一种毛螺序草活性化合物及其制备方法和应用

本发明属于植物提取物，具体涉及一种毛螺序草活性化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、毛螺序草(spiradiclis villosa)植物属于螺序草属(spiradiclis)茜草科(rubiaceae)，是多年生草本，我国特有植物，主要分布于广西，一般生长在林下岩石上。

2、截至目前，尚未发现对毛螺序草的次级代谢产物及生物活性的研究报道。美白要解决的主要问题是黑色素沉积，酪氨酸酶是黑色素形成过程中主要的限速酶。在这个过程中，氧自由基起到了促进黑色素形成的作用。因此，抑制酪氨酸酶和清除自由基是皮肤美白的两个关键途径。目前，大部分的美白物质，如苯二酚和维生素c，是通过抑制酪氨酸酶或抗氧化活性来达到美白效果的。尽管苯二酚的美白效果明显，但由于致癌风险被禁止使用。而维生素c在制备过程中容易受到光、热、潮湿和ph值等因素的影响而变色。降血糖主要抑制α-葡萄糖苷酶活性，α-葡萄糖苷酶是生物体内一种负责分解复杂碳水化合物的酶，它特异性水解α-葡萄糖苷键以释放葡萄糖，并在碳水化合物代谢和糖蛋白加工中起关键作用。延迟葡萄糖的产生和吸收，降低餐后血糖并减少高血糖氧化应激对胰腺等脏器的刺激，保护胰腺功能，达到预防和治疗糖尿病的功效。

3、目前，临床上广泛使用α-葡萄糖苷酶抑制剂降低餐后高血糖，使用效果最好的有阿卡波糖和米格列醇，是2型糖尿病的首选药和1型糖尿病胰岛素治疗的辅助药物。但是，两种药物均会引起患者胃肠不适。因此，在食物或药用植物中发现更高效和安全的α-葡萄糖苷酶抑制剂是2型糖尿病干预研究的热点。对于天然原材料的开发需求殷切，目前市场上还没有毛螺序草用于美白及抗氧化产品和降血糖功效产品的报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种毛螺序草活性化合物及其制备方法和应用，该毛螺序草活性化合物具有良好的美白、抗氧化和降血糖作用。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

3、一种毛螺序草活性化合物的制备方法，包括如下步骤：

4、s1、将毛螺序草样品自然风干和粉碎，得到粉末；

5、s2、无水乙醇浸泡步骤s1得到的粉末，减压浓缩，得到乙醇浸膏；

6、s3、将步骤s2得到的乙醇浸膏分散后，经过石油醚萃取后得到石油醚浸膏，剩余水层再经过乙酸乙酯萃取后再得到乙酸乙酯浸膏；

7、s4、将步骤s3得到的石油醚浸膏或乙酸乙酯浸膏，上300-400目硅胶层析柱分离，采用石油醚-乙酸乙酯流动相进行洗脱，得到多个组分，再进一步分离纯化，经洗脱程序，得到活性化合物。

8、优选的，步骤s2中，所述无水乙醇与粉末的体积比为1:1，浸泡3次，每次7天。

9、优选的，步骤s2中，减压浓缩的温度为37℃，真空度为0.1mpa，旋转速度为70rpm/min，冷凝水温度为5℃。

10、优选的，步骤s4中，分离纯化中层析柱为300-400目硅胶层析柱或sephadex lh-20凝胶柱层析中的一种或两种。

11、优选的，步骤s4中，洗脱程序中流动相为石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇、石油醚-二氯甲烷-甲醇中的一种或多种。

12、优选的，步骤s4中，石油醚浸膏上300-400目硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯流动相按50:1、20:1、10:1、1:1梯度洗脱，得到11个组分(fr.p1-fr.p11)。

13、组分fr.p3上300-400目硅胶柱层析柱分离，采用石油醚-乙酸乙酯流动相按70:1洗脱，得到4个亚组分fr.p3a-fr.p3d。亚组分fr.p3c经sephadex lh-20凝胶柱层析，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇流动相按2:1:1洗脱，得到活性化合物。

14、组分fr.p5上300-400目硅胶柱层析柱分离，采用石油醚-乙酸乙酯流动相按25:1洗脱，得到5个亚组分fr.p5a-fr.p5e。亚组分fr.p5d经sephadex lh-20凝胶柱层析，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇流动相按2:1:1洗脱，得到活性化合物。

15、组分fr.p7经sephadex lh-20凝胶柱层析，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇流动相按2:1:1洗脱，得到2个亚组分fr.p7a-fr.p7b。亚组分fr.p7b上300-400目硅胶柱层析分离，用二氯甲烷-甲醇流动相按300:1洗脱，得到5个亚组分fr.p7b1-fr.p7b5。亚组分fr.p7b2上300-400目硅胶柱层析分离，二氯甲烷-甲醇流动相按800:1洗脱，得到活性化合物。

16、优选的，乙酸乙酯浸膏上300-400目硅胶层析柱分离，采用石油醚-乙酸乙酯流动相按5:1、1:1梯度洗脱，得到11个组分(fr.e1-fr.e11)。

17、组分fr.e4上300-400目硅胶层析柱分离，采用二氯甲烷-甲醇流动相按150:1洗脱，得到2个亚组分fr.e4a-fr.e4b，组分fr.e4b经sephadex lh-20凝胶柱层析，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇流动相按2:1:1洗脱，得到活性化合物。

18、组分fr.e5上300-400目硅胶层析柱分离，石油醚-乙酸乙酯流动相按3:1、1:1梯度洗脱，得到3个亚组分fr.e5a-fr.e5c。将组分fr.e5c上300-400目硅胶层析柱分离，石油醚-乙酸乙酯流动相按4:1洗脱，得到三个亚组分fr.e5c1-fr.e5c3，亚组分fr.e5c3经sephadexlh-20凝胶柱层析，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇流动相按2:1:1洗脱，得到两个亚组分fr.e5c3a-fr.e5c3b，亚组分fr.e5c3b上300-400目硅胶层析柱分离，采用二氯甲烷-甲醇流动相按80:1洗脱，得到活性化合物。

19、上述流动相的比例均为体积比。

20、本发明还提供了一种所述毛螺序草活性化合物的制备方法制备所得毛螺序草活性化合物。

21、优选的，所述毛螺序草活性化合物的结构包括：

22、

23、本发明还提供了如所述制备方法制备所得毛螺序草活性化合物或所述的毛螺序草活性化合物在制备酪氨酸酶抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

24、本发明还提供了所述制备方法制备所得的毛螺序草活性化合物或所述的毛螺序草活性化合物在制备护肤品和降血糖药物中的应用。

25、本发明还提供了一种降血糖药物组合物，以所述制备方法制备所得的毛螺序草活性化合物或所述的毛螺序草活性化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

26、本发明提供的上述降血糖药物组合物，还可包含其他降血糖药物；也可以包含药学上可接受的辅料(优选药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂)。上述药物组合物的剂型可以是固体制剂、半固体制剂或液体制剂。

27、本发明中“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐。

28、与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：

29、本发明提供的一种毛螺序草活性化合物及其制备方法和应用，将毛螺序全草干燥、粉碎、无水乙醇浸泡、减压浓缩得到浸膏，将乙醇浸膏分散后，经过石油醚萃取后得到石油醚浸膏，剩余水层再经过乙酸乙酯萃取后再得到乙酸乙酯浸膏，对其浸膏进行洗脱得到活性化合物。将本发明的毛螺序草中的化学成分应用于制备美白及抗氧化功效的护肤品和降血糖药物，其对酪氨酸酶活性的抑制效果、对abts+自由基的清除效果和α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果也较优。本发明解决了现有美白物质存在的致癌风险以及受环境影响易发生变色从而影响美白效果的技术问题以及现有降血糖药物中产生胃肠道胀气、腹泻、多因糖类在小肠内分解及吸收障碍的问题，提供了一种简单提取方法，提取得到了具有良好的美白、抗氧化和降血糖作用的毛螺序草活性化合物。

30、下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。