抗干细胞因子抗体及其使用方法与流程

本发明涉及与干细胞因子(scf)及其特定部分结合的抗体及其抗原结合片段，并且涉及使用这些抗体和抗原结合片段的方法。以电子方式提交的文本文件的描述随本文以电子方式提交的文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：opsl_001_01wo_seqlist_st25，记录日期：2020年9月16日，文件大小：58kb)。

背景技术：

1、炎性疾病是全世界发病率和死亡率的主要原因。一些类型的慢性炎症可导致纤维化，所述纤维化是作为修复或反应过程的器官或组织中过量纤维结缔组织的形成或发展，与作为器官或组织的正常组分的纤维组织的形成相反。慢性炎症以及纤维化可影响几乎所有的组织和器官系统，并且纤维化组织重塑可影响癌症转移并加速移植接受者中的慢性移植排斥反应。

2、干细胞因子(scf)及其受体c-kit是维持慢性炎症和纤维化疾病的重要因子(el-koraie等人,kidney int.60:167(2001)；powell等人,am.j.physiol.289:g2(2005)；elkossi等人,am.j.kidney dis.41:785(2003)；powell等人,am.j.physiol.277:c183(1999)ding等人j pathol.2013年6月；230(2):205-14.,berlin等人lab invest.2006年6月；86(6):557-65。c-kit是存在于许多细胞类型中的iii型受体-酪氨酸激酶(orr-urtreger等人,development 109:911(1990))。免疫细胞(如肥大细胞、嗜酸性粒细胞和先天淋巴样细胞2和3(ilc2和ilc3))都是c-kit+细胞，其可以驱动慢性炎症过程，这取决于所涉及的疾病和器官。在炎症反应开始时，包括scf的各种介质活化c-kit+免疫细胞，其又产生使成纤维细胞变成活化的肌成纤维细胞的细胞因子。肌成纤维细胞分泌细胞外基质蛋白、胶原和纤连蛋白，从而引起组织纤维化。活化的肌成纤维细胞、活化的上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、单核细胞及其他细胞也在细胞表面上表达scf，其活化更多的c-kit+免疫细胞，从而引起更多的细胞因子释放并维持炎症。

3、本领域需要更有效和更特异性的炎性疾病治疗。本发明解决了这种及其他需要。

技术实现思路

1、在一个方面，本公开提供了与干细胞因子(scf)特异性结合的抗体及其片段。在一些实施方案中，抗体及其片段特异性结合scf同种型scf248。在一些实施方案中，抗体及其片段包含重链互补决定区(cdr)，其中重链cdr1、cdr2和cdr3分别包含seq id no:1、2和3。在一些实施方案中，抗体及其片段包含轻链cdr，其中轻链cdr1、cdr2和cdr3分别包含seqid no:4、5和6。在一些实施方案中，抗体及其片段包含分别包含seq id no:1、37和3的重链cdr1、cdr2和cdr3。在一些实施方案中，抗体及其片段包含重链可变区，所述重链可变区与选自由seq id no:7、8、9、10、11和12组成的组的序列包含至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在一些实施方案中，抗体及其片段包含轻链可变区，所述轻链可变区与选自由seq id no:13、14、15、16和17组成的组的序列包含至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在一些实施方案中，抗体及其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含选自seq id no:7、8、9、10、11和12组成的组的氨基酸序列，所述轻链可变区包含选自seq id no:13、14、15、16和17组成的组的氨基酸序列。

2、在一些实施方案中，抗体或其片段包含根据seq id no:7的重链可变区氨基酸序列和根据seq id no:16的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含根据seq id no:8的重链可变区氨基酸序列和根据seq id no:16的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含根据seq id no:9的重链可变区氨基酸序列和根据seq id no:16的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含根据seqid no:10的重链可变区氨基酸序列和根据seq id no:16的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含根据seq id no:11的重链可变区氨基酸序列和根据seq idno:16的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含根据seq id no:12的重链可变区氨基酸序列和根据seq id no:16的轻链可变区氨基酸序列。

3、在一些实施方案中，抗体或其片段为人源化的。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体包含人igg1结构域或人igg4结构域。在一些实施方案中，抗体是抗原结合片段，其中所述片段选自fab、f(ab′)2、fab′、scfv和单结构域抗体(sdab)。

4、在一些实施方案中，抗体或其片段阻断scf(例如scf248)与c-kit之间的相互作用。在一些实施方案中，抗体与scf248特异性结合。在一些实施方案中，抗体不结合scf220。在一些实施方案中，抗体通过引起scf的内化防止scf248与c-kit的相互作用，从而使其在细胞表面上不可用。

5、在一个方面，本公开提供了药物组合物，其包含本文提供的抗体或其片段。在一些实施方案中，药物组合物包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

6、在一些实施方案中，本公开提供了分离的核酸分子，其编码本文提供的抗体或其片段。在一些实施方案中，本公开提供了一种表达载体，其包含编码抗体或其片段的核酸。在一些实施方案中，本公开提供了一种重组宿主细胞，其包含表达载体。

7、在一个方面，本公开提供了用于制备与干细胞因子同种型248(scf248)特异性结合的抗体的方法，所述方法包括用包含seq id no:30(asslrndssssnrkaknppgd)的肽或其片段免疫宿主动物，并且从免疫的宿主动物获得抗体。在一些实施方案中，宿主动物不是人。在一些实施方案中，seq id no:30的片段包含seq id no:30的至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或20个连续氨基酸。在一些实施方案中，seq id no:30的片段包含seq id no:30的5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个连续氨基酸。在一些实施方案中，seq id no:30的片段的n端氨基酸是在seq id no:30的n端的位置1处的丙氨酸。在一些实施方案中，所述方法包括用由seq id no:30组成的肽免疫宿主动物。在一些实施方案中，来自免疫的宿主动物的抗体获自从宿主动物分离的免疫细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括使用免疫细胞产生杂交瘤。因此，在一些实施方案中，本公开提供了产生本文所述的单克隆抗体的杂交瘤。

8、在一个方面，本公开提供与scf248特异性结合的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段与包含seq id no:33的至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个或至少13个连续氨基酸的表位结合，其中所述抗体抑制scf248与c-kit的相互作用。在另外的实施方案中，表位包含seq id no:33或seq id no:36。在又另外的实施方案中，表位包含seq idno:33或seq id no:36。

9、在一个方面，本公开提供了用于抑制scf与c-kit之间的相互作用的组合物和方法。c-kit在免疫细胞、造血干细胞和一些结构性细胞上表达。c-kit配体scf248可在肌成纤维细胞、活化的上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、单核细胞及其他细胞上上调。在一些实施方案中，组合物和方法特异性抑制scf248与c-kit之间的相互作用。例如，在一些实施方案中，组合物和方法特异性抑制肌成纤维细胞上的scf248与免疫细胞上的c-kit之间的相互作用。作为另一实例，在一些实施方案中，本文提供的组合物和方法特异性地抑制肌成纤维细胞、活化的上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和/或单核细胞上的scf248与免疫细胞和/或结构性细胞上的c-kit之间的相互作用。在一些实施方案中，所述方法包括使肌成纤维细胞上的scf248与本文提供的抗体或其片段接触。在一些实施方案中，本文提供的抗体或其片段阻断scf248与c-kit的结合。在一些实施方案中，所述阻断是经由空间位阻。在一些实施方案中，本文提供的抗体或其片段内化scf248。

10、在一些实施方案中，本公开提供了用于抑制有需要的受试者的炎症的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的抗体或其片段。在一些实施方案中，本公开提供了用于抑制有需要的受试者的炎性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的抗体或其片段。在另外的实施方案中，所述炎性疾病是慢性炎性疾病。在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗有需要的受试者的炎症和/或慢性炎性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的抗体或其片段。

11、在一些实施方案中，本公开提供了用于抑制有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的抗体或其片段。在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的抗体或其片段。在实施方案中，所述方法还包括施用一种或多种另外的疗法和/或治疗剂。

12、在一些实施方案中，炎性疾病或纤维化疾病选自由以下组成的组：荨麻疹、特应性皮炎、大疱性类天疱疮、硬皮病、系统性硬化症、非酒精性脂肪肝炎(nash)、原发性硬化性胆管炎、肝硬化、肺纤维化(例如，特发性肺纤维化(ipf)、硬皮病肺纤维化)、慢性阻塞性肺疾病(copd)、急性呼吸窘迫综合征(ards)、囊性纤维化、支气管周围纤维化、高敏性肺炎、哮喘、博来霉素肺(bleomycin lung)、心内膜心肌纤维化、纤维肌痛、嗜酸性食管炎、放射性纤维化、类风湿性关节炎和炎性肠病。