一种非洲猪瘟的单克隆抗体及抗原表位的制作方法

本发明属于基因工程药物和疫苗制造，具体涉及一种非洲猪瘟的单克隆抗体及抗原表位。

背景技术：

1、非洲猪瘟是一种高致命性的传染病，于1921年在肯尼亚首次被报道，并蔓延至整个撒哈拉以南非洲。2007年，格鲁吉亚出现了一种高致命性基因2型asfv (georgia07)，随后在东欧国家快速传播。2018 年，georgia-07样基因2型 asfv 在中国出现，并传播到其他15 个亚洲国家，导致欧亚国家损失700多万头猪，给养猪业造成重大损失。非洲猪瘟病毒作为非洲猪瘟病毒科唯一成员，分子结构复杂，能够编码多种蛋白质，其结构和免疫逃避机制复杂。目前，由于其遗传复杂性、许多基因仍未得到充分研究以及流行毒株的多样性，缺乏有效治疗方法和疫苗。只能通过动物检疫、扑杀和消灭受影响的猪只以及严格的生物安全等措施来控制。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种非洲猪瘟的单克隆抗体及抗原表位，即在使用cp312r蛋白作为抗原来制备单克隆抗体，并发现了对应的抗原表位，从而为asfv的cp312r蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。

2、本发明首先提供一种杂交瘤细胞，所述的杂交瘤细胞是使用非洲猪瘟病毒的cp312r蛋白作为抗原来免疫小鼠后制备的；

3、作为实施例的具体记载，所述的杂交瘤细胞系（hybridoma cell line）为wlb-cp312r-7c11，于2024年3月13日保藏在武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no: c202440。

4、本发明还保护一种单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由上述杂交瘤细胞制备的；

5、更进一步的，所述的单克隆抗体，其重链的氨基酸序列为seq id no:1，其轻链的氨基酸序列为seq id no:3；

6、其中编码重链的核苷酸片段的序列为seq id no:2，编码轻链的核苷酸片段的序列为seq id no:4。

7、本发明的单克隆抗体可用于制备检测猪瘟病毒的制品，或预防治疗猪瘟病毒的制品。

8、本发明还提供一种抗原表位肽，所述的抗原表位肽的序列为gltvkkneqg（seq idno:5）。

9、本发明利用大肠杆菌表达系统获得可溶性重组cp312r蛋白，将其作为抗原免疫balb/c小鼠，制备了针对cp312r蛋白的单克隆抗体。所制备的单克隆抗体具有良好的特异性，并对其抗原表位进行鉴定。

技术特征：

1.一种杂交瘤细胞，其特征在于，所述的杂交瘤细胞是使用非洲猪瘟病毒的cp312r蛋白作为抗原来免疫小鼠后制备的。

2.如权利要求1所述的杂交瘤细胞，其特征在于，所述的杂交瘤细胞的保藏编号为cctcc no:c202440。

3.一种单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体是由权利要求2所述的杂交瘤细胞制备的。

4.如权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体的重链的氨基酸序列为seq id no:1，其轻链的氨基酸序列为seq id no:3。

5.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体的重链，其编码核苷酸片段的序列为seq id no:2。

6.如权利要求4所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体的轻链，其编码核苷酸片段的序列为seq id no:4。

7.权利要求3所述的单克隆抗体在制备检测猪瘟病毒的制品，或制备预防治疗猪瘟病毒的制品中的应用。

8.一种检测猪瘟病毒的制品，或制备预防治疗猪瘟病毒的制品，其特征在于，所述的制品中包含有权利要求1所述的杂交瘤细胞或权利要求3所述的单克隆抗体。

9.一种抗原表位肽，其特征在于，所述的抗原表位肽用于结合权利要求3所述的单克隆抗体。

10.如权利要求9所述的抗原表位肽，其特征在于，所述的抗原表位肽的序列为seq idno:5。

技术总结本发明的目的是提供一种非洲猪瘟的单克隆抗体及抗原表位，即在使用CP312R蛋白作为抗原来制备单克隆抗体，并发现了对应的抗原表位，从而为ASFV的CP312R蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。本发明所提供的杂交瘤细胞，其保藏编号为CCTCC NO:C202440。所制备的单克隆抗体，其重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:1，其轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:3。本发明还提供一种抗原表位肽，其序列SEQ ID NO:5。技术研发人员：包静月,张永强,王淑娟,王志亮受保护的技术使用者：中国动物卫生与流行病学中心技术研发日：技术公布日：2024/6/18