双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度的测定方法与流程

本发明属于医药，具体涉及双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度的测定方法。

背景技术：

1、目前治疗骨质疏松的药物主要有骨重吸收抑制剂(如雌激素替代疗法、选择性雌激素受体调节剂、降钙素、双膦酸盐等)和促进骨形成药物(如氟化物、甲状旁腺激素、胰岛素样生长因子)。双膦酸类药物作为高效的骨吸收抑制剂，在治疗各种骨代谢性疾病上发挥了重要作用，广泛用于预防和治疗中老年骨质疏松。

2、口服固体制剂的体外溶出是口服固体制剂质量的重要评价指标，同时体外释放与体内的相关性，是有效性的评价指标。因此需开发产品体外释放评价方法。

3、根据国内外指导原则，结合剂型特点，通常选择水、盐酸溶液、醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液作为模拟体内胃肠道环境的常用介质。因此评价双膦酸钠口服固体制剂均涉及到上述介质。

4、双膦酸盐通常分子结构中含有两个膦酸基团连接到同一个碳原子上，极性强，在非极性固定相(c18，c8)上很难保留；由于其结构中无生色团，因此不能直接用常规的紫外检测器或荧光检测器测定。此类化合物可以与金属表面螯合，引起色峰峰拖尾。双膦酸盐类由于其难挥发和强极性的特点，不能直接应用气相色谱进行分析检测。目前该药物的分析为色谱分离带来了一定的困难；目前公开报道的方法有酸碱电位滴定法、钼黄或钼蓝比色法、离子交换色谱法、毛细管电泳法及柱前衍生的反相hplc法。

5、上述方法在以水、盐酸和醋酸盐为介质的溶出度中测定应用较广泛，而在以磷酸盐为介质的溶出度测定中应用较少。目前报道仅有采用硫酸铈为衍生试剂，进行紫外衍生测定，涉及到衍生条件复杂，操作繁琐，对条件控制严格，且专属性不高。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。

2、本发明提供一种双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度的测定方法，能够准确有效地测定溶出度，且专属性高，能够避免辅料、溶出液(缓冲液为磷酸盐)的干扰，测定条件稳定，操作简便。

3、一种双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度的测定方法，包括：

4、利用ph值为4.5-8.0的磷酸盐缓冲液为溶出介质，对所述双膦酸盐类固体制剂进行溶出，获得溶出液；

5、将所述溶出液用酸调整至ph值为1.0-3.0，获得供试品溶液；

6、采用离子色谱法或高效液相色谱法对所述供试品溶液进行检测，基于检测结果确定双膦酸盐类固体制剂的溶出度。

7、本发明人发现，分别以水、ph值1.0的盐酸为溶出介质，均可准确测定所述双膦酸盐类固体制剂的溶出度。但以磷酸盐缓冲液为溶出介质时，在c18色谱柱、阴离子交换色谱柱上色谱峰均不呈规律的色谱峰，无法准确计算。

8、鉴于此，本发明方法利用ph值为4.5-8.0的磷酸盐缓冲液为溶出介质，对所述双膦酸盐类固体制剂进行溶出，获得溶出液；再将该溶出液用酸调整至ph值为1.0-3.0，获得供试品溶液；对该供试品溶液进行检测，能够准确有效地测定双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度。

9、根据本发明的实施例，所述双膦酸盐类固体制剂包括：阿仑膦酸钠、依替膦酸钠、氯屈膦酸钠、帕米膦酸钠、奥帕膦酸钠、伊班膦酸钠等普通口服固体制剂或肠溶制剂或缓释制剂或新型其他剂型中的一种或多种混合。

10、根据本发明具体实施例，所述双膦酸盐类固体制剂为阿仑膦酸钠片剂。

11、根据本发明的实施例，所述磷酸盐缓冲液由磷酸二氢钾溶液和氢氧化钠溶液组成。

12、根据本发明的实施例，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.1-0.3mol/l；和/或，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1-0.3mol/l。

13、根据本发明的具体实施例，所述磷酸盐缓冲液由：0.2mol/l氢氧化钠溶液和0.2mol/l磷酸二氢钾溶液配制而成。

14、0.2mol/l氢氧化钠溶液：取8.00g氢氧化钠，用水溶解并稀释至1000ml。

15、0.2mol/l磷酸二氢钾溶液：取27.22g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000ml。

16、取250ml 0.2mol/l磷酸二氢钾溶液与下表不同量的0.2mol/l氢氧化钠溶液混合后，再加水稀释至1000ml，摇匀，即得ph值为4.5-8.0的磷酸盐缓冲液。

17、 ph值 0.2mol/l氢氧化钠溶液(ml) ph值 0.2mol/l氢氧化钠溶液(ml) 4.5 0 6.8 112.0 5.5 9.0 7.0 145.5 5.8 18.0 7.2 173.5 6.0 28.0 7.4 195.5 6.2 40.5 7.6 212.0 6.4 58.0 7.8 222.5 6.6 82.0 8.0 230.5

18、根据本发明的实施例，所述磷酸盐缓冲液的ph值为4.5、5.5、5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0。

19、根据本发明的实施例，利用ph值为4.5-8.0的磷酸盐缓冲液为溶出介质，对所述双膦酸盐类固体制剂进行溶出，获得溶出液的具体方法为桨法，转速为50-100rpm，溶出介质体积890-910ml，温度为(35-39)±0.5℃，取样时间为5-30min(例如5min、10min、15min、20min、30min)。

20、根据本发明的实施例，调整所述溶出液ph值的酸包括无机酸、有机酸，具体例如磷酸、盐酸、醋酸等。

21、根据本发明具体实施例，调整所述溶出液ph值的酸为0.1m盐酸溶液。

22、根据本发明的实施例，将所述溶出液用酸调整至ph值为1.0-3.0，例如1.0、1.5、2.0、2.5或3.0，获得供试品溶液。发明人研究发现，将供试品溶液的ph值用酸调整至1.0-3.0，能够准确有效地测定双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度，专属性高，避免了辅料、磷酸盐的干扰。如果将供试品溶液的ph值调整至过低(例如低于1.0)或过高(例如高于3.0)，均在离子色谱柱上色谱峰呈现双峰或肩峰，色谱峰不规律，无法准确计算。

23、在一些具体实施例，用所述溶出介质和所述酸调节所述溶出液ph值。

24、在一些具体实施例，调整所述溶出液ph值的方法包括：取溶出液2ml，加所述溶出介质2ml，加0.1m盐酸溶液2.0ml，使溶出液ph在1.0～3.0范围内；如不在该范围内，继续调整酸的加入量。

25、根据本发明的实施例，采用高效液相色谱法检测时，所用的高效液相色谱仪配有非抑制电导检测器。

26、根据本发明的实施例，采用的色谱柱为阴离子交换色谱柱或效能相当的色谱柱，所述阴离子交换色谱柱的填料为带有季铵基团的聚乙烯醇；和/或，洗脱液为草酸；和/或，洗脱方式为等度洗脱；和/或，柱温为25-40℃；和/或，检测器为非抑制电导检测器。

27、根据本发明的实施例，草酸溶液的浓度为4-7mmol/l；和/或，流速为0.7-1.0ml/min。

28、根据本发明具体实施例，采用的色谱柱为metrosep asupp4(250×4.0mm)。

29、该方法适用于含有无紫外吸收的双膦酸盐类口服固体制剂在磷酸盐介质溶出度和溶出曲线测定。

30、根据本发明的实施例，在将所述溶出液用酸调整至ph值为1.0-3.0之前和/或在将所述溶出液用酸调整至ph值为1.0-3.0之后，还包括将用0.45微米的滤膜对所述溶出液进行过滤的步骤。通过该过滤，能够有效去除未溶物，进而能够减少对后续吸光度测定的干扰。

31、根据本发明具体实施例，使用0.45μm聚醚砜膜(pes)进行过滤。

32、根据本发明具体实施例，在进行所述过滤后，弃去1-5ml(例如1ml、2ml、3ml、4ml、5ml)初滤液。研究发现，利用ph值为4.5-8.0的磷酸盐缓冲液为溶出介质获得的溶出液，经所述过滤后弃去上述初滤液时，滤膜对双膦酸盐类固体制剂无吸附作用。

33、根据本发明的实施例，采用离子色谱法对所述供试品溶液进行检测，基于检测结果确定双膦酸盐类固体制剂的溶出度；其中，检测条件如下：

34、流速0.9ml/min；

35、色谱柱metrosep asupp4-250×4.0mm；

36、柱温箱30℃；

37、进样体积100ul；

38、运行时间35min；

39、检测器非抑制电导检测器；

40、淋洗液6mmol/l草酸溶液。

41、根据本发明的具体实施例，所述检测方法包括如下步骤：

42、1)以ph值为4.5-8.0的磷酸盐缓冲液为溶出介质，分别注入溶出杯内，加热使所述溶出介质温度保持在37±0.5℃内，搅拌转速为50-100rpm；

43、2)取阿仑膦酸钠片，分别投入所述溶出杯内，立即开始计时；

44、3)针对所述溶出杯，分别在5-30min时取溶出液10ml，经0.45μm滤膜滤过，用所述溶出介质和酸调整至ph值为1.0-3.0，获得供试品溶液；使每1ml所述供试品溶液中含阿仑膦酸钠7μg；

45、4)对照品溶液的配制

46、阿仑膦酸对照品储备液：精密称取阿仑膦酸对照品适量，以超纯水定量稀释制成每1ml约含70μg的溶液；

47、阿仑膦酸对照品溶液：精密量取所述阿仑膦酸对照品储备液2.0ml，ph6.8磷酸盐缓冲液2.0ml、ph1.0盐酸溶液2.0ml，置于同一20ml容量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，即为阿仑膦酸对照品溶液；

48、5)将供试品溶液、阿仑膦酸对照品溶液采用离子色谱法进行检测，记录峰面积，获得溶出度。

49、溶出度的计算公式如下：

50、

51、注：

52、w对：对照品称样量(mg)；

53、a对：对照品峰面积；

54、a样：供试品峰面积；

55、规格：为产品的标示量

56、本发明测定方法专属性强，精密度和可重复性特别好，准确度尤其高。利用本发明方法能够准确有效地测定双膦酸盐类固体制剂在磷酸盐介质中溶出度。