案是，从木贼麻黄中提取的化合物化学结构如式1～3所示：

3、

4、本发明化合物的制备方法，包括以下步骤：

5、1)将木贼麻黄(ephedra equisetina bunge.)的茎，以5～15倍量的溶剂回流提取2～6次，合并提取液，过滤，减压浓缩，得浓缩浸膏；

6、2)将步骤1)得到的浓缩物用水混悬，然后依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯以及正丁醇进行萃取，得到石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位以及水部位；

7、3)将步骤2)中二氯甲烷部位部位经硅胶柱层析，依次以石油醚：丙酮按比例50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:100以及100％甲醇洗脱，得9个洗脱部位fr.1～fr.9；

8、4)将步骤3)中fr.8的浓缩液经过硅胶柱层析，依次用ch2cl2：meoh＝30:1、20:1、10:1洗脱，得到6个洗脱部位fr.8-1～fr.8-6；

9、5)将步骤4)中fr.8-2的浓缩液经sephadex lh-20凝胶柱层析，用100％的甲醇洗脱，得6个洗脱部位fr.8-2-1～fr.8-2-6；

10、6)将步骤5)中fr.8-2-2的浓缩液经硅胶柱层析，用ch2cl2：meoh＝200:1、50:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱，得到5个洗脱部位fr.8-2-2-1～fr.8-2-2-5；

11、7)将步骤6)中得到的fr.8-2-2-4用c18 ods rp-hplc分离，得到新型化合物1(tr＝26.4min)；

12、8)将步骤3)中fr.7的浓缩液经硅胶柱层析，用ch2cl2：meoh＝50:1、20:1、10:1、5:1、3:1进行洗脱，得到5个洗脱部位fr.7-1～fr.7-5；

13、9)将步骤8)中fr.7-4的浓缩液经硅胶柱层析，用ch2cl2：meoh＝100:1、50:1、25:1、10:1、5:1进行梯度洗脱，得到10个洗脱部位fr.7-4-1～fr.7-4-10；

14、10)将步骤9)中fr.7-4-7的浓缩液经硅胶柱层析，用ch2cl2：meoh＝30:1进行洗脱，得到5个洗脱部位fr.7-4-7-1～fr.7-4-7-5；

15、11)将步骤10)中得到的fr.7-4-7-2用c18 ods rp-hplc分离，得到3个洗脱部位fr.7-4-7-2-1～fr.7-4-7-2-3；

16、12)将步骤11)中得到的fr.7-4-7-2-1用c18 ods rp-hplc分离，得到新型化合物2(tr＝16.0min)；

17、13)将步骤8)中fr.7-3的浓缩液经硅胶柱层析，用ch2cl2：meoh＝50:1、25:1进行梯度洗脱，得到2个洗脱部位fr.7-3-1～fr.7-3-2；

18、14)将步骤13)中fr.7-3-2的浓缩液经sephadex lh-20凝胶柱层析，用75％的甲醇洗脱，得12个洗脱部位fr.7-3-2-1～fr.7-3-2-12；

19、15)将步骤14)中得到的fr.7-3-2-5用c18 ods rp-hplc分离，得到新型化合物3(tr＝27.6min)。

20、所述的步骤7)中c18 ods rp-hplc制备的条件为5μm，250×10mm，55％甲醇，3ml/min。

21、所述的步骤11)中c18 ods rp-hplc制备的条件为5μm，250×10mm，65％甲醇，3ml/min。

22、所述的步骤12)中c18 ods rp-hplc制备的条件为5μm，250×10mm，10％乙腈，3ml/min。

23、所述的步骤15)中c18 ods rp-hplc制备的条件为5μm，250×10mm，18％乙腈，3ml/min。

24、本发明化合物1～3在制备治疗过敏性哮喘药物中的应用。

25、本发明所述的化合物1～3，可显著抑制c48/80诱导rbl-2h3细胞的β-hex的释放，改善rbl-2h3脱颗粒现象，可作为治疗过敏性哮喘的药物，其药物组成可以是单体或者其衍生物，是从木贼麻黄中提取的化合物及其用途上的创新。