一种提高冷冻保存牛精液品质与受精能力的稀释液

本发明属于牛人工授精，具体涉及一种提高冷冻保存牛精液品质与受精能力的稀释液。

背景技术：

1、牛人工授精技术的普及能够充分发挥公畜的遗传潜力，而精液冷冻是人工授精的重要环节，为对牛进行人工授精这一技术的实施提供了精子库。随着牛精液冷冻保存技术的广泛应用，使用冷冻精液可以不受限于时间和空间，具有提高优良种公牛的利用率、减少经济成本、提高了畜牧业效益、促进品种改良等优点。精液冷冻技术对我国的畜牧业可持续发展和畜产品的满足供应具有重要现实意义。

2、在冷冻过程中，精子容易受到冰晶形成和氧化应激等因素导致胞内代谢失调、dna破损、蛋白结构改变、线粒体功能受损、胞质不稳定和过量活性氧（ros）自由基生成。因此，冻-解牛精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性和dna完整率显著下降，导致无法维持受精能力，进而降低妊娠率和分娩率。目前，国内外调查表明，用冻精人工授精后受精率逐年下降的趋势，起因为低温刺激下质膜的通透性和流动性发生改变，引起大量的ca2+进入精子内部，导致出现提前获能，进而影响冻-解后精液受精能力。因此，为提高冻融精子质量和改善受精能力，改善基础冷冻保存稀释液，通过一定手段抑制冷冻保存过程中过氧化损伤和低温提前获能现象是十分有必要的。

技术实现思路

1、针对上述现有技术存在的问题，本发明旨在于一种提高冷冻保存牛精液品质与受精能力的稀释液。

2、本发明的第一个目的是提供一种提高冷冻保存牛精液品质与受精能力的稀释液，其特征在于，组成为如下任一种：

3、a. 2 g/l果糖、22 g/l tris-碱、12 g/l柠檬酸、体积分数20%的卵黄、体积分数6%的甘油、体积分数1%的氨基-钠十二烷基硫酸酯、0.004 g/l的硫酸阿米卡星、100 µm绿原酸、6 µm钙螯合剂，余量为水；

4、b. 2 g/l果糖、22 g/l tris-碱、12 g/l柠檬酸、体积分数20%的卵黄、体积分数6%的甘油、体积分数1%的氨基-钠十二烷基硫酸酯、0.004 g/l的硫酸阿米卡星、100 µm咖啡酸、6 µm钙螯合剂，余量为水。

5、优选，所述的钙螯合剂为egta或bapta。

6、本发明的第二个目的是提供一种牛精液冷冻保存方法，包括如下步骤：

7、s1. 将所述的稀释液和牛精液平衡2-3 h，缓慢降温至5℃；

8、s2. 用稀释液与牛精液按照体积比1:1混合，对牛精液进行稀释，并平衡10 min；

9、s3. 平衡结束后吸入冷冻细管中，封口；

10、s4. 将装有牛精液的冷冻细管置于-30℃以下的条件下平衡15 min后，放入液氮中保存。

11、优选，所述的牛为雷琼牛。

12、优选，所述的冷冻细管为规格为0.25 ml的冷冻细管。

13、本发明的有益效果：

14、本发明在牛精液冷冻保存稀释液中添加抗氧化剂（绿原酸或咖啡酸）与钙螯合剂（egta或bapta），有效改善冻-解精液活力、质膜完整性、顶体完整性和受精能力，显著改善抗氧化性能、降低ros水平、抑制低温提前获能，明显改善牛精子冷冻保存效果，适用于牛精液在液氮中长期冷冻保存和人工授精上应用，稀释液制备方法简易、冷冻保存操作方法简单、易于推广，显著提高冻-解后牛精液品质和受精能力。

技术特征：

1.一种提高冷冻保存牛精液品质与受精能力的稀释液，其特征在于，组成为如下任一种：

2.根据权利要求1所述的稀释液，其特征在于，所述的钙螯合剂为egta或bapta。

3.一种牛精液冷冻保存方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的牛为雷琼牛。

5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的冷冻细管为规格为0.25 ml的冷冻细管。

技术总结本发明提供了一种提高冷冻保存牛精液品质与受精能力的稀释液，包括绿原酸与钙螯合剂。与现有技术相比，本发明在精液冷冻保存稀释液中添加抗氧化剂绿原酸或咖啡酸与钙螯合剂，有效改善冻‑解精液活力、质膜完整性、顶体完整性和受精能力，显著改善抗氧化性能、降低ROS水平、抑制低温提前获能，明显改善牛精子冷冻保存效果，适用于牛精液在液氮中长期冷冻保存和人工授精上应用，稀释液制备方法简易、冷冻保存操作方法简单、易于推广，显著提高冻‑解后牛精液品质和受精能力。技术研发人员：李迎春,照那木拉,赵志辉,甘尚权,刘德武,巨向红,陈志宝,李耀坤,周建业,郑守洁,苗丰帅,林浩受保护的技术使用者：广东海洋大学技术研发日：技术公布日：2024/10/17