3'3'-cGAMP在制备增强MUC16CAR-T对肿瘤细胞杀伤效果药物中的应用

本发明涉及免疫细胞治疗，尤其涉及3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果药物中的应用。

背景技术：

1、卵巢癌（ovarian-cancer, ov）是女性妇科的三大肿瘤之一，其发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌，由于卵巢位于盆腔深处，发病隐匿，早期疾病临床特征不明显，绝大多数患者就诊时已经为晚期，甚至多数已向远端转移，大部分患者失去根治性手术治疗的最佳时机，导致卵巢癌的死亡率居妇科恶性肿瘤首位，5年生存率仅有20%。近些年出现许多新型药物和新型疗法，但均未能彻底根治、清除癌细胞。目前临床针对卵巢癌的治疗以肿瘤细胞减灭手术联合铂类药物化疗为主，但肿瘤的复发与耐药性是治疗最终失败的原因。近些年来，靶向治疗和免疫疗法的快速发展，为治疗卵巢癌提供了新的希望。

2、随着免疫学、分子生物学与基因工程技术的进展，肿瘤免疫治疗已经成为肿瘤治疗手术、放疗和化疗之后的第四种模式。其中cgas-sting通路引起了广泛关注，cgas-sting-tbk1轴在不同物种中是先天免疫应答的主要信号通路。针对cgas-sting-tbk1信号通路的药物开发在肿瘤免疫治疗方面前景广阔，其中sting激动剂已成为当前研究的热点，与大多数大分子免疫检查点抑制剂不同，sting激动剂是一类具有开创性意义的小分子固有免疫激动剂。一方面，它的分子量小，可以通过系统给药在肿瘤内实现较高浓度。另一方面，sting激动剂能够弥补免疫检查点抑制剂的不足，通过启动和招募瘤内肿瘤特异性t细胞，对“冷肿瘤”也具有良好的抗肿瘤效应。因此，开发新型sting激动剂，挖掘其抗肿瘤作用机制，具有非常重要的意义。

3、当细胞受到病原体（如病毒、细菌等）入侵时，它们会通过一系列信号通路启动免疫反应。其中，3'3'-cgamp作为一种重要的第二信使分子和sting激动剂，在这些信号通路中扮演着关键角色。3'3'-cgamp是由两个核苷酸单元组成的二核苷酸，通常由环腺苷酸（camp）和环鸟苷酸（cgmp）构成。它的合成通常是由细胞内的环腺苷酸合成酶（cgas）介导的，在感染或细胞压力情况下，cgas可以识别并结合到病原体的dna或rna，引发其活化并催化3'3'-cgamp的合成。一旦3'3'-cgamp被合成出来，它会作为细胞内的信号分子，通过与受体蛋白sting结合，启动下游免疫信号通路，导致干扰素的产生，激活天然免疫系统，并诱导炎症反应。这些免疫反应有助于清除病原体，保护机体免受感染。

4、黏蛋白16 (mucin16, muc16)，是1981年美国科学家bast等从卵巢上皮癌抗原中检测出且能被单克隆抗体oc125识别的一种糖蛋白抗原，muc16在多种肿瘤中高表达，与配体结合，通过多种肿瘤相关信号通路，对肿瘤发生发展、迁移侵袭及肿瘤免疫具有重要作用。muc16在正常卵巢组织中不存在，但在卵巢上皮癌患者的血清中常见升高，是卵巢上皮癌诊断和监测复发最常用的血清学生物标志物。目前，靶向muc16的car-t（chimericantigen receptor t cells, 嵌合抗原受体）治疗方案已经取得一定成效，相关临床前研究以及临床试验正在进行当中，这些受体融合了肿瘤特异性抗体的单链可变片段（scfv）与效应t细胞的信号分子，共同靶向肿瘤细胞，作为肿瘤相关抗原之一，muc16在大多数卵巢癌上过度表达，因此被认为是car-t治疗卵巢癌的理想靶点。

5、然而，car-t细胞治疗的效果容易受机体免疫状态影响，并且car-t细胞注射进体内以后，杀伤效率会随时间增长而降低。因此，如何消除免疫抑制、激活机体的免疫系统，是提高car-t治疗效果的关键所在。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果药物中的应用，3'3'-cgamp可以非常显著的增强muc16 car-t杀伤表达muc16抗原的肿瘤靶细胞的效果，提高癌症的治疗效果。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的药物中的应用。

4、优选的，所述3'3'-cgamp可增强muc16 car-t对表达muc16抗原的肿瘤细胞的杀伤效率。

5、优选的，所述肿瘤细胞为表达muc16抗原的肿瘤细胞。

6、优选的，所述表达muc16抗原的肿瘤细胞为卵巢癌细胞。

7、优选的，所述增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的3'3'-cgamp浓度为5~30 μm。

8、本发明所述的天然免疫激活剂3'3'-cgamp与现有技术相比的有益效果为：

9、（1）本发明的天然免疫激活剂环二核苷酸3'3'-环状鸟苷酸-腺苷酸(3'3'-cgamp)能直接激活鼠和人树突状细胞，促进免疫细胞的活化，激活机体免疫系统，增强免疫系统的应答，进一步显著的增强muc16 car-t杀伤表达muc16抗原的肿瘤靶细胞的效果，提高癌症治疗的效果。

10、（2）本发明所述的小分子化合物3'3'-cgamp是一种安全的抗肿瘤试剂。在实验过程中，无论是普通显微镜还是荧光显微镜观察，均未发现细胞状态在3'3'-cgamp处理后发生任何异变，证明该小分子化合物很大程度上是一种安全、无显著毒副作用的抗肿瘤试剂。并且可以适用于多种不同种类的培养细胞和小鼠动物模型，其应用范围广泛，有利于多种不同抗肿瘤环境的使用，有望在临床抗肿瘤试验中获得使用和推广。

11、（3）本发明所述的小分子免疫激活剂能够很迅速的穿过细胞表面进入细胞，使用非常简便易行，直接共孵育即可诱导细胞产生协同抗肿瘤反应。避免了其他类型药物活性有限、半衰期短、需要血液注射给药等局限性。

技术特征：

1.3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的药物中的应用，其特征在于，所述3'3'-cgamp可增强muc16 car-t对表达muc16抗原的肿瘤细胞的杀伤效率。

3.根据权利要求1所述3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞为表达muc16抗原的肿瘤细胞。

4.根据权利要求3所述天然免疫激活剂3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对表达muc16抗原的肿瘤细胞的杀伤效率药物中的应用，其特征在于，所述表达muc16抗原的肿瘤细胞为卵巢癌细胞。

5.根据权利要求1所述3'3'-cgamp在制备增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的药物中的应用，其特征在于，所述增强muc16 car-t对肿瘤细胞杀伤效果的3'3'-cgamp浓度为5~30 μm。

技术总结本发明提供了3'3'‑cGAMP在制备增强MUC16 CAR‑T对肿瘤细胞杀伤效果药物中的应用，属于免疫细胞治疗技术领域。本发明的3'3'‑cGAMP能直接激活鼠和人树突状细胞，促进免疫细胞的活化，增强免疫系统的应答，进一步显著的增强MUC16 CAR‑T杀伤表达MUC16抗原的肿瘤靶细胞的效果，提高癌症治疗的效果。并且，3'3'‑cGAMP是一种安全、无显著毒副作用的抗肿瘤试剂，能够很迅速的穿过细胞表面进入细胞，使用非常简便易行，直接共孵育即可诱导细胞产生协同抗肿瘤反应。避免了其他类型药物活性有限、半衰期短、需要血液注射给药等局限性。技术研发人员：周翔,张文,黄文武,蔡苗苗受保护的技术使用者：武汉科技大学技术研发日：技术公布日：2024/9/9