龙胆酸中杂质的测定方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体来说涉及龙胆酸中杂质的测定方法。

背景技术：

1、龙胆酸，化学名称2,5-二羟基苯甲酸，也称为5-羟基水杨酸，是水杨酸经肾代谢之后的次要产物，临床上常用作抗病毒剂、抗菌剂及止痛剂(钠盐)。目前的合成工艺主要有(1)氢醌的科贝尔-施密特反应来制备龙胆酸；(2)使本酚类与碱金属化合物进行脱水反应得到苯酚类的碱金属盐后，使该苯酚类的碱金属盐与二氧化碳反应，制备羟基苯甲酸类的方法中，碱金属化合物和相对于碱金属化合物过量的苯酚类在160℃或160℃以上的温度下进行脱水反应。(3)将水杨酸与冰醋酸加入到反应容器中搅拌均匀；升温后滴加溴素，反应得到溴代水杨酸，减压蒸馏回收冰醋酸；在氯化亚铜存在的条件下，加入液碱，升温，反应得到羟基水杨酸；(4)在铜催化剂存在的条件下，将5溴水杨酸加入无机碱溶液，搅拌，升温使5溴水杨酸与无机碱溶液反应，再降温，加入水，再通过一定的精制步骤。

2、龙胆酸已在国外作为药用辅料，收载于美国药典中，其公布了含量测定的方法，原理是利用酸碱滴定，用氢氧化钠滴定其中的羧基，从而测定其含量，该方法对于其他含有羧基的化合物同样适用。龙胆酸属氢醌类化合物，容易发生氧化反应，在制药工业上还用作抗氧化赋形剂，其中含有的杂质有对苯二酚和甲基氢醌。

3、现有技术通常是将龙胆酸或结构类似物作为目标分析物，但不能实现准确的杂质测定，例如有文献报道采用hplc法测定人体血浆中羟基水杨酸氧化应激的产物含量，其中包括2,3-二羟基苯甲酸、3,4-二羟基苯甲酸和2,5-二羟基苯甲酸，流动相采用甲醇和ph为2.5的缓冲盐(乙酸钠、柠檬酸钠等)为流动相体系。但流动相采用缓冲盐和甲醇，在低波长下的基线噪音较大，甲醇的洗脱能力相对于乙腈来说比较弱，可能会影响龙胆酸中极性较小的杂质的洗脱。还有文献报道采用hplc法测定红花龙胆的药效物质基测定动物血清中的化学物质，色谱条件为c18柱，采用乙腈为流动相b，0.05％磷酸水为流动相a，进行梯度洗脱，检测波长为245nm。此色谱条件酸性相对较弱，流动相b和a的ph差异较大，在梯度混合的过程中，会引起基线的波动，影响在梯度峰位置出峰的杂质的检出能力。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种简便准确的方法检测龙胆酸工艺及降解杂质的方法，保证制剂用药的安全性和稳定性。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、一种龙胆酸中杂质的测定方法，包括：

4、取待测龙胆酸，稀释配制为供试品；

5、以十八烷基键合硅胶为固定相，以0.08％-0.12％酸性水溶液为流动相a，以0.08％-0.12％酸性乙腈为流动相b，进行梯度洗脱，通过自身对照法计算物质的量，实现待测龙胆酸中杂质的测定。

6、作为一种优选的实施方式，所述酸性水溶液为含磷酸、甲酸或乙酸的水溶液。

7、作为一种优选的实施方式，所述酸性水溶液为0.1％磷酸。

8、作为一种优选的实施方式，所述酸性乙腈为含磷酸、甲酸或乙酸的乙腈溶液。

9、作为一种优选的实施方式，所述酸性乙腈为0.1％磷酸乙腈。

10、作为一种优选的实施方式，所述梯度洗脱的程序为，以时间min/b％计，0/8、5/8、15/25、30/35、45/35。

11、作为一种优选的实施方式，梯度洗脱的流速为0.9～1.1ml/min。

12、作为一种优选的实施方式，柱温为35～45℃。

13、作为一种优选的实施方式，利用紫外可见光检测器进行检测。进一步的，检测波长为230nm

14、本发明的方法可分析龙胆酸中相关杂质，本发明采用乙腈的酸溶液和水的酸溶液作为流动相体系，流动相配制过程简单，采用梯度洗脱调节流动相b和流动相a的比例，在检测波长为230nm下，基线平稳，没有明显的梯度峰，同时噪音较低，龙胆酸及其杂质响应强，灵敏度高，供试品浓度为1mg/ml时，0.0003％杂质即可被检出，0.001％杂质即可被定量，该方法的灵敏度良好。强制降解试验表明本品对温度和光照比较敏感，降解的杂质峰之间，杂质与主峰龙胆酸之间分离度良好，该方法能准确测定龙胆酸合成中的工艺杂质和存放过程中可能的降解杂质，对于龙胆酸作为药用辅料在有效期内的储存稳定性有很好的监控作用。本发明的分析方法灵敏度高，专属性良好，重复性、精密度好，快捷、高效、简便，适用于不同龙胆酸中杂质的测定，可以有效地监督生产，保证产品质量的稳定。

技术特征：

1.一种龙胆酸中杂质的测定方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酸性水溶液为含磷酸、甲酸或乙酸的水溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述酸性水溶液为0.1%磷酸。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酸性乙腈为含磷酸、甲酸或乙酸的乙腈溶液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所e述酸性乙腈为0.1%磷酸乙腈。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为，以时间min/b%计，0/8、5/8、15/25、30/35、45/35。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，梯度洗脱的流速为0.9~1.1ml/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱温为35~45℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用紫外可见光检测器进行检测。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，检测波长为230nm。

技术总结本发明公开龙胆酸中杂质的测定方法，包括：取待测龙胆酸，稀释配制为供试品；以十八烷基键合硅胶为固定相，以0.08%‑0.12%酸性水溶液为流动相A，以0.08%‑0.12%酸性乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，通过自身对照法计算物质的量，实现待测龙胆酸中杂质的测定。本发明的分析方法灵敏度高，专属性良好，重复性、精密度好，快捷、高效、简便，适用于不同龙胆酸中杂质的测定，可以有效地监督生产，保证产品质量的稳定。技术研发人员：沙美,刘梅山,李美玲,郭振,刘海强受保护的技术使用者：南京威尔药业科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/29