一种食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法与流程

本发明涉及一种食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，属于食品质量检测领域。

背景技术：

1、随着年龄增长和身体机能退化，熟龄人群的血糖管理需求日益突显。在奶制品中添加桑叶提取物、膳食纤维，已有相关的产品上市销售。由于添加的桑叶提取物量少，对于食品中添加桑叶提取物后的质量控制尤为重要。

2、１-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin，１-dnj）是存在于桑树等植物和微生物中的一种多羟基哌啶生物碱，具有与 α-１,４-葡萄糖类似的结构，是 α-糖苷酶抑制剂，具有降血糖功能、抗肿瘤及抗病毒活性，也是桑叶提取物中的指标性成分。由于其在乳制品中的含量通常极低（1mg/g以下），因此需要使用高灵敏度的检测技术。

3、现有的国家标准gb/t 40642-2021 中桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的检测高效液相色谱法，其中桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的含量在10mg/g，且检测的对象乳制品中除了含极少量桑叶提取物外，还有其它复杂的成分，直接延用桑叶提取物的质量检测方法，并不适用于乳制品的检测。而且，1-脱氧野尻霉素（dnj）极性大且无紫外吸收。目前报道的检测方法主要有：液相色谱-质谱法( lc-ms)，柱前衍生化高效液相色谱紫外检测法(hplc-uv)、柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法( hplc-fld)和直接高效液相色谱-蒸发光检测法(hplc-elsd)等。柱前衍生化高效液相色谱紫外检测法，干扰杂质较多；蒸发光散射检测器的选择性差，样品需进行复杂的前处理才能进行测定；液质联用法，虽然质谱检测器具有更高的灵敏度以及专一性，但是质谱仪器价格较昂贵，检测成本很高。检测对象是桑叶、桑椹、桑枝、家蚕、桑白皮等动植物。

4、申请号 202311468693.2，发明名称：一种乳制品中1-脱氧野尻霉素的测定方法，涉及一种乳制品中1-脱氧野尻霉素的测定方法，通过先加入乙腈沉淀乳制品中的蛋白质，加入盐酸水溶液提取样品中的1-脱氧野尻霉素。取部分提取液，在碱性环境中加入芴甲氧羰酰氯(fmoc-cl)衍生，采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测。该发明结合了高效液相色谱法的优点，通过色谱柱对样品中可能出现的干扰物进行分离，同时通过质谱法对目标物进行定性，避免了液相法定性不准确和干扰物分离不彻底的问题，实现对目标物的准确定量。由于质谱的高灵敏度，可以将１-dnj的定量限降低至0.1mg/kg。但是，该专利采用高效液相色谱串联质谱法（hplc-ms/ms）虽然具有更高的灵敏度以及专一性，然而质谱仪器价格较昂贵，检测成本高。

5、因此，开发有效准确的食品中，尤其是奶制品中１-dnj的检测方法已迫在眉睫。

技术实现思路

1、本发明的技术方案是提供了一种食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法。

2、本发明提供了一种食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，它是采用高效液相色谱测定食品中1-脱氧野尻霉素的含量，它包括如下步骤：

3、a、样品前处理：

4、取待检测样品，经60%甲醇水提取；

5、b、配制1-脱氧野尻霉素标准品：称1-脱氧野尻霉素溶于60%甲醇水溶液中，制备成标准品；

6、c、样品衍生化：

7、取a 步骤提取液，在ph 8.5的硼酸盐缓冲液条件下，样品中的伯胺先与邻苯二甲醛（opa）反应后，样品中的dnj与9-芴甲氧羰酰氯（fmoc-cl）反应生成具有荧光吸收的络合物（dnj-fmoc）；

8、d、采用高效液相色谱-荧光检测器测定，液相色谱条件为：

9、c18液相色谱柱4.6 mm×150 mm，2.7μm；

10、流动相：流动相a：0.01 mol/l乙酸钠缓冲溶液，流动相b：乙腈；

11、流速1.5ml/min；

12、柱温45 ℃；

13、激发波长275nm，发射波长320nm；

14、梯度洗脱条件为：

15、0.0-25.0 min：流动相a：80%，流动相b：20%；25.1-30 min：流动相a：0%，流动相b：100%；30.1-35min：流动相a：80%，流动相b：20%。

16、其中，所述的样品包括桑叶提取物、乳粉、糕点、饼干、果冻、膨化食品、固体饮料、液体饮料任一种。

17、其中，a步骤所述的样品前处理的方法为：

18、称取样品，加入60%甲醇水溶液，加入均质子涡旋，超声提取30 min，10000r/min离心3min，收集上清液，残渣再加入60%甲醇水溶液，混匀后超声提取，10000r/min离心3min，合并上清液，放置至室温后用60%甲醇水溶液定容至刻度，混匀。

19、其中，c步骤所述的样品衍生化的方法为：

20、称取样品提取液，加入0.5 ml硼酸钠缓冲溶液，再加入0.1 ml 邻苯二甲醛溶液涡旋混匀，再加入0.2 ml芴甲氧羰酰氯溶液，涡旋混匀，于25℃水浴中放置25min，取出后立即放入冰水浴中，加入0.1 ml磷酸水溶液，混匀，取上清液过有机相微孔滤膜，供上机测定。

21、进一步地，所述的磷酸水溶液的加入量以1μg/ml 的1-脱氧野尻霉素标准溶液计，0.5 ml标准溶液中，加入10%磷酸100μl。

22、其中，所述硼酸钠缓冲溶液的ph值为8.5。

23、本发明有益效果是：

24、本发明检测方法的组分分离效果好，方法检出限低（4ng/ml）。而且，本发明采用的高效液相色谱-荧光检测（hplc-fld），检测仪器普适性强，价格便宜，操作简单，在能获得同样准确度和精密度结果的条件下，成本更低、方法可推广性更强。通过精密度实验、稳定性实验、重复性实验以及回收率实验证明，本发明检测方法稳定可靠，可作为测定食品中1-脱氧野尻霉素含量的有效方法。

技术特征：

1.一种食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱测定食品中1-脱氧野尻霉素的含量，它包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，其特征在于：所述的样品包括桑叶提取物、乳粉、糕点、饼干、果冻、膨化食品、固体饮料、液体饮料任一种。

3.根据权利要求1或2所述的食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，其特征在于：

4.根据权利要求1或2所述的食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，其特征在于：c步骤所述的样品衍生化的方法为：

5.根据权利要求4所述的食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，其特征在于：所述的磷酸水溶液的加入量以1μg/ml 的1-脱氧野尻霉素标准溶液计，0.5 ml标准溶液中，加入10%磷酸100μl。

6.根据权利要求4所述的食品中1-脱氧野尻霉素的含量检测方法，其特征在于：所述硼酸钠缓冲溶液的ph值为8.5。

技术总结本发明提供了一种食品中1‑脱氧野尻霉素的含量检测方法，属于食品质量检测领域。本发明含量检测方法是采用高效液相色谱测定食品中1‑脱氧野尻霉素的含量，包括如下步骤：a、样品前处理：b、配制1‑脱氧野尻霉素标准品；c、样品衍生化；d、采用高效液相色谱‑荧光检测器测定。本发明检测方法组分分离效果好，方法检出限低（4ng/mL）。本发明采用的高效液相色谱‑荧光检测，检测仪器普适性强，价格便宜，操作简单，在能获得同样准确度和精密度结果的条件下，成本低、方法可推广性强。通过精密度实验、稳定性实验、重复性实验以及回收率实验证明，本发明检测方法稳定可靠，可作为测定食品中１‑脱氧野尻霉素含量的有效方法。技术研发人员：邓思思,李绍波,覃浩,熊梅瑾,赵红阳,鲍蕾,刘玲,黄玉英,刘鹏,王心怡受保护的技术使用者：成都市食品检验研究院技术研发日：技术公布日：2024/8/1