鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体的制作方法

本发明属于抗体制备，尤其是涉及鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体。

背景技术：

1、假丝酵母菌属（ candida）隶属子囊菌门，又称为念珠菌，是一类常见的条件致病菌。通过侵犯宿主的粘膜和组织致病，引发局部及全身的炎症反应。该菌属各种不同菌株致病力差异很大，其中最常见的白色念珠菌，其次为热带念珠菌。

2、甘露聚糖常以糖蛋白的形式存在于多种微生物中,是念珠菌属表面除葡聚糖外的另一重要抗原决定簇。甘露聚糖是机体固有免疫和适应性免疫的重要抗原，能引起很强的抗体反应。

3、近年来，白色念珠菌发病率呈逐渐上升趋势，死亡率更是居高不下，其病亡率与抗真菌治疗时间有着密切的关系，目前诊断念珠病的金标准仍是真菌培养，其培养时间长且阳性率低，不适当或延迟治疗会增加患者的死亡率，因此早期快速检测并采取准确的治疗措施是降低死亡率的关键。本研究发明单克隆抗体应用于早期快速检测试剂盒，为检测念珠菌感染提供了新的解决方法。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体。

2、本发明采用的技术方案是：鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株，命名为dg8，分类为杂交瘤细胞，保藏日期为2023年11月8日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc），保藏编号为cgmcc no.45743。

3、鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体，抗体dg8包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如seq id no:1所示的cdrh1、seq id no:2所示的cdrh2和seq id no:3所示的cdrh3，轻链可变区包括如seq id no:4所示的cdrl1、seq id no:5所示的cdrl2和seq id no:6所示的cdrl3；

4、seq id no:1  dfsfthywmn

5、seq id no:2  eirlksnnyatyyaesvkg

6、seq id no:3  nlgmdy

7、seq id no:4  sasssvtymf

8、seq id no:5  dtsnlas

9、seq id no:6  qqwkwdiyprt

10、优选地，抗体dg8重链可变区氨基酸序列为seq id no:7所示，轻链可变区氨基酸序列为seq id no:9所示；

11、重链可变区序列

12、seq id no:7

13、evklhesggglvqpggsmklscvasdfsfthywmnwvrqspekglewiaeirlksnnyatyyaesvkgrftisrddvkwsiylqmnslrvedtgiyfctsnlgmdywgqgtsvtvsaakttap

14、轻链可变区序列

15、seq id no:9

16、msafpgekvtltcsasssvtymfwyqqkpgssprllihdtsnlasgvpgrfsgsgsgtsysltlsrveaedaatyycqqwkwdiyprtfgggtkleikradaaptvs

17、优选地，抗体dg8由保藏编号为cgmcc no.45743的鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株产生。

18、核酸分子，包含编码鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体的核苷酸。

19、优选地，所述核酸分子编码抗体dg8的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:8所示，所述核酸分子编码抗体dg8的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:10所示；

20、重链可变区核苷酸序列

21、seq id no:8

22、gaggtgaagcttcacgaatctggaggaggcttggtacaacctggaggatccatgaaactctcctgtgttgcctctgatttctctttcactcattattggatgaactgggtccgccagtctccagagaagggacttgagtggattgctgaaattagattgaaatctaataattatgcaacatattatgcggagtctgtgaaagggaggttcaccatctcaagagatgatgtcaaatggagtatctacttacaaatgaacagcttaagggttgaagacactggcatttatttctgtacttctaacctaggtatggactactggggtcaaggaacctcagtcactgtctctgcagccaaaacaacagcccca

23、轻链可变区核苷酸序列

24、seq id no:10

25、atgtctgcatttccaggggagaaggtcaccctgacctgcagtgccagctcaagtgtgacttacatgttctggtaccagcagaagccaggatcctcccccagactcctgattcatgacacatccaacctggcttctggagtccctggtcgcttcagtggcagtggctctgggacctcttactctctcacactcagccgagtggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcaatggaagtgggatatttacccacggacgttcggtggaggcaccaaactggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc

26、检测白色念珠菌甘露聚糖和/或热带念珠菌甘露聚糖的试剂盒，包括鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体。

27、本发明具有的优点和积极效果是：提供了鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体，与白色念珠菌甘露聚糖、热带念珠菌甘露聚糖反应强烈，不与光滑念珠菌甘露聚糖、克柔念珠菌甘露聚糖、近平滑念珠菌甘露聚糖反应，与隐球菌荚膜多糖、1，3-β-d葡聚糖、曲霉半乳甘露聚糖、脂多糖、肽聚糖无交叉反应，基于这些特性，为抗白色、热带念珠菌甘露聚糖基因工程抗体制备奠定了基础。

技术特征：

1.鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为dg8，保藏编号为cgmcc no.45743。

2.鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体，其特征在于：抗体gd8包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如seq id no:1所示的cdrh1、seq id no:2所示的cdrh2和seq id no:3所示的cdrh3，轻链可变区包括如seq id no:4所示的cdrl1、seq id no:5所示的cdrl2和seq id no:6所示的cdrl3。

3.根据权利要求2所述的鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体，其特征在于：抗体dg8重链可变区氨基酸序列如seq id no:7所示，轻链可变区氨基酸序列如seq id no:9所示。

4.根据权利要求2或3所述的鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体，其特征在于：抗体dg8由保藏编号为cgmcc no.45743的鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株产生。

5.核酸分子，其特征在于：包含编码权利要求2或3所述的鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体的核苷酸。

6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码抗体dg8的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:8所示，所述核酸分子编码抗体dg8的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:10所示。

7.检测白色念珠菌甘露聚糖和/或热带念珠菌甘露聚糖的试剂盒，其特征在于：包括权利要求2-4中任一所述的鼠抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体。

技术总结本发明提供一种抗白色、热带念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗白色、热带念珠菌甘露聚糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列，并用ELISA方法对抗体包容性、特异性、抗体效价进行了鉴定，为抗白色、热带念珠菌甘露聚糖基因工程抗体的研发奠定了基础。技术研发人员：周跃辉,陈特长,刘骞,马秀楠,张燕,刘宇,王玉芳,刘梦,李世林,苑庆华,何永胜受保护的技术使用者：天津喜诺生物医药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/2