靶向AXL的嵌合抗原受体及其应用的制作方法

本技术涉及生物医药领域，具体的涉及一种靶向axl的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术：

1、axl(受体酪氨酸激酶)是激酶的tyro-3家族的成员，其可通过配体gas6(与抗凝血因子蛋白s同源的70-kda蛋白)的结合来激活。axl激活导致通过pi-3-激酶/akt(franke等人，oncogene 22：8983-8998，2003)和其他主要途径如ras/erk和β-联蛋白/tcf(goruppi等人，mol.cell biol.21：902-915，2001)的信号转导。

2、在肿瘤细胞中，axl在调节细胞的侵袭和迁移中起重要作用。axl的过度表达不仅与预后不良相关，也与乳房、结肠、食管癌、肝细胞、胃、神经胶质瘤、肺、黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢、前列腺、横纹肌肉瘤、肾、甲状腺和子宫内膜癌中所报告的各种人癌症的侵袭增加相关(linger r.m.adv.cancer res.2008,100,35-83以及verma a.mol.cancer ther.(2011).10,1763-1773)。

3、car-t细胞疗法已经成为目前治疗肿瘤的前沿技术之一，并且在治疗血液肿瘤中获得了突出成果，但car-t细胞在治疗实体瘤方面亟待突破。开发针对新的治疗靶点的car-t细胞依然是目前car-t治疗的重要发展方向。axl是肿瘤细胞高表达的酪氨酸激酶受体，有可能成为实体肿瘤治疗的潜在新靶点。因此，迫切需要开发针对axl靶点的有效的car-t药物。

技术实现思路

1、本技术提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体能够与axl蛋白特异性相结合。本技术还提供了免疫效应细胞，其能表达本技术所述的嵌合抗原受体。所述免疫效应细胞能够特异性靶向表达axl的肿瘤细胞，并表现出显著的肿瘤细胞杀伤作用。

2、一方面，本技术提供了一种嵌合抗原受体(car)，其包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域靶向axl蛋白或其变体，且所述抗原结合结构域能够以约1.9×10-10～3.0×10-8的kd值与axl蛋白相结合。

3、在某些实施方式中，所述axl蛋白包含人axl蛋白。

4、在某些实施方式中，所述axl蛋白包含seq id no:17所示的氨基酸序列。

5、在某些实施方式中，所述axl蛋白包含细胞外结构域。

6、在某些实施方式中，所述axl蛋白的细胞外结构域包含seq id no:18所示的氨基酸序列。

7、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含抗体或其片段。

8、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含hcdr3，且所述hcdr3包含seqid no:5所示的氨基酸序列。

9、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含hcdr2，且所述hcdr2包含seqid no:2、seq id no:3和seq id no:4中任一项所示的氨基酸序列。

10、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含hcdr1，且所述hcdr1包含seqid no:1所示的氨基酸序列。

11、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含lcdr3，且所述lcdr3包含seqid no:8所示的氨基酸序列。

12、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含lcdr2，且所述lcdr2包含seqid no:7所示的氨基酸序列。

13、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含lcdr1，且所述lcdr1包含seqid no:6所示的氨基酸序列。

14、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含hcdr1，hcdr2，hcdr3，lcdr1，lcdr2和lcdr3，所述hcdr1，hcdr2，hcdr3，lcdr1，lcdr2和lcdr3包含选自下组的氨基酸序列：

15、(1)所述hcdr1包含seq id no:1所示的氨基酸序列，所述hcdr2包含seq idno:2所示的氨基酸序列，所述hcdr3包含seq id no:5所示的氨基酸序列，所述lcdr1包含seq idno:6所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq idno:7所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:8所示的氨基酸序列；

16、(2)所述hcdr1包含seq id no:1所示的氨基酸序列，所述hcdr2包含seq idno:3所示的氨基酸序列，所述hcdr3包含seq id no:5所示的氨基酸序列，所述lcdr1包含seq idno:6所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq idno:7所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:8所示的氨基酸序列；

17、以及

18、(3)所述hcdr1包含seq id no:1所示的氨基酸序列，所述hcdr2包含seq idno:4所示的氨基酸序列，所述hcdr3包含seq id no:5所示的氨基酸序列，所述lcdr1包含seq idno:6所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq idno:7所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:8所示的氨基酸序列。

19、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含重链可变区vh，且所述vh包含seq id no:11、seq id no:13、seq id no:15和seq id no:16中任一项所示的氨基酸序列。

20、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含轻链可变区vl，且所述vl包含seq id no:12或seq id no:14所示的氨基酸序列。

21、在某些实施方式中，所述car的抗原结合结构域包含scfv，且所述scfv包含seqidno:20所示的氨基酸序列。

22、在某些实施方式中，所述car包含跨膜结构域。

23、在某些实施方式中，所述car的跨膜结构域包含源自选自下述蛋白的多肽：cd8、cd28、cd137和/或cd3。

24、在某些实施方式中，所述car的跨膜结构域包含seq id no:25所示的氨基酸序列。

25、在某些实施方式中，所述car包含共刺激结构域。

26、在某些实施方式中，所述car的共刺激结构域包含源自选自下述蛋白的多肽：icos、cd28、cd27、hvem、light、cd40l、4-1bb、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、slam、cd2和/或cd226。

27、在某些实施方式中，所述car的共刺激域包含seq id no:26所示的氨基酸序列。

28、在某些实施方式中，所述car包含胞内信号传导结构域。

29、在某些实施方式中，所述car的胞内信号传导结构域包含来自cd3ζ的信号传导结构域。

30、在某些实施方式中，所述car的胞内信号传导结构域包含seq id no:27所示的氨基酸序列。

31、在某些实施方式中，所述car还包含铰链区，所述铰链区连接所述抗原结合结构域和所述跨膜区。

32、在某些实施方式中，所述car的铰链区包含源自选自下述蛋白的多肽：cd8和/或igg。

33、在某些实施方式中，所述car的铰链区选自cd8铰链区。

34、在某些实施方式中，所述car的铰链区包含seq id no:24所示的氨基酸序列。

35、在某些实施方式中，所述car还包含信号肽。

36、在某些实施方式中，所述car的信号肽包含igg6信号肽。

37、在某些实施方式中，所述car的信号肽包含seq id no:23所示的氨基酸序列。

38、在某些实施方式中，所述car包含seq id no:29所示的氨基酸序列。

39、另一方面，本技术还提供了分离的核酸分子，其编码所述car。

40、在某些实施方式中，所述核酸分子包含编码rqr8的核酸序列。

41、在某些实施方式中，所述rqr8包含seq id no:21所示的氨基酸序列。

42、另一方面，本技术还提供了载体，其包含所述核酸分子。

43、在某些实施方式中，所述载体包含启动子。

44、在某些实施方式中，所述启动子为ef1α启动子。

45、另一方面，本技术还提供了免疫效应细胞，其包含和/或能够表达所述car、所述核酸分子或所述载体。

46、在某些实施方式中，所述免疫效应细胞包含淋巴细胞。

47、在某些实施方式中，所述免疫效应细胞包含t细胞。

48、另一方面，本技术还提供了制备免疫效应细胞的方法，其包括向免疫效应细胞中引入所述载体。

49、另一方面，本技术还提供了药物组合物，其包含所述免疫效应细胞。

50、另一方面，本技术还提供了所述car、所述核酸分子、所述载体、所述免疫效应细胞和/或所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗疾病和/或病症。

51、在某些实施方式中，所述疾病和/或病症为axl异常表达引起的疾病和/或病症。

52、在某些实施方式中，所述药物用于抑制axl蛋白的表达和/或活性。

53、在某些实施方式中，所述疾病和/或病症包含肿瘤。

54、在某些实施方式中，所述肿瘤包括胰腺癌。

55、本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本技术的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本技术的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本技术的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本技术所涉及发明的精神和范围。相应地，本技术的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。