一种猫粮的体外消化评估方法与流程

本发明属于宠物粮检测，更具体的，涉及的是一种猫粮的体外消化评估方法。

背景技术：

1、对猫粮进行评估时，一般直接通过饲养实验来评价猫粮的适口性和对营养物质的消化吸收能力，这种方法需较多的试验动物，还需要考虑不同个体在不同时间的生理状况，试验设计较为繁杂，耗时较长，导致产品研发成本升高。近年来随着仿生消化仪的推广应用，许多动物的体外消化试验都基于其本身的生理状况被建立起来，如鸡、鸭、猪、狗等动物的仿生消化体系，但猫的仿生消化体系尚未有相关资料。此外，仿生消化仪价格较高，且在对产品进行评估时，由于仪器本身的特性，只能同时评估两种产品，在样品种类较多的情况下，评估时间较长，不同评估批次之间的误差也无法保证。

技术实现思路

1、基于上述表述，本发明的目的在于提供一种体外快速评估猫粮消化效果的方法，为猫粮的产品研发和不同产品间的快速比较提供评估方法。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、一种猫粮的体外消化评估方法，包括以下步骤：

4、样品制备与检测；

5、胃阶段模拟消化：称取干样1.0g，每种干样4～7个重复，每1.0g干样中加入v1ml溶液i，密封后于38～39.5℃恒温水浴4～6h，摇床转速为120～180r/min；

6、肠阶段前ph调试：胃阶段模拟消化反应结束后，每种干样取出1个样品用于ph调试，每1.0g干样加入v2 ml溶液ⅱ与v3 ml溶液ⅲ，用碱液调节容器内体系的ph于6.0～7.0之间，记录消耗的碱液体积为v0μl；

7、肠阶段模拟消化：肠阶段前ph调试结束后，取出其它样品，依次加入v2 ml溶液ⅱ和v0μl的碱液，混匀后加入v3 ml溶液ⅲ，密封后于38～39.5℃恒温水浴6～8h，摇床转速为120～180r/min，得模拟消化液。

8、在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

9、进一步地，还包括下样步骤：取相应数量的快速定性滤纸，编号烘干冷却后称重；将每个样品的所有模拟消化液倒入滤纸过滤，准确吸取蒸馏水冲洗盛样品的容器3-5次，冲洗液均倒入滤纸，保证容器中所有颗粒冲洗干净，并保持所有样品冲洗所用蒸馏水体积一致；待过滤完成后，将滤纸连带食糜置于烘箱中烘干，于干燥器中冷却并称重，根据称样重量和反应后烘干的食糜重量计算干物质消化率。

10、进一步地，溶液ⅰ：根据干样总数称取胃蛋白酶，每1.0g干样中加入wi g胃蛋白酶，若n个1.0g的干样，则称取wi*(n+2)g；以ph＝2.0的盐酸溶解，每1.0g干样中加入vi-1ml，若n个1.0g的样品，则量取vi-1*(n+2)ml，搅拌均匀，随后加入ph＝2.5的盐酸，每1.0g干样中加入vi-2ml，若n个1.0g的样品，则量取vi-2*(n+2)ml，混匀备用。

11、进一步地，溶液ⅱ：称取kh2po4和naoh溶于1l蒸馏水，磁力搅拌器充分溶解，配制成ph＝8.0-9.0的缓冲液备用。溶液ii同时采用kh2po4和naoh，是为了模拟猫肠道内环境，作为缓冲液能维持ph稳定，同时还能提供猫身体需要的钠离子和钾离子。

12、进一步地，溶液ⅲ：根据干样总数称取胰脂肪酶于烧杯，每1.0g干样加入wiii g胰脂肪酶，若n个1.0g的样品，则称取wiii*(n+2)g；以2～3wt％的nahco3溶解，每1.0g的干样加入viii ml，若n个1.0g的样品，则称取viii*(n+2)ml，搅拌均匀，使用前静置5～20min。溶液ⅲ采用nahco3溶液溶解，ph在8-9之间，主要是为了保护胰脂肪酶活性。

13、进一步地，所述wi＝0.008～0.012g，所述vi-1为2ml，vi-2为8ml，所述v1＝vi-1+vi-2；所述v2＝8.5ml，v3＝8.5ml。

14、进一步地，所述wiii＝0.025～0.035g，当所述nahco3溶液的浓度为2wt％时，所述viii＝1.5ml。

15、进一步地，所述下样步骤中，将滤纸连带食糜置于烘箱中105℃烘干4h。

16、进一步地，所述胃阶段模拟消化步骤中，密封后于39℃恒温水浴4h，摇床转速为180r/min。

17、进一步地，所述肠阶段模拟消化步骤中，密封后于39℃恒温水浴6h，摇床转速为180r/min。

18、进一步地，所述样品制备与检测为：将用于评估的猫粮粉碎至40目，置于105℃烘箱烘干4h，随后保存于自封袋用于后续检测与试验。参照国标测定猫粮的干物质含量、粗蛋白含量、粗脂肪含量、粗纤维含量。

19、进一步地，所述肠阶段前ph调试步骤中，碱液为6mol/l的naoh溶液或质量浓度8wt％的nahco3溶液。

20、进一步地，根据国标测定食糜中粗蛋白、粗脂肪和粗纤维含量，计算得到各营养物质消化率，公式如下：

21、

22、

23、与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下有益技术效果：

24、溶液ⅰ中先用ph＝2.0的盐酸溶解酶是为了活化胃蛋白酶，同时使用两种ph的盐酸溶液的目的是调节ph到2.5左右，模拟猫胃ph；v1＝vi-1+vi-2，保证胃阶段模拟消化步骤的ph在2.5左右，跟猫胃ph接近。

25、本方法对体系中各阶段的方法和溶剂选用进行了确定和优化，如反应体系胃阶段的体积为10ml，根据猫生理环境进行的溶液ⅰ的配制、溶液ⅱ和ⅲ的配比，酶和溶液的配比，各阶段反应时间等。

26、根据猫胃肠实际ph给出了相应的胃阶段的试剂配制方法和肠阶段溶解胰脂肪酶及肠液对应的ph范围，相比相关技术中仅限定酸性环境或中性环境，本发明的方法更接近猫肠胃的环境。

27、本方法针对猫胃肠体系明确了胃肠阶段酶添加量和胃肠阶段反应时间，保证在尽可能模拟实际消化的同时，缩短评估的时间。

28、本发明中所提的“肠阶段前ph调试”针对相关技术的方法进行了优化，特别指出在肠阶段前预先调节全肠液的ph，并严格按照顺序加入各试剂，既能保证肠阶段ph适宜，也能保护胰脂肪酶的活性。

29、本方法为一种体外快速评估猫粮消化效果的方法，可用于模拟猫胃肠道消化过程，在实验室内快速比较不同品种猫粮的消化效果，提供了一种快速方便可用于替代动物试验的评估方法，相比于仿生消化仪评估试验，也提高了检测容量和检测速度。此外，本方法不仅适用于比较单纯猫粮的消化效果，也可根据需求在不同的阶段加入促消化物质，从而探究其对消化的促进作用。

技术特征：

1.一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，还包括下样步骤：取相应数量的快速定性滤纸，烘干冷却后称重；将每个样品的所有模拟消化液倒入滤纸过滤，准确吸取蒸馏水冲洗盛样品的容器3-5次，冲洗液均倒入滤纸，保证容器中所有颗粒冲洗干净，并保持所有样品冲洗所用蒸馏水体积一致；待过滤完成后，将滤纸连带食糜置于烘箱中烘干，于干燥器中冷却并称重，根据称样重量和反应后烘干的食糜重量计算干物质消化率。

3.根据权利要求1所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，溶液ⅱ：称取kh2po4和naoh溶于1l蒸馏水，磁力搅拌器充分溶解，配制成ph＝8.0-9.0的缓冲液备用。

5.根据权利要求1所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，溶液ⅲ：根据干样总数称取胰脂肪酶，每1.0g干样加入wiii g胰脂肪酶，若n个1.0g的样品，则称取wiii*(n+2)g；以2～3wt％的nahco3溶解，每1.0g的干样加入viii ml，若n个1.0g的样品，则称取viii*(n+2)ml，搅拌均匀，使用前静置5～20min。

6.根据权利要求3所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，所述wi＝0.008～0.012g，所述vi-1为2ml，vi-2为8ml，所述v1＝vi-1+vi-2；所述v2＝8.5ml，v3＝1.5ml。

7.根据权利要求5所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，所述wiii＝0.025～0.035g，当所述nahco3溶液的浓度为2wt％时，所述viii＝1.5ml。

8.根据权利要求2所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，所述下样步骤中，将滤纸连带食糜置于烘箱中105℃烘干4h。

9.根据权利要求1所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，所述胃阶段模拟消化步骤中，于39℃恒温水浴4h，摇床转速为180r/min。

10.根据权利要求1所述的一种猫粮的体外消化评估方法，其特征在于，所述肠阶段模拟消化步骤中，于39℃恒温水浴6h，摇床转速为180r/min。

技术总结本发明提供一种猫粮的体外消化评估方法，包括以下步骤：样品制备与检测；胃阶段模拟消化：称取干样，每种干样4～7个重复，每1.0g干样中加入V1mL溶液I，密封后于恒温水浴；肠阶段前pH调试：胃阶段模拟消化反应结束后，每种干样取出1个样品用于pH调试，加入溶液Ⅱ与溶液Ⅲ，用碱液调节容器内体系的pH于6.0～7.0之间，记录消耗的碱液体积为V0μL；肠阶段模拟消化：肠阶段前pH调试结束后，取出其它样品，依次加入V2mL溶液Ⅱ和V0μL的碱液，混匀后加入V3mL溶液Ⅲ，密封后于恒温水浴。本方法可用于模拟猫胃肠道消化过程，在实验室内快速比较不同品种猫粮的消化效果。技术研发人员：张小龙,张云非,付大波,王铕,王子蔚,刘国红受保护的技术使用者：武汉新华扬生物股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/17