一种大黄鱼肠道细胞系LYCI及其构建方法和应用

本发明属于海水鱼类细胞培养，具体涉及一种大黄鱼肠道细胞系及其构建方法和应用。

背景技术：

1、鱼类细胞系作为鱼类生物学基础研究的重要体外研究系统，相对活体实验，有着人力需求量低、操作简便、重复性好和试验周期短等优势，为鱼类在病毒学、免疫学、营养学、细胞学和遗传学等研究领域做出了重要贡献。其中，肠道细胞是体外研究鱼类营养吸收、物质运输、免疫调控和肠道屏障功能必不可少的工具。

2、大黄鱼(larimichthys crocea)隶属鲈形目(perciformes)、石首鱼科(sciaenidae)、黄鱼属(larimichthys)，俗称黄花鱼、黄金龙和黄瓜鱼等。随着大黄鱼高密度养殖规模的扩大，细菌和病毒等病害引起的疾病严重制约了大黄鱼的健康养殖发展。到目前为止，尚未见关于大黄鱼肠道细胞系的相关报道。建立大黄鱼肠道细胞系，不仅可以丰富海水鱼类细胞系资源，还可进行大黄鱼相关基因功能验证、细菌或者病毒的感染机制的研究等，为大黄鱼体外研究营养吸收、免疫调控和肠道屏障功能提供理想材料。

技术实现思路

1、基于此，本发明提供一种已连续培养超过30代并保持稳定的大黄鱼肠道细胞系。

2、为实现上述目的，本发明提供一种大黄鱼肠道细胞系lyci(larimichthys croceacell lyci)，其特征在于，其于2023年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c2023241。

3、本发明还提供所述大黄鱼肠道细胞系lyci的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

4、s1原代细胞培养：将大黄鱼肠道组织剪成小块，均匀接种到细胞培养瓶，将细胞培养瓶于27℃培养箱倒置培养24h后，加入原代完全培养基，置于培养箱中培养；

5、s2细胞传代培养：当原代培养细胞铺满培养瓶底，去除培养液，清洗细胞，加入胰酶进行消化；待细胞皱缩变圆时，终止细胞消化，收集细胞沉淀，加入原代完全培养基，按1:2的体积比分装入两个细胞培养瓶进行培养，培养至铺满培养瓶底后重复前面的步骤，直至细胞系建成。

6、本发明还提供所述大黄鱼肠道细胞系lyci的传代培养方法，其特征在于，将大黄鱼肠道细胞系lyci培养至铺满培养瓶底，清洗细胞，加入胰酶进行消化；待细胞皱缩变圆时，加入完全培养基终止细胞消化，离心去上清；再重新加入传代完全培养基，按1:2的体积比分装入两个细胞培养瓶进行培养，培养至铺满培养瓶底后重复前面的步骤。

7、本发明还保护所述大黄鱼肠道细胞系lyci在质粒转染中的应用。

8、本发明所述大黄鱼肠道细胞系lyci的生长状态良好，3-4天传代一次；细胞长满细胞培养瓶时，按照1：2的体积比例进行连续传代培养；可长期保存于液氮，复苏效率高。大黄鱼肠道细胞系lyci连续培养超过30代并保持稳定；能够提供大量稳定的大黄鱼肠道细胞，可进行质粒转染、免疫组化等多类分子生物学实验，用于大黄鱼免疫相关基因的功能研究等。

技术特征：

1.一种大黄鱼肠道细胞系lyci(larimichthys crocea cell lyci)，其特征在于，其于2023年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c2023241。

2.一种权利要求1所述大黄鱼肠道细胞系lyci的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.一种权利要求1所述大黄鱼肠道细胞系lyci的传代培养方法，其特征在于，将大黄鱼肠道细胞系lyci培养至铺满培养瓶底，清洗细胞，加入胰酶进行消化；待细胞皱缩变圆时，加入完全培养基终止细胞消化，离心去上清；再重新加入传代完全培养基，按1:2的体积比分装入两个细胞培养瓶进行培养，培养至铺满培养瓶底后重复前面的步骤。

4.权利要求1所述大黄鱼肠道细胞系lyci在质粒转染中的应用。

技术总结本发明公开了一种大黄鱼肠道细胞系LYCI及其构建方法和应用。属于海水鱼类细胞培养技术领域。所述大黄鱼肠道细胞系LYCI于2023年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2023241。所述大黄鱼肠道细胞系LYCI具有连续培养超过30代并保持稳定的优点。技术研发人员：王志勇,吴宝兰,韩芳受保护的技术使用者：集美大学技术研发日：技术公布日：2024/9/26