一种检测巨噬细胞群的方法与流程

本公开广泛涉及一种检测巨噬细胞群的方法。

背景技术：

1、组织驻留巨噬细胞(rtm)是多样化的免疫细胞群，其特征在于具有组织特异性表型，并在其驻留组织内表现出广泛的功能。然而，组织是复杂的环境，巨噬细胞在同一器官内的异质性迄今为止一直被忽视。

2、肝脏内包含有排列在肝窦内被称为kupffer细胞(kc)的rtm群，专门负责解毒从肠道经门脉进入肝脏的血液，血液中可能含有微生物、有害肠道病原体或有毒的消化副产物。因此，kc可以分解老化的或受损的红细胞，吞噬来袭的威胁，并在炎症期间，特别是在肝脏病变如病毒性肝炎、纤维化、肝细胞癌、酒精相关疾病或非酒精性脂肪性肝炎(nash)/脂肪性肝病(nafld)的发展中，发挥核心作用。然而，即使kc参与这些病理学是无可争议的，但它们的确切作用模式在很大程度上仍然是未知的。

3、kc源自胎儿肝脏单核细胞前体，这些前体在胚胎发育早期就获得了其身份，并在整个生命过程中维持自身。尽管出生后不久，早期的产后循环单核细胞贡献了一小部分kc，但在稳定状态下，kc的更新几乎完全独立于骨髓来源的细胞。然而，在炎症条件下或当原生胚胎kc耗尽时，源自单核细胞的巨噬细胞可以替代垂死的胚胎kc。此外，除kc外，肝脏中还存在其他少量与个体发育和功能无关的巨噬细胞群，包括包膜巨噬细胞，或者甚至损伤后募集的腹膜巨噬细胞。这导致了肝的巨噬细胞群的镶嵌，其起源、表型和功能各种各样，其中kc是迄今为止最丰富的巨噬细胞群。

4、在小鼠kc群中，各种研究已经提出了稳定状态下不同亚群的存在，但他们的结论却难以区分胚胎kc和源自单核细胞的巨噬细胞。这些不同的群在肝脏疾病的病理生理学中是否发挥不同的作用还仍然难以解释。

5、在人类研究中，虽然最近的单细胞转录组学研究表明肝巨噬细胞存在两种主要的肝巨噬细胞亚群，但这些不同亚群的功能仍然难以解释。因此，有必要提供检测巨噬细胞群的方法。还需要提供检测组织或肝巨噬细胞亚群的方法。特别是，需要提供检测代谢活性巨噬细胞的方法。

技术实现思路

1、在一方面，提供了检测样品中巨噬细胞群的方法，包括检测和/或确定样品中巨噬细胞中cdh5的表达。

2、在一些实施例中，所述方法还包括检测和确定包括样品中巨噬细胞中cd107a、cd107b、igfbp7(胰岛素样生长因子结合蛋白7)、lyve1、cd36、cd206和/或esam的一种或多于一种标志物的表达。

3、在一些实施例中，所述方法还包括通过检测巨噬细胞标志物的表达来检测和确定样品中的细胞是巨噬细胞。

4、在一些实施例中，巨噬细胞是kupffer细胞(kc)，任选地是胚胎来源的kupffer细胞。

5、在一些实施例中，所述方法还包括通过检测clec4f、lyz2、vsig4、csf1r、adgre1、f4/80、tim4、clec4f和vsig4的表达来检测和确定样品中的细胞是巨噬细胞。

6、在一些实施例中，所述方法包括检测和确定表达cd206lo和/或esam-的群为第一kupffer细胞群，并将检测和确定表达cd206hi和/或esam+的群为第二kupffer细胞群。

7、在一些实施例中，所述方法包括检测和确定表达cd206lo和esam-的群为第一kupffer细胞群，并检测和确定表达cd206hi和esam+的群为第二kupffer细胞群。

8、在一些实施例中，包括cd107a、cd107b、igfbp7(胰岛素样生长因子结合蛋白7)、lyve1、cd36、cd206和/或esam中的一种或多于一种标志物的过表达确定了第二kupffer细胞群。

9、在一些实施例中，所述方法还包括检测、分选和/或确定包括cd206、esam、cd36及其组合中的一种或多于一种标志物的存在。

10、在一些实施例中，所述方法还包括分离巨噬细胞的所述第一和/或第二群，任选地其中所述方法还包括分离所述第一和/或第二kupffer细胞群。

11、在一些实施例中，所述方法还包括从样品中去除表达cdh5+、cd107b+、cd206hi和/或esam+中的一种或多于一种的细胞群。

12、在一些实施例中，所述方法还包括确定包括cd45、cd64、f4/80、tim4、clec4f、adgre1(f4/80)、timd4、csf1r和clec4f中的一种或多于一种的标志物的表达，任选地所述方法还包括去除和/或排除表达adgre1+、cx3cr1+、timd4-、cle4f-及其组合中的一种或多于一种细胞。

13、在另一方面，提供了用于检测和/或分离和/或耗尽巨噬细胞群的试剂盒，其包括提供了用于检测表达cdh5的巨噬细胞群的试剂，任选地提供了能够分离表达cdh5的巨噬细胞群的试剂，以及任选地提供了能够耗尽表达cdh5的巨噬细胞群的试剂。

14、在一些实施例中，所述试剂盒还提供了用于检测表达cd107b+、cd206hi和esam+的巨噬细胞群的试剂，任选地提供了能够分离表达cd107b+、cd206hi和esam+的巨噬细胞群的试剂，以及任选地提供了能够耗尽表达cd107b+、cd206hi和esam+的巨噬细胞群的试剂。

15、在又一方面，提供了转基因动物模型，所述模型包括表达cdh5的巨噬细胞群，该巨噬细胞群已经过基因工程改造以在外源激活时经历消融。

16、在又一方面，提供了耗尽巨噬细胞群的方法，包括检测和减少受试对象中的巨噬细胞群，其中该巨噬细胞群表达cdh5、cd107b、cd206和esam中的一种或多于一种。

17、在又一方面，提供了改善肥胖和/或超重受试对象的健康的方法，包括减少受试对象中的巨噬细胞群，其中该巨噬细胞群表达cdh5、cd107b、cd206和esam中的一种或多于一种。

18、在又一方面，提供了确定受试对象中肥胖和/或与肥胖相关的代谢障碍的风险的方法，包括检测巨噬细胞中igfbp7/cd36表达的水平。

19、在一些实施例中，所述方法还包括用能够耗尽表达cdh5的巨噬细胞的试剂治疗被识别为有肥胖风险和/或有与肥胖相关的代谢障碍的受试对象。

20、在一些实施例中，本文公开的任何方面的方法减少cd206hi和esam+巨噬细胞，任选地所述方法减少cdh5+、cd206hi和esam+kupffer细胞。

技术特征：

1.一种检测样品中巨噬细胞群的方法，其包括

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括检测和确定样品中巨噬细胞中包括cd107a、cd107b、igfbp7(胰岛素样生长因子结合蛋白7)、lyve1、cd36、cd206和/或esam的一种或多于一种标志物的表达。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括通过检测巨噬细胞标志物的表达来检测和确定样品中的细胞是巨噬细胞。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述巨噬细胞是kupffer细胞(kc)，任选地是胚胎来源的kupffer细胞。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括通过检测clec4f、lyz2、vsig4、csf1r、adgre1、f4/80、tim4、clec4f和vsig4的表达来检测和确定样品中的细胞是巨噬细胞。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括检测和确定表达cd206lo和/或esam-的群为第一kupffer细胞群，并检测和确定表达cd206hi和/或esam+的群为第二kupffer细胞群。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括检测和确定表达cd206lo和esam-的群为第一kupffer细胞群，并检测和确定表达cd206hi和esam+的群为第二kupffer细胞群。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中包括cd107a、cd107b、igfbp7(胰岛素样生长因子结合蛋白7)、lyve1、cd36、cd206和/或esam的一种或多于一种标志物的过表达确定的群为第二kupffer细胞群。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括检测、分选和/或确定包括cd206、esam、cd36及其组合的一种或多于一种标志物的存在。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括分离所述第一和/或第二巨噬细胞群，任选地其中所述方法还包括分离所述第一和/或第二kupffer细胞群。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括从所述样品中去除表达cdh5+、cd107b+、cd206hi和/或esam+中的一种或多于一种的细胞群。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括确定包括cd45、cd64、f4/80、tim4、clec4f、adgre1(f4/80)、timd4、csf1r和clec4f中的一种或多于一种标志物的表达，任选地所述方法还包括去除和/或排除表达adgre1+、cx3cr1+、timd4-、clec4f-及其组合中的一种或多于一种的细胞。

13.一种检测和/或分离和/或耗尽巨噬细胞群的试剂盒，其包括

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述试剂盒还提供了用于检测表达cd107b+、cd206hi和esam+的巨噬细胞群的试剂，

15.一种转基因动物模型，其包括

16.一种耗尽巨噬细胞群的方法，其包括

17.一种改善肥胖和/或超重受试对象健康的方法，其包括

18.一种测定受试对象的肥胖和/或与肥胖相关的代谢障碍的风险的方法，其包括检测巨噬细胞中igfbp7和/或cd36的表达水平。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述方法还包括用能够耗尽表达cdh5的巨噬细胞的试剂治疗被识别为有肥胖风险和/或有与肥胖相关的代谢障碍的受试对象。

20.根据权利要求16或17或18中任一项所述的方法，其中所述方法减少了cd206hi和esam+巨噬细胞，任选地所述方法减少了cdh5+、cd206hi和esam+kupffer细胞。

技术总结提供了检测样品中巨噬细胞群的方法，包括检测和/或确定样品中巨噬细胞中Cdh5的表达。还公开了用于检测和/或分离和/或耗尽巨噬细胞群的试剂盒、耗尽巨噬细胞群的方法、改善肥胖和/或超重受试对象的健康的方法、确定受试者肥胖和/或与肥胖相关的代谢损伤风险的方法，以及其动物模型。技术研发人员：米里亚姆·阿乌迪,卡蜜拉·布莱里奥特,弗洛伦特·金舒受保护的技术使用者：新加坡科技研究局技术研发日：技术公布日：2024/7/23