基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法与流程

本发明属于化妆品检测，尤其涉及防晒剂的检测，具体为一种基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法。

背景技术：

1、随着人们对防晒产品需求的增高，对防晒品的品质关注也在日见增高。根据国外皮肤病学杂志的报道基于对澳大利亚定期使用防晒霜的纵向人群研究结果指出：防晒剂的不良反应发生率约19％，主要是由于防晒剂经皮渗透进入体循环从而导致的不良反应。为了降低防晒剂的经皮渗透性，一些技术方案通过对防晒剂的处理来抑制化学防晒剂与皮肤的直接接触从而减少经皮渗透。如有的防晒剂经过包裹处理后可以达到减少经皮渗透进入体循环的目的。即使如此，这类新型的防晒剂包裹物的添加也并不是越多越好，添加过量，同样会影响皮肤的健康，引起过敏反应甚至是毒性反应。

2、现有的两种新型防晒剂，是将有机防晒剂乙基己基三嗪酮和双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪分别包裹于聚合物微球内部形成防晒剂包裹物，氧化锌负载在聚合物微球表面。经研究，这两种防晒剂经过包裹处理后不但达到了减少经皮渗透进入体循环的目的，同时将物理防晒剂(氧化锌)和化学防晒剂结合，达到广谱防护、提高spf值的作用。现有文献报道的防晒剂包裹物的含量检测方法较少，但该两种防晒剂包裹物已经广泛应用于日用化妆品中，且添加量较高。目前我国的《化妆品安全技术规范》(2015年版)(以下简称《规范》)仅针对22种普通防晒剂制定了检验方法并规定了最大允许量，现国内尚未对防晒剂包裹物建立有效的检测方法。

3、采用《规范》中第四章5.8《化妆品中3-亚苄基樟脑等22种防晒剂的检测方法》(下文简称现行标准)对2种防晒剂包裹物进行测定，发现存在的主要问题有：现行标准提供的溶剂无法对各类基质中防晒剂包裹物进行充分提取；二是由于防晒剂包裹物为聚合微球结构，现行标准处理过程无法对该结构进行破坏，故导致现行标准的色谱条件下无法检出两种防晒剂的含量；三是现行标准的流动相梯度使两种化合物分离不完全。

技术实现思路

1、本发明的目的在于基于以上技术问题，提供一种基于高效液相色谱检测化妆品中上述两种防晒剂包裹物的方法，填补防晒剂包裹物检测的空白，对《规范》中防晒剂测定方法的形成补充，更好地满足了化妆品的检测监管要求。本发明通过以下技术方案实现：

2、一种基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，所述两种防晒剂包裹物为将氧化锌负载在聚合物微球表面，将有机防晒剂乙基己基三嗪酮和双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪分别包裹于聚合物微球内部形成防晒剂包裹物，包括以下步骤：

3、步骤一、称取供试化妆品，加入二甲基甲酰胺，涡旋1～2分钟，获得混合液a，混合液a中供试化妆品的含量为0.05g/ml；

4、步骤二、将混合液a置于烘箱中95～100℃加热2～2.5h，取出后冷却至室温，再加入四氢呋喃，摇匀，获得混合液b，混合液b中的供试品含量是0.01g/ml；

5、步骤三、将混合液b超声提取30～35min后，4000r/min离心5～10min，取上清液；

6、步骤四、将上清液置于容器内，加混合溶剂c进行稀释摇匀，获得混合液d；上清液与混合溶剂d的体积比为1:10，所述混合溶剂c为甲醇、四氢呋喃、水和高氯酸的混合物，且甲醇、四氢呋喃、水、高氯酸的体积比为250:450:300:0.2；

7、步骤五、将混合液d经0.45μm滤膜过滤，作为高效液相待测溶液；

8、步骤六、高效液相测定：采用c18反向色谱柱进行分析，检测器：二极管阵列检测器，检测波长：311nm柱温：30℃；流动相为：流动相ⅰ：甲醇；流动相ⅱ：四氢呋喃；流动相ⅲ：水和高氯酸混合液，且其中水和高氯酸的体积比为300：0.2；梯度洗脱。

9、其中，所述供试化妆品为水剂、乳液、膏霜、粉和唇膏中任意一种。

10、对比洗脱程序的优化，步骤六中的洗脱程序为：在时间0min、3min、3.1min、25min、25.1min、32min、32.1min和40min，流动相ⅰ的百分比变化分别为：25％、25％、25％、25％、45％、45％、25％和25％；流动相ⅱ的百分比变化分别为：15％、15％、45％、45％、50％、50％、15％和15％；流动相ⅲ的百分比变化分别为：60％、60％、30％、30％、5％、5％、60％和60％；流速：1.0ml/min。

11、对于色谱柱选择的优化，所选用的色谱柱为：agilent sb c18，250mm×4.6mm×5μm，或资生堂capcell pak mg c18，250mm×4.6mm×5μm，或zafex supfex aq-c18 c18，250mm×4.6mm×5μm，进样量10μl。

12、对部分操作程序的优化：

13、步骤一、称取供试化妆品，加入二甲基甲酰胺，涡旋1分钟，获得混合液a；

14、步骤二、将混合液a置于烘箱中95℃加热2h；

15、步骤三、将混合液b超声提取30min后，4000r/min离心5min，取上清液。

16、本发明的优点和有益效果是：

17、本发明改进了提取溶剂，使防晒剂包裹物提取完全；采用特定的加热温度和时间作为破坏微球结构的方法，使包裹结构被破坏将乙基己基三嗪酮、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪完全释放到提取溶剂中，使该两种防晒剂可以被有效地检出；同时优化了色谱条件流动相梯度洗脱方法，提高了方法的灵敏度与分离度。本文方法即填补了防晒剂包裹物检测的空白，又可作为对《规范》中防晒剂测定方法的补充，更好地满足了化妆品的检测监管要求。

技术特征：

1.一种基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，所述两种防晒剂包裹物为将氧化锌负载在聚合物微球表面，将有机防晒剂乙基己基三嗪酮和双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪分别包裹于聚合物微球内部形成防晒剂包裹物，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，所述聚合物微球是一种由亲脂性多层结构环绕防晒剂的囊泡结构，所述聚合物微球中的基质为聚己内酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚多巴胺及乙基纤维素中任意一种。

3.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，其特征在于：步骤六中的洗脱程序为：在时间0min、3min、3.1min、25min、25.1min、32min、32.1min和40min，流动相ⅰ的百分比变化分别为：25％、25％、25％、25％、45％、45％、25％和25％；流动相ⅱ的百分比变化分别为：15％、15％、45％、45％、50％、50％、15％和15％；流动相ⅲ的百分比变化分别为：60％、60％、30％、30％、5％、5％、60％和60％；流速：1.0ml/min。

4.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，其特征在于：所选用的色谱柱为：agilent sb c18，250mm×4.6mm×5μm，或资生堂capcellpak mg c18，250mm×4.6mm×5μm，或zafex supfex aq-c18 c18，250mm×4.6mm×5μm，进样量10μl。

5.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，其特征在于：所述供试化妆品为水剂、乳液、膏霜、粉和唇膏中任意一种。

6.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，其特征在于：步骤一、称取供试化妆品，加入二甲基甲酰胺，涡旋1分钟，获得混合液a；

技术总结本发明公开了一种基于高效液相色谱检测化妆品中两种防晒剂包裹物的方法，两种防晒剂包裹物为将氧化锌负载在聚合物微球表面，有机防晒剂乙基己基三嗪酮和双‑乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪分别包裹于聚合物微球内部形成，步骤：1)称取供试品，加入二甲基甲酰胺；2)95～100℃加热2～2.5h，冷却至室温，加入四氢呋喃；3)超声提取30～35min后，离心，取上清；4)将上清加混合溶剂进行稀释，混合溶剂为甲醇、四氢呋喃、水和高氯酸的混合物；5)过滤；6)采用C18反向色谱柱进行分析，流动相A：甲醇；流动相B：四氢呋喃；流动相C：水和高氯酸混合液，梯度洗脱。本方法填补了防晒剂包裹物检测的空白，完善了化妆品的检测。技术研发人员：韩君,王昆鹏,张晓东,崔黎,韩峰,王栋受保护的技术使用者：内蒙古自治区药品检验研究院（内蒙古自治区化妆品检验检测中心）技术研发日：技术公布日：2024/9/12