一种斑蝥酸钠的质量控制方法与流程

本发明属于药品，特别是涉及一种斑蝥酸钠的质量控制方法。

背景技术：

1、斑蝥酸钠由动物斑蝥虫(为芫青科昆虫南方大斑蝥mylabris phalerata pallas或黄黑小斑蝥mylabris cichorii linnaeus的干燥体)提取精制而成。如果在斑蝥酸钠最后的精制过程中有蛋白质残留，那么制成斑蝥酸钠注射液后，其中的残留蛋白就可能成为过敏源，从而导致一系列相关的不良反应，斑蝥酸钠在制备工艺过程中使用了丙酮、无水乙醇和石油醚(60～90℃)3种有机溶剂，因此，对斑蝥酸钠样品中丙酮、无水乙醇和石油醚(60～90℃)的残留量进行检测液是很必要的。斑蝥酸钠含量测定方法，以往采用气相色谱法，由于该方法是将斑蝥酸钠酸化转化成斑蝥素，测其斑蝥素的含量，所以方法的专属性较差。

2、本发明研究了斑蝥酸钠中蛋白质、丙酮。乙醇和石油醚的残留量检测，以及斑蝥酸钠含量检测标准，以便更科学地进行斑蝥酸钠的质量控制。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种斑蝥酸钠的质量控制方法，所述方法研究了斑蝥酸钠中蛋白质、丙酮、乙醇和石油醚的残留量检测，以及斑蝥酸钠含量检测标准，以上检测方法操作简便、准确度高，能有效的控制斑蝥酸钠的质量。

2、本发明的技术方案：

3、一种斑蝥酸钠的质量控制方法，所述质量控制方法包含有蛋白质检测、有机溶剂残留量检测和含量测定；

4、所述蛋白质检测是采用可见紫外-分光光度法对斑蝥酸钠中蛋白质进行残留量检测；

5、所述有机溶剂残留量检测是采用气相色谱法对斑蝥酸钠中的乙醇、丙酮和石油醚三种有机溶剂进行残留量测定；

6、所述含量测定是采用滴定法对斑蝥酸钠中的斑蝥酸钠进行含量检测。

7、前述蛋白质检测方法按照以下步骤进行：

8、(1)对照品溶液的配制：取5mg/ml的牛血清白蛋白标准品于容量瓶中，加水稀释定容，制成0.3-0.7mg/ml的对照品溶液；

9、(2)供试品溶液的配制：取0.3-0.7g斑蝥酸钠样品，置3-7ml容量瓶中，加入3.5-4.5ml水，超声使完全溶解，放至室温，加水至刻度，摇匀，即得；

10、(3)bca工作液的配制：取bca蛋白质测定试剂a与bca蛋白质测定试剂b按体积比50:1比例混匀即得；

11、(4)检测方法：分别取水、供试品溶液和对照品溶液各0.2ml，加bca工作液2ml，置37℃保温10min，照紫外-分光光度法，在562nm波长处分别测定吸收度，以水加bca工作液作空白，以吸光度计算斑蝥酸钠样品中bsa的含量。

12、具体的说，前述蛋白质检测方法按照以下步骤进行：

13、(1)对照品溶液的配制：取5mg/ml的牛血清白蛋白标准品于容量瓶中，加水稀释定容，制成0.5mg/ml的对照品溶液；

14、(2)供试品溶液的配制：取0.5g斑蝥酸钠样品，置5ml容量瓶中，加入4ml水，超声使完全溶解，放至室温，加水至刻度，摇匀，即得；

15、(3)bca工作液的配制：取bca蛋白质测定试剂a与bca蛋白质测定试剂b按体积比50:1(v/v)比例混匀即得；

16、(4)检测方法：分别取水、供试品溶液和对照品溶液各0.2ml，加bca工作液2ml，置37℃保温10min，照紫外-分光光度法，在562nm波长处分别测定吸收度，以水加bca工作液作空白，以吸光度计算斑蝥酸钠样品中bsa的含量。

17、前述乙醇和丙酮有机溶剂残留量检测方法按照以下步骤进行：

18、(1)供试品贮备液的配制：取斑蝥酸钠样品0.5-1.5g，精密称定，置10ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液；

19、(2)供试品溶液的配制：精密量取供试品贮备液0.5-1.5ml置20ml顶空瓶中，再精密加水0.5-1.5ml，密封，摇匀，作为供试品溶液；

20、(3)对照品溶液的配制：精密称取丙酮80-120mg和乙醇230-270mg，置100ml量瓶中，用水稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液a；再精密量取5-15ml对照品贮备液a置50ml顶空瓶中，用水稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液b；精密量取0.5-1.5ml对照品贮备液b置20ml顶空瓶中，精密加供试品贮备液0.5-1.5ml，密封，摇匀，作为对照品溶液；

21、(4)色谱条件：色谱柱为ae.ffap，色谱柱规格为30m×0.32mm×0.50μm；载气为氮气，流速为1.5ml/min，氢气流速40ml/min，空气流速400ml/min；分流比1:1；进样口温度200℃，fid检测器温度250℃；程序升温：初始温度60℃，保持8分钟，以20℃/min的速率升至150℃，保持5min；顶空条件：顶空瓶平衡温度70℃，平衡时间30min，定量环温度80℃，传输管温度90℃。

22、(5)检测方法：将纯化水作为空白溶液，分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液，进样1μl，测定，记录色谱图。

23、具体的说，前述乙醇和丙酮有机溶剂残留量检测方法按照以下步骤进行：

24、(1)供试品贮备液的配制：取斑蝥酸钠样品1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液；

25、(2)供试品溶液的配制：精密量取供试品贮备液1.0ml置20ml顶空瓶中，再精密加水1.0ml，密封，摇匀，作为供试品溶液；

26、(3)对照品溶液的配制：精密称取丙酮100mg和乙醇250mg，置100ml量瓶中，用水稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液a；再精密量取10ml对照品贮备液a置50ml顶空瓶中，用水稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液b；精密量取1.0ml对照品贮备液b置20ml顶空瓶中，精密加供试品贮备液1.0ml，密封，摇匀，作为对照品溶液；

27、(4)色谱条件：色谱柱为ae.ffap，色谱柱规格为30m×0.32mm×0.50μm；载气为氮气，流速为1.5ml/min，氢气流速40ml/min，空气流速400ml/min；分流比1:1；进样口温度200℃，fid检测器温度250℃；程序升温：初始温度60℃，保持8分钟，以20℃/min的速率升至150℃，保持5min；顶空条件：顶空瓶平衡温度70℃，平衡时间30min，定量环温度80℃，传输管温度90℃。

28、(5)检测方法：将纯化水作为空白溶液，分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液，进样1μl，测定，记录色谱图。

29、前述石油醚有机溶剂残留量检测方法按照以下步骤进行：

30、(1)供试品溶液的配制：取斑蝥酸钠样品0.05-0.15g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加n，n-二甲基乙酰胺1.5-2.5ml，立即密封，摇匀，超声处理5-15分钟，作为供试品溶液；

31、(2)对照品溶液的配制：精密称取石油醚(60～90℃)140-150mg，置50ml量瓶中，用n，n-二甲基乙酰胺稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液c，再精密量1.5-2.5ml对照品贮备液c置100ml量瓶中，用n，n-二甲基乙酰胺稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液d；精密量取0.5-1.5ml对照品贮备液d置100ml量瓶中，加n，n-二甲基乙酰胺稀释置刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量1.5-2.5ml对照品溶液置20ml顶空瓶中，立即密封；

32、(3)色谱条件：色谱柱为se-54，色谱柱规格为50m×0.32mm×0.32μm；载气为氮气，流速为2ml/min，氢气流速40ml/min，空气流速400ml/min；分流比5:1；进样口温度220℃，fid检测器温度260℃；程序升温：初始温度35℃，保持10分钟，以20℃/min的速率升至200℃，保持5min；顶空条件：顶空瓶平衡温度110℃，平衡时间20min，定量环温度120℃，传输管温度130℃；

33、(4)检测方法：将n，n-二甲基乙酰胺作为空白溶液，分别将空白溶液、供试品溶液和对照品溶液进样1μl，测定，记录色谱图。

34、具体的说，前述石油醚有机溶剂残留量检测方法按照以下步骤进行：

35、(1)供试品溶液的配制：取斑蝥酸钠样品0.1g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加n，n-二甲基乙酰胺2ml，立即密封，摇匀，超声处理10分钟，作为供试品溶液；

36、(2)对照品溶液的配制：精密称取石油醚(60～90℃)145mg，置50ml量瓶中，用n，n-二甲基乙酰胺稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液c，再精密量2ml对照品贮备液c置100ml量瓶中，用n，n-二甲基乙酰胺稀释置刻度，摇匀，作为对照品贮备液d；精密量取1ml对照品贮备液d置100ml量瓶中，加n，n-二甲基乙酰胺稀释置刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量2ml对照品溶液置20ml顶空瓶中，立即密封；

37、(3)色谱条件：色谱柱为se-54，色谱柱规格为50m×0.32mm×0.32μm；载气为氮气，流速为2ml/min，氢气流速40ml/min，空气流速400ml/min；分流比5:1；进样口温度220℃，fid检测器温度260℃；程序升温：初始温度35℃，保持10分钟，以20℃/min的速率升至200℃，保持5min；顶空条件：顶空瓶平衡温度110℃，平衡时间20min，定量环温度120℃，传输管温度130℃；

38、(4)检测方法：将n，n-二甲基乙酰胺作为空白溶液，分别将空白溶液、供试品溶液和对照品溶液进样1μl，测定，记录色谱图。

39、前述含量测定方法按照以下步骤进行：取本品100-120mg，精密称定，加冰乙酸8-12ml溶解后，加8-12ml酸酐与1滴结晶紫指示剂，用0.1mol/l高氯酸滴定滴定至溶液显绿色，并将滴定结果用空白校正，每1ml的0.1mol/l高氯酸滴定液相当于12.905mg的c10h12na2o5，计算斑蝥酸钠的含量。

40、具体的说，前述含量测定方法按照以下步骤进行：取本品110mg，精密称定，加冰乙酸10ml溶解后，加10ml酸酐与1滴结晶紫指示剂，用0.1mol/l高氯酸滴定滴定至溶液显绿色，并将滴定结果用空白校正，每1ml的0.1mol/l高氯酸滴定液相当于12.905mg的c10h12na2o5，计算斑蝥酸钠的含量。

41、本发明相比现有技术，有益效果如下：

42、(1)建立了斑蝥酸钠中蛋白质残留的检测标准，能有效控制斑蝥酸钠中蛋白质残留量，提高斑蝥酸钠及斑蝥酸钠注射液产品的安全性，以便更科学地进行斑蝥酸钠的质量控制。

43、(2)斑蝥酸钠在制备工艺过程中使用了丙酮、无水乙醇和石油醚(60～90℃)3种有机溶剂，为提高产品质量，制定的斑蝥酸钠有机溶剂残留量检测，该方法精密度高，稳定性好，能有效的对其残留的丙酮、无水乙醇和石油醚进行质量控制。

44、(3)由于本品存在在稀释剂中的稳定性差的问题，本品的非水容量法测定斑蝥酸钠的含量，不受斑蝥素杂质干扰，专属性好，且斑蝥酸钠非水滴定法的精密度好和重复性高，故将非水滴定法列入斑蝥酸钠质量标准相比以往的气相色谱法，具有明显的优势。