一种子宫血管周细胞联合羟基红花黄色素A原位移植修复子宫内膜损伤的方法与流程

本发明属于妇产科领域，具体公开了子宫血管周细胞(en-pscs)联合羟基红花黄色素a在制备修复子宫损伤的药物/医疗器械中的用途。

背景技术：

1、宫腔粘连(intrauterine adhesions,iua)是不孕症的常见子宫因素，以子宫内膜纤维化为特征性病理改变。表现为月经异常、不孕及流产等生殖问题。宫腔镜下粘连分解术是iua临床治疗的主要手段，但其术后复发率高、流产和胎盘异常可能性增加的风险仍亟待解决。其它的治疗方法例如物理屏障(宫腔镜下粘连分解术后放置节育器、球囊、foley导管等屏障设施)、激素补充、生长因子补充、羊膜移植等替代疗法存在相应的缺点，治疗效果差强人意。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了一种子宫血管周细胞联合羟基红花黄色素a原位移植修复子宫内膜损伤的方法，具体公开了子宫血管周细胞(en-pscs)联合羟基红花黄色素a在制备修复子宫损伤的药物/医疗器械中的用途。本发明将两种对于促进血管新生均具有积极影响作用的物质相结合，通过可在体内安全降解的胶原膜原位宫内递送，促进受损子宫再生的同时恢复其功能。

2、本发明包括以下技术方案：

3、本发明公开了子宫血管周细胞(en-pscs)联合羟基红花黄色素a(hsya)在制备修复子宫损伤的药物/医疗器械中的用途。

4、在本发明中，我们使用来自子宫内膜功能层及基底层的微血管周细胞(en-pscs)，该细胞本身具备干细胞的多向分化潜能及自我更新能力，与子宫高度同源性的同时也表现出比骨髓源干细胞更强的增殖能力及免疫学特性。

5、红花作为我国传统医学中的活血化瘀类代表药物，其有效成分羟基红花黄a(hsya)，已被证实在促进血管新生方面具有积极影响，在心、脑等需要广泛血液供应的易缺血器官中应用较多。但在子宫方面的研究较少，iua患者由于宫内纤维化严重，成纤维细胞广泛沉积于子宫间质内，导致毛细血管管腔收缩或闭合，血管生成能力受损甚至丧失。因此，我们发明了一种方法，使用可降解的胶原膜原位宫内递送en-pscs与hsya，在本发明的实施例中，我们以联合治疗的形式观察其对于大鼠全层子宫损伤的疗效，为宫腔粘连的治疗提供新方法及理论依据。

6、进一步的，根据上述用途，所述药物/医疗器械含有负载有子宫血管周细胞(en-pscs)和羟基红花黄a的胶原膜。

7、进一步的，根据上述用途，所述药物/医疗器械为上调nrg1/erbb4信号通路表达的药物/医疗器械。

8、本发明还公开了一种原位移植修复子宫内膜损伤的胶原支架，所述胶原支架由胶原膜和膜上负载的子宫血管周细胞(en-pscs)和羟基红花黄色素a组成。

9、进一步的，本发明公开了上述胶原支架在制备用于原位移植修复子宫内膜损伤的药物/医疗器械中的用途。

10、进一步的，本发明公开了上述胶原支架的制备方法，包括以下步骤：将子宫血管周细胞(en-pscs)与羟基红花黄色素a溶液充分混匀后，以一定的密度均匀滴加至胶原膜上，共孵育后获得。

11、进一步的，上述制备方法中，包括以下步骤：

12、(1)子宫血管周细胞分离、培养，并筛选cd45-cd56-cd144-cd34-cd146+的en-pscs，将en-pscs添加至dmem/f12完全培养基中培养：

13、(2)对en-pscs表面标志物进行鉴定；

14、(3)将羟基红花黄色素a加入pbs溶液中，终浓度10-400μm；

15、(4)培养一段时间后消化细胞，以羟基红花黄a溶液重悬细胞沉淀，将含有en-pscs的羟基红花黄色素a混悬液以一定的密度均匀滴加至胶原膜上，co2培养箱孵育。

16、进一步的，上述制备方法中，所述子宫血管周细胞来自于离体的人类子宫剩余样本。

17、进一步的，上述制备方法中，所述含有en-pscs的羟基红花黄色素a混悬液中，羟基红花黄a的浓度为10-400μm。

18、进一步的，上述制备方法中，所述步骤(4)中的一定的密度为0.5-2×106细胞/cm2。

19、本发明具有以下有益效果：

20、en-pscs本身来源于子宫，安全性高，与受损部位同源，可迅速被募集至受损子宫内，促进子宫修复再生。hsya作为中药活性成分，对于en-pscs的生长无抑制作用。作为递送载体的胶原膜，在体内可安全降解并具有高度的生物相容性。其多孔结构为细胞生长提供支持框架及更多的氧气，使得细胞可以更好地在损伤部位存活及增殖，从而固定联合疗法的作用位点并延长其作用时间。

技术特征：

1.子宫血管周细胞(en-pscs)联合羟基红花黄色素a在制备修复子宫损伤的药物/医疗器械中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物/医疗器械含有负载有子宫血管周细胞(en-pscs)和羟基红花黄色素a的胶原膜。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物/医疗器械为上调nrg1/erbb4信号通路表达的药物/医疗器械。

4.一种原位移植修复子宫内膜损伤的胶原支架，其特征在于，所述胶原支架由胶原膜和膜上负载的子宫血管周细胞(en-pscs)和羟基红花黄色素a组成。

5.如权利要求4所述的胶原支架在制备用于原位移植修复子宫内膜损伤的药物/医疗器械中的用途。

6.如权利要求4所述的胶原支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将子宫血管周细胞(en-pscs)与羟基红花黄色素a溶液充分混匀后，以一定的密度均匀滴加至胶原膜上，并孵育获得。

7.根据权利要求6所述的胶原支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的胶原支架的制备方法，其特征在于，所述子宫血管周细胞来自于离体的人类子宫剩余样本。

9.根据权利要求7所述的胶原支架的制备方法，其特征在于，所述含有en-pscs的羟基红花黄a混悬液中，羟基红花黄a的浓度为10-400μm。

10.根据权利要求7所述的胶原支架的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的一定的密度为0.5-2×106细胞/cm2。

技术总结本发明属于妇产科领域，具体公开了子宫血管周细胞(En‑PSCs)联合羟基红花黄色素A在制备修复子宫损伤的药物/医疗器械中的用途，进一步的公开了一种胶原支架，所述胶原支架由胶原膜和膜上负载的子宫血管周细胞(En‑PSCs)和羟基红花黄色素A组成，并进一步公开了其制备方法和制药用途；本发明发现使用来自于子宫微血管周围的周细胞(En‑PSCs)，联合中药单体羟基红花黄A，搭载胶原支架递送至全层子宫内膜损伤部位，经实验验证，通过NRG1/ErbB4通路明显改善子宫受损组织修复以及内膜血管生成，同时增加了妊娠率，具有良好的治疗效果，可应用于重度子宫内膜损伤的治疗。技术研发人员：丁利军,孙海翔,李宁受保护的技术使用者：南京鼓楼医院技术研发日：技术公布日：2024/8/5