一种利用拟茎点霉XP-8提取槲皮素的方法

本发明涉及槲皮素提取的，具体涉及利用拟茎点霉xp-8对槲皮素进行有效提取的方法。

背景技术：

1、槲皮素是一种具有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗炎、保肝、降压和抗癌等生物活性的黄酮类化合物。然而，它的溶解度和生物利用度很低。槲皮素经典的提取方法，如加热、煮沸和回流、蒸汽蒸馏或有机溶剂浸渍，已经使用了几十年。这些老方法的共同点是简单、鲁棒性和仪器要求低，但工作量大，提取时间长，溶剂消耗高，通常使用的是有毒的有机溶剂，这种方法增加了对空间和设备的需求。

2、此外，由于食品和制药行业的立法要求，不仅在产品中，而且在制造过程中的任何地方都禁止使用有害的有机溶剂，并且由于对环境负责任的态度和绿色发展的意识增强。槲皮素的提取方法开始向绿色工艺转变，现代提取方法包括超声、超临界流体提取、近临界或超临界水提取、微波辅助提取等，这些替代技术通常需要较少的有机溶剂，但此类方法对于技术的要求较高，经济成本也较高。

技术实现思路

1、为克服以上存在的问题，本发明中提出一种利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，该技术不仅操作简单、提取时间短、提取效率高，并且从菌丝体上洗脱槲皮素时使用的是环保型溶剂乙醇，符合经济、绿色、可持续发展的趋势。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，包括以下步骤：

4、步骤一：用接种针挑取少许保存在试管斜面上的拟茎点霉xp-8菌体，接种于pda平板上；

5、步骤二，使用直径为5mm的打孔器，从培养好的菌体pda培养物上打取5片长有菌丝的琼脂块，转接于100ml的pdb培养基中；

6、步骤三：将步骤二得到的菌体离心收集，无菌水洗涤三次，以葡萄糖为底物，加入槲皮素溶液诱导；

7、步骤四：将步骤三的反应液离心，收集菌体，无菌水洗涤三次，加入槲皮素溶液进行吸附；

8、步骤五：将步骤四的反应液离心，收集菌体，加入到无水乙醇中进行解吸附。

9、进一步地，所述步骤一中培养条件为28℃条件下静置培养5天。

10、进一步地，所述步骤二中培养条件为240rpm、28℃的条件下培养3天。

11、进一步地，所述步骤三中，葡萄糖浓度为20g/l，槲皮素浓度为50mg/l，温度为28℃、转速为220r/min，反应时间为24h。

12、进一步地，所述步骤四中，离心转速为8000rpm，10min。

13、进一步地，步骤五中，无水乙醇浓度为100％。

14、本发明的有益技术效果如下：

15、本发明方法所用的拟茎点霉xp-8来源安全且廉价，操作方法简单。本发明方法可在短时间内(30min)对槲皮素的吸附达到平衡。通过调节槲皮素浓度、菌体用量、反应液总体积、ph、温度、反应时间等条件，可实现槲皮素的100％吸附。本发明所使用的解吸附试剂为环保型溶剂乙醇。利用的拟茎点霉xp-8对槲皮素的解吸附效率达到91.53％。

技术特征：

1.一种利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：用接种针挑取少许保存在试管斜面上的拟茎点霉xp-8菌体，接种于pda平板上；

2.根据权利要求1所述的利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，其特征在于：所述步骤一中培养条件为28℃条件下静置培养5天。

3.根据权利要求2所述的利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，其特征在于：所述步骤二中培养条件为240rpm、28℃的条件下培养3天。

4.根据权利要求3所述的利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，其特征在于：所述步骤三中，葡萄糖浓度为20g/l，槲皮素浓度为50mg/l，温度为28℃、转速为220r/min，反应时间为24h。

5.根据权利要求4所述的利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，其特征在于：所述步骤四中，离心转速为8000rpm，10min。

6.根据权利要求5所述的利用拟茎点霉xp-8提取槲皮素的方法，其特征在于：步骤五中，无水乙醇浓度为100％。

技术总结本发明涉及槲皮素提取的技术领域，具体涉及一种利用拟茎点霉XP‑8提取槲皮素的方法，包括步骤一：用接种针挑取少许保存在试管斜面上的拟茎点霉XP‑8菌体，接种于PDA平板上。步骤二，使用直径为5mm的打孔器，从培养好的菌体PDA培养物上打取5片长有菌丝的琼脂块，转接于100mL的PDB培养基中。步骤三：将步骤二得到的菌体离心收集，无菌水洗涤三次。以葡萄糖为底物，加入槲皮素溶液诱导。步骤四：将步骤三的反应液离心，收集菌体，无菌水洗涤三次，加入槲皮素溶液进行吸附。步骤五：将步骤四的反应液离心，收集菌体，加入到无水乙醇中进行解吸附。本发明方法所用的拟茎点霉XP‑8来源安全且廉价，操作方法简单。技术研发人员：师俊玲,王娟,马芳芳,邵东燕受保护的技术使用者：西北工业大学技术研发日：技术公布日：2024/6/13