一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂及其制备工艺的制作方法

本发明涉及美容注射剂制备，具体涉及一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂及其制备工艺。

背景技术：

1、透明质酸钠作为人体内自然存在的一种高分子多糖类物质，在皮肤、关节液、眼玻璃体等多种组织中广泛分布。透明质酸钠因其良好的生物相容性、保湿性能和生物可降解性，在医疗美容、眼科手术、骨关节炎治疗等领域有着广泛的应用。近年来，透明质酸钠注射剂被越来越多地应用于皮肤填充、面部整形和皮肤保湿治疗中，以改善皮肤外观和质地，减少皱纹。然而，传统的透明质酸钠注射剂在使用过程中存在一些问题，例如注射时的疼痛感、注射后的炎症反应。这些问题限制了其在临床应用中的舒适度和患者接受度。

2、因此，我们提出了一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂及其制备工艺，使其可以降低注射时的疼痛感、减少注射后的炎症反应，从而提高临床应用中的舒适度和患者接受度。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂及其制备工艺。

2、一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂的制备工艺，包括如下步骤：

3、s1：改性透明质酸钠的制备

4、采用n-羟基丁二酰亚胺和1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺活化透明质酸钠，之后加入半胱胺盐酸盐反应后进行透析，得到改性透明质酸钠；

5、s2：利多卡因缓释微球的制备

6、以聚左旋乳酸负载利多卡因，并在壳聚糖与泊洛沙姆407的配合下制备得到利多卡因缓释微球；

7、s3：双网络结构凝胶的制备

8、将丝素纤维置于溴化锂溶液中透析制备再生丝素溶液并于改性透明质酸钠溶液混合，加入辣根过氧化物酶和双氧水，孵育后得到双网络结构凝胶；

9、s4：复合微凝胶注射剂的制备

10、将双网络结构凝胶浸泡磷酸盐缓冲溶液中，得到块状水凝胶，将块状水凝胶、丙二醇、三肽-1、植物鞘氨醇和卵磷脂混合均质后，通过液氮急冻-粉碎法制备复合微凝胶，将复合微凝胶分散于生理缓冲液中加入利多卡因缓释微球，得到复合微凝胶注射剂。

11、进一步地，步骤s1改性透明质酸钠的制备，具体包括如下步骤：

12、s1.1：将4-5重量份透明质酸钠粉末溶于800-1000重量份去离子水中，然后依次加入2-3重量份n-羟基丁二酰亚胺和5-7重量份1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺，混合均匀后用1.0-1.2mol/l的氯化氢溶液调节ph至4-5，室温活化2-3h，得到活化溶液；

13、s1.2：向活化溶液中加入3-4重量份半胱胺盐酸盐，然后用1.0-1.2mol/l氢氧化钠溶液调节ph至4-5，23-25℃下避光反应20-24h，得到反应物；

14、s1.3：将反应物转移至透析袋中，用ph值为3.5-4的去离子水在23-25℃下避光透析3-4d，然后将透析后的溶液冷冻干燥得到改性透明质酸钠固体，置于4-5℃冰箱中冷藏，备用。

15、进一步地，步骤s2利多卡因缓释微球的制备，具体包括如下步骤：

16、s2.1：将壳聚糖与泊洛沙姆407混合后加入1-2wt％的醋酸，混合均匀，溶解后得到原位凝胶溶液，将1-2重量份盐酸利多卡因加入到10-15重量份原位凝胶溶液中，得到混合溶液；

17、s2.2：将0.25-0.5重量份聚左旋乳酸溶解于2-3重量份二氯甲烷中，溶解完全后得到油相，将0.2-0.3重量份混合溶液加入到油相中，在冰浴条件下，470-500w超声辅助混合1-2min，得到初乳液；

18、s2.3：将初乳液加入到5-8重量份1-2％(w/v)聚乙烯醇溶液中，使用高速分散机在3400-3500rpm条件下搅拌1-2min，得到复乳液，将复乳液加入到60-80重量份0.2-0.5％(w/v)聚乙烯醇溶液中，在37-38℃下磁力搅拌4-5h，得到固化微球溶液；

19、s2.4：将固化微球溶液在3500-4000rpm下离心10-12min，然后用蒸馏水洗涤沉淀2-3次，得到利多卡因缓释微球。

20、进一步地，步骤s3双网络结构凝胶的制备，具体包括如下步骤：

21、s3.1：将10-20重量份丝素纤维置于100-200重量份浓度为9-10mol/l的溴化锂溶液中，在60-62℃下搅拌溶解60-70min，冷却后装入透析袋中，用去离子水透析2-3d，然后用脱脂棉过滤，再以10000-11000rpm离心5-10min，得到再生丝素溶液；

22、s3.2：将改性透明质酸钠固体溶解于去离子水中，形成质量分数为1-2％的改性透明质酸钠溶液，然后用氢氧化钠溶液调节ph至7.4-7.6，然后加入等质量的再生丝素溶液在冰浴下进行混合，得到混合溶液；

23、s3.3：向混合溶液中加入辣根过氧化物酶，再加入双氧水，搅拌均匀后，置于生化培养箱中在37-38℃下孵育3-5h，得到双网络结构凝胶。

24、进一步地，步骤s4复合微凝胶注射剂的制备，具体包括如下步骤：

25、s4.1：将双网络结构凝胶浸泡在0.01-0.02mol/l的磷酸盐缓冲溶液中3-4d，得到块状水凝胶；

26、s4.2：将10-20重量份块状水凝胶、0.2-0.3重量份丙二醇和1-2重量份三肽-1加入到50-80重量份纯水中，45-48℃水浴加热溶解后，得到混合液；

27、s4.3：将1-2重量份植物鞘氨醇加入到2-3重量份卵磷脂中45-48℃水浴加热溶解后加入混合液，超声分散10-20min，采用微射流高压均质机均质后得到混合乳化凝胶液；

28、s4.4：将混合乳化凝胶液放入液氮中急冻5-8min后，置于研钵中，用研杵敲碎反复研磨，用400-500μm和300-400μm的不锈钢筛网依次筛取，得到300-500μm的复合微凝胶；

29、s4.5：将复合微凝胶均匀分散于30-50重量份生理缓冲液中，然后加入2-3重量份利多卡因缓释微球，超声辅助震荡10-20min，灭菌后真空包装，得到复合微凝胶注射剂。

30、进一步地，步骤s2.1的混合溶液中壳聚糖的浓度为3.5-4％。

31、进一步地，步骤s2.1的混合溶液中泊洛沙姆407的浓度为2.5-3％。

32、进一步地，步骤s3.3的混合溶液中辣根过氧化物酶的浓度为10-12u/ml。

33、进一步地，步骤s3.3的中混合溶液中双氧水的浓度为3-4mmol/l。

34、一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂，其由上述任一项所述的一种含利多卡因的透明质酸钠复合注射剂的制备工艺制备所得。

35、本发明与现有技术相比，至少具有如下有益效果：

36、1、本发明优化了复合注射剂的配方，加入了利多卡因，可以降低注射时的疼痛感、减少注射后的炎症反应，从而提高临床应用中的舒适度和患者接受度，同时加入三肽-1与植物鞘氨醇活性成分与透明质酸钠、再生丝素进行配伍，协同增效不仅能够显著提升皮肤填充、面部整形和皮肤保湿治疗的效果，还能够促进皮肤的长期健康和年轻态，实现更加全面和持久的美容效果。

37、2、本发明通过对透明质酸钠进行巯基化修饰得到巯基化改性透明质酸钠，再利用辣根过氧化物酶对改性透明质酸钠侧链上巯基及再生丝素侧链上酚羟基的双重介导作用，使改性透明质酸钠大分子之间产生二硫键连接，再生丝素大分子侧链酪氨酸残基之间产生二酪氨酸键连接，从而制备出具有双网络结构的凝胶，凝胶内的双网络结构产生了对改性透明质酸钠和再生丝素纤维两种组分的互相保护作用，能够使其始终基本保持原有的颗粒形貌，双网络凝胶抵御酶降解的能力显著增强，降解速率显著减弱，因此可以提高复合注射剂的使用效果，达到持久的美容效果。

38、3、本发明在制备利多卡因缓释微球中加入了壳聚糖与泊洛沙姆407，壳聚糖和泊洛沙姆407的加入大大提高了微球的药品包封率和载药量，有效提高了麻醉镇痛效果，并且采用聚左旋乳酸作为包封材料，实现利多卡因缓释的同时，聚左旋乳酸能够增加ⅲ型胶原蛋白的表达，促进皮肤胶原蛋白再生，也能够增加il-10和timp1的表达，降低炎症反应的同时调节基质金属蛋白酶mmp-2和mmp-3的表达，进而使老化皮肤的细胞外基质中胶原蛋白和弹性蛋白纤维的破坏减少，聚左旋乳酸对纤维组织再生有明显的促进作用，继而可以提高复合注射剂的美容效果。

39、4、本发明通过“液氮急冻-粉碎法”制备出粒径主要分布在300-500μm范围内的复合微凝胶，该方法对微凝胶内部的孔结构无明显破坏，可以维持双网络结构，复合微凝胶中的再生丝素组分和内部的高孔隙率更有利于细胞的黏附、铺展以及引导细胞在凝胶内部的均匀分布，具有双网络结构的复合微凝胶能为细胞提供物理保护，显著维持细胞的增殖活力，加速体内软组织的再生修复，提高其填充美容效果。