南极磷虾ACE抑制肽VKGVF、FGGAL、WLDAN及其应用的制作方法

本发明涉及生物活性肽，具体涉及南极磷虾ace抑制肽vkgvf、fggal、wldan及其应用。

背景技术：

1、高血压是近年来影响我国居民健康的常见慢性疾病之一，其以动脉血压持续升高为主要临床特征，是导致冠心病、脑卒中、心力衰竭等心脑血管疾病的重要危险因素。在未使用降压药的情况下，非同日3次测量上肢血压，收缩压≥140mmhg或舒张压≥90mmhg，即考虑为高血压。

2、血管紧张素转化酶(angiotensin-i converting enzyme，ace，ec 3.2.1.41)在调节血压平衡中发挥重要作用，其通过将血管紧张素ⅰ转化为血管紧张素ⅱ(血管收缩剂)、使具有舒张血管作用的缓激肽失活、促进醛固酮分泌而引起血压升高，通过抑制ace活性可以达到治疗高血压的效果。目前临床使用的降血压药物如卡托普利和依那普利等化学合成的ace抑制剂具有明显治疗效果，但长期服用易引发肾脏损害、血管水肿、高血钾症等不良反应，寻找天然来源且安全可靠的ace抑制剂显得尤为迫切。

3、生物活性肽具有多种生理学功能，可分为抗氧化肽、免疫活性肽、降压肽、降尿酸肽、抗菌肽等。与化学合成ace抑制剂相比，食源性多肽类ace抑制剂具有安全性高、易吸收、副作用小等优势，能够为预防和治疗高血压提供新的途径。

4、南极磷虾(euphausia superba)资源储量丰富，大力发展南极磷虾产业是打造我国第二个远洋渔业的重要选择。南极磷虾蛋白含量可达到干重的65％，富含人体所需的多种必需氨基酸，是极具开发价值的海洋优质蛋白。然而，产业目前针对南极磷虾的高值化利用仍集中于南极磷虾油等脂质类产品的开发，对其蛋白资源的利用明显不足。脱脂南极磷虾粉是南极磷虾粉经加工提取南极磷虾油后的副产物，具有高蛋白低脂肪的特点，是制备生物活性肽的良好原料，但目前通常作为养殖饲料进行低值化使用或直接被丢弃，造成资源浪费。科学利用脱脂南极磷虾粉中的优质蛋白质，开发多肽类ace抑制剂，可为南极磷虾蛋白类功能制品和食源性多肽类降压药物的研制提供重要支撑。

技术实现思路

1、本发明的目的之一是提供南极磷虾ace抑制肽vkgvf、fggal、wldan，另一目的是提供其应用，以弥补现有技术的不足。

2、为达到以上目的，本发明提供的技术方案如下：

3、一种南极磷虾ace抑制肽vkgvf、fggal、wldan，其中，vkgvf具体序列为seq no.3：val-lys-gly-val-phe；fggal具体序列为seq no.8：phe-gly-gly-ala-leu；wldan具体序列为seq no.9：trp-leu-asp-ala-asn。

4、一种南极磷虾ace抑制肽的制备方法包括以下步骤：

5、(1)原料预处理；

6、(2)酶解；

7、(3)高温灭酶；

8、(4)固液分离得到南极磷虾酶解上清液；

9、(5)将所述步骤(4)所得的南极磷虾酶解上清液进行脱盐处理，处理液经喷雾干燥或冷冻干燥，得到南极磷虾酶解冻干粉，即南极磷虾ace抑制肽混合物1；

10、(6)对所述步骤(5)所得的南极磷虾ace抑制肽混合物1，使用去离子水复溶后进行纯化，选用超滤法，收集截留液，经喷雾干燥或冷冻干燥即得初步纯化后的南极磷虾ace抑制肽混合物2；

11、(7)对所述步骤(6)所得的南极磷虾ace抑制肽混合物2，使用去离子水复溶后进行再次纯化，选用凝胶过滤层析法，收集层析分离组分，经喷雾干燥或冷冻干燥即得南极磷虾ace抑制肽混合物3；

12、(8)经液质联用技术对所述步骤(7)所得的南极磷虾ace抑制肽混合物3进行鉴定，最终得到所述的13种南极磷虾ace抑制肽。

13、作为优选的，所述步骤(1)中将脱脂南极磷虾粉按照料液比1:4～1:8g/ml加入缓冲液并混匀，通过湿法超微粉碎法使脱脂南极磷虾粉充分粉碎，粉碎时间1～10min；优选料液比1:6，粉碎时间2min。

14、作为优选的，所述步骤(2)进行酶解，调节缓冲液ph 2.0～12.0，根据底物质量加入200～8000u/g的蛋白酶启动酶解反应，酶解时间为1～6h，酶解温度为25～75℃；所述蛋白酶选用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或多种；优选碱性蛋白酶，添加量4000u/g，酶解ph 7.5，酶解时间3.5h，酶解温度55℃。

15、作为优选的，所述步骤(3)中的灭酶温度为90～100℃，灭酶时间为10～20min；优选灭酶温度100℃，灭酶时间20min。

16、作为优选的，所述步骤(4)中的离心速度为3000～8000r/min，离心时间10～30min；优选离心速度为7500r/min，离心时间20min。

17、作为优选的，所述步骤(5)中的脱盐方法为：将南极磷虾酶解上清液使用截留分子量为200da的纳滤膜进行脱盐，处理压力0.6～1.4mpa，循环处理1～5次；优选处理压力1.2mpa，循环处理3次。

18、作为优选的，所述步骤(6)中的超滤条件为：将南极磷虾ace抑制肽混合物1使用去离子水复溶至质量浓度0.5～10g/l的溶液，采用截留分子量为1kda或3kda或5kda的超滤膜进行超滤处理，处理压力0.5～1.5mpa，处理量0.5～10l/h；优选溶液质量浓度5g/l，超滤膜截留分子量为1kda，处理压力1.0mpa，处理量3l/h。

19、作为优选的，所述步骤(7)中的凝胶过滤层析条件为：将南极磷虾ace抑制肽混合物2使用去离子水复溶至质量浓度10～100mg/ml的溶液，采用akta蛋白分离纯化系统经葡聚糖凝胶sephadex g-15进行纯化，上样量1～10ml，洗脱液为去离子水，洗脱流速为0.2～1.0ml/min；优选溶液质量浓度30mg/ml，上样量5ml，洗脱流速为0.5ml/min。

20、所述南极磷虾ace抑制肽在制备抑制血管紧张素转化酶(ace)制品中的应用；所述制品包括保健品、药品等。

21、所述南极磷虾ace抑制肽在制备降血压功效制品中的应用；所述制品包括食品、保健品、药品等。

22、所述南极磷虾ace抑制肽vkgvf、fggal、wldan在制备降血压药品或辅助降血压食品中的应用。

23、本发明的优点和有益效果：

24、本发明利用脱脂南极磷虾粉制备南极磷虾ace抑制肽，所获得的多肽具有优异的ace抑制活性。通过质谱鉴定，共筛选得到了13种小分子多肽：glgif、apgr、vkgvf、lfaga、lggif、fgaggl、lsgay、fggal、wldan、rdwpegr、dwpegr、ylggal和lgglnq。这13种多肽具有不同程度的ace抑制活性。

25、本发明制备获得的南极磷虾ace抑制肽，其ace抑制能力是目前已确认的南极磷虾ace抑制肽的几十倍甚至上百倍，具有优异的ace抑制效果。南极磷虾ace抑制肽能够应用于食品、保健品、药品等领域。本发明对南极磷虾蛋白资源进行高值精准利用，能够有效提高资源利用率和产业价值，同时也为预防和治疗高血压提供新途径和新方法。

26、本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。