一种阿伐那非中间体异构体的高效液相色谱检测方法与流程

本发明属于药物合成检测领域，涉及一种阿伐那非中间体异构体的高效液相色谱检测方法。

背景技术：

1、阿伐那非(avanafil)是一种口服速效的高选择性磷酸二酯酶5(pde5)抑制剂，能抑制环磷酸鸟苷在体内的代谢，从而使平滑肌的舒张作用得以加强，阴茎的血流量增加，进而帮助勃起，用于治疗男性勃起功能障碍(ed)。阿伐那非具有与其他pde5抑制剂相同的作用机制，但口服吸收更快，大多数ed患者在使用本品后0.5h内即能成功进行性生活，等效或优于目前市场上的其他pde5抑制剂，如西地那非(商品名：伟哥)、伐地那非(商品名：艾力达)、他达拉非(商品名：西力士)等。美国fda于2012年4月批准阿伐那非上市，并于2013年由vivus授权auxilium在美国进行销售，商品名为stendra。

2、在阿伐那非的制备过程中，4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2s)-2-羟甲基-1-吡咯烷基]-5-嘧啶甲酸乙酯是一个重要的中间体，此中间体异构体在阿伐那非工艺制备过程中会参与后续反应生成阿伐那非的主要特定副产物，因此在生产工艺过程中需要对其异构体4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2r)-2-羟甲基-1-吡咯烷基]-5-嘧啶甲酸乙酯进行严格的含量控制，有利于在阿伐那非制备过程中控制中间体的质量，从而达到有效控制阿伐那非成品质量的目的。

3、

4、4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2s)-2-羟甲基-1-吡咯烷基]-5-嘧啶甲酸乙酯

5、

6、4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2r)-2-羟甲基-1-吡咯烷基]-5-嘧啶甲酸乙酯

7、查询2020年中国药典关于光学异构体的检测方法，全部采用等度法检测，说明目前在正向色谱体系中等度法占主导地位。查询相关专利，专利cn113917027b有针对阿伐那非中间体异构体的检测方法，该方法为了提高分离度采用了梯度法检测。本发明专利的优势在于采用了更加快速和可靠的等度法检测，在正向色谱体系中等度法相对于梯度法更具优势，主要包括对高效液相色谱仪的要求更低，色谱体系更加稳定，流动相平衡时间更短，检测灵敏度更高，色谱柱的使用寿命更长，在阿伐那非中间体检测时更具有可靠性和实用性，可以更加快速和准确的测定异构体的含量，创造更多的经济价值。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种阿伐那非中间体异构体的检测方法，具有检测快速、准确、分离效果好、稳定有效的特点。

2、本发明所述的阿伐那非中间体异构体的检测方法，采用正相高效液相色谱法对阿伐那非中间体异构体4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2r)-2-羟甲基-1-吡咯烷基]-5-嘧啶甲酸乙酯进行检测，所述检测方法，优选的包括以下步骤：

3、(1)对照品溶液的配制：取阿伐那非中间体异构体对照品适量，加流动相制成溶液作为对照品溶液；

4、(2)加标供试品溶液的配制：取生产所得阿伐那非中间体适量，取阿伐那非中间体异构体对照品适量，加流动相，制成阿伐那非中间体和阿伐那非中间体异构体对照品混合的加标供试品溶液；

5、(3)检测：取对照品溶液，加标供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图，根据色谱图计算阿伐那非中间体中阿伐那非中间体异构体的含量；

6、其中，色谱条件如下：采用纤维素-三(3，5-二氯苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为：正己烷-无水乙醇-二乙胺混合溶液，其体积比为75～95：5～25：0.1，流动相流速为0.8～1.2ml/min，色谱柱温度为30℃～40℃，检测波长为236nm；

7、其中，阿伐那非中间体如式i所示，阿伐那非中间体异构体如式ii所示：

8、

9、最优选的，所述流动相流速为1.0ml/min，色谱柱温度为35℃，检测波长为236nm。

10、最优选的，所述检测步骤中，包括：精密量取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，调节检测灵敏度，使阿伐那非中间体异构体峰的峰高为满量程的10％，再精密量取加标供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

11、最优选的，本发明的检测方法，步骤如下：

12、(1)对照品溶液的配制：取阿伐那非中间体异构体对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml中含0.75μg的溶液作为对照品溶液；

13、(2)加标供试品溶液的配制：取阿伐那非中间体和阿伐那非中间体异构体对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含阿伐那非中间体0.5mg与阿伐那非中间体异构体0.75μg的混合溶液作为加标供试品溶液；

14、(3)检测：精密量取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，调节检测灵敏度，使阿伐那非中间体异构体峰的峰高为满量程的10％，再精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；

15、其中，色谱条件如下：采用纤维素-三(3，5-二氯苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为：正己烷-无水乙醇-二乙胺混合溶液，其体积比为85：15：0.1，流动相流速为1.0ml/min，色谱柱温度为35℃，检测波长为236nm。

16、本发明的有益效果是：本发明采用的分析检测方法快速简单、定量准确、重复性好，能够准确的分离检测阿伐那非中间体异构体，对阿伐那非的研究合成、生产质量控制起到良好的推动的作用。

技术特征：

1.一种阿伐那非中间体异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min，色谱柱温度为35℃，检测波长为236nm。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测步骤中，包括：精密量取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，调节检测灵敏度，使阿伐那非中间体异构体峰的峰高为满量程的10％，再精密量取加标供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中，

技术总结本发明公开了一种阿伐那非中间体异构体的高效液相色谱检测方法，采用纤维素‑三(3，5‑二氯苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂的色谱柱，以正己烷‑无水乙醇‑二乙胺为流动相，对阿伐那非中间体异构体进行分离检测，流动相正己烷‑无水乙醇‑二乙胺的体积比为75～95：5～25：0.1，色谱条件如下：流动相流速为0.8～1.2ml/min，色谱柱温度为30℃～40℃，检测波长为236nm；本发明的检测方法快速简单、定量准确、重复性好，在阿伐那非制备过程中能有效监控中间体的质量，进而有效控制中间体异构体在阿伐那非工艺制备过程中参与后续反应生成阿伐那非的主要特定副产物的量，从而达到有效控制阿伐那非成品质量的目的，便于规模化生产和质控过程中产品质量的控制。技术研发人员：张卫锋,白水昭受保护的技术使用者：北京沃邦医药科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/17