一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒及其使用方法

本发明属于蛋白表达量检测与抗体孵育，具体涉及一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒及其使用方法。

背景技术：

1、蛋白质免疫印记实验，即western blotting，是一种应用于分子生物学、生物化学及免疫学中的常见实验方法。其主要分为蛋白样品制备、sds-page凝胶电泳、蛋白转印、抗体孵育及成像分析五大部分。

2、在蛋白质免疫印记实验中，往往需要检测至少2个以上的特异性蛋白质分子表达量。然而，在进行抗体孵育的过程中，目前常用的方法为：

3、1、对载有蛋白质的整张膜进行特异性抗体的孵育。其缺点是特异性的多克隆抗体或单克隆抗体价格高昂，10μl的特异性抗体价格往往高达千元，对整张膜进行抗体的孵育所需的抗体量大，经济成本高且一次只能检测一种特异性蛋白质，检测效率低下。若需要在一次实验中检测多个蛋白时，只能在每次检测完一种蛋白后，将整张膜浸入特定ph环境的抗体剥脱液中进行洗脱后从新孵育。此方法将增长实验耗时并由于剥脱液的特定ph环境将对吸附在膜上的蛋白产生未知的影响，从而导致实验数据的不准确。

4、2、根据标准预染蛋白质分子量的marker的指示，根据所需要检测的某种蛋白质分子的分子量对载有蛋白质的膜进行裁剪分割后检测多个蛋白。其缺点是对膜产生不可恢复的损坏，且若被检测的蛋白质分子因发生翻译后修饰等未知的原因使得被检测的蛋白的分子量发生小幅变化，可能由于对膜进行裁剪使得无法检测到阳性结果并无法补救。

5、同时，目前的抗体孵育条件一般采用4℃冰箱孵育过夜12-16小时。然而，冰箱作为一个较大的环境空间无法精准把控每个区域的精准温度、湿度，会使得不同批次的实验中产生大幅的实验误差，无法保证不同批次实验之间的可重复性，对实验结果造成很大程度的干扰。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒及其使用方法，解决了现有实验方案在抗体孵育中，无法同时检测多种蛋白的表达造成实验时间增长及不准确性增加或检测同时检测多种蛋白是需要将膜裁剪，造成不可恢复的损坏的问题。

2、本发明是通过以下技术方案来实现：

3、一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，包括外套盒和载膜盒，载膜盒设置在外套盒中，形成双层盒体结构；

4、外套盒中设有多个支撑板，载膜盒放置在支撑板上，支撑板用于将载膜盒撑起；

5、载膜盒的底板作为工作基板，在载膜盒内设有多个夹持件，每个夹持件中用于放置疏水隔离挡板；

6、在抗体孵育时，在工作基板上根据需要在检测薄膜上压设疏水隔离挡板，用于将检测薄膜分成多个检测区域；

7、在工作基板下方的区域内填充有保湿介质。

8、进一步，载膜盒的壳体外包覆有保温层。

9、进一步，支撑板上设有多个通水孔。

10、进一步，载膜盒的小于外套盒的宽度。

11、进一步，工作基板和疏水隔离挡板均采用疏水材质制成。

12、进一步，外套盒和载膜盒均为塑料材质制成。

13、进一步，工作基板为波浪板。

14、进一步，疏水隔离挡板放置在支撑板正上方。

15、进一步，在载膜盒内设有数字恒温温度控制器和数字湿度控制器；

16、在外套盒上对应设置有显示屏，显示屏与数字恒温温度控制器和数字湿度控制器电连接，用于显示载膜盒内的湿度和温度。

17、进一步，在外套盒内设有超声波加湿器、加热器和电子制冷片，超声波加湿器、加热器和电子制冷片均带有风扇。

18、进一步，在外套盒上设有计时模块。

19、进一步，在外套盒上设有物联网二维码。

20、本发明还公开了所述蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒的使用方法，包括以下过程：

21、在工作基板上方放置检测薄膜，根据待检测的蛋白条带数目，在夹持件中嵌入疏水隔离挡板，疏水隔离挡板压设在检测薄膜上，将检测薄膜分成多个检测区域；

22、滴加蛋白抗体，开始抗体孵育。

23、与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

24、本发明公开了一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，包括外套盒和载膜盒，载膜盒设置在外套盒中，外套盒中设有多个支撑板，载膜盒放置在支撑板上，在载膜盒内设置疏水隔离挡板，通过载膜盒与疏水隔离挡板搭配，可在所需要的特定位置对载有蛋白质的整张膜进行非破坏性的分隔。在减少抗体使用的前提下避免对膜产生不可逆转的损伤，并可以实现同时检测多个特异性蛋白分子的目的；在缩短实验周期的基础上既提升了经济效益又提高了蛋白检测的工作效率与准确性。

25、进一步，支撑板上设有多个通水孔，保证蒸馏水的流通性，可以更好地对pvdf膜进行保湿。

26、进一步，载膜盒的宽度小于外套盒的宽度，这样下方的水蒸气可以流通至上方，加快水蒸气的流通。

27、进一步，工作基板用于承载需要孵育抗体的pvdf膜，将工作基板设计为波浪板，可以减少不同分隔区域之间所添加的抗体液体的互相流动和串扰。

28、进一步，本孵育盒还整合了温湿度传感器、温控模块、加湿模块、计时模块及物联网二维码。可对智能孵育盒的温度及湿度进行及时调节，并进行精准计时，从而保证不同批次实验之间的可重复性及准确性。同时，孵育盒内部的高湿度环境可以减少蒸发，从而减少特异性抗体的使用量，提高经济效益。同时，可通过识别二维码的方式与手机实现互联，在长达12-16小时的抗体过夜孵育中，远程动态监测孵育过程的温度湿度情况，并对实验条件进行记录。

技术特征：

1.一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，包括外套盒(10)和载膜盒(13)，载膜盒(13)设置在外套盒(10)中，形成双层盒体结构；

2.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，载膜盒(13)的壳体外包覆有保温层。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，支撑板(14)上设有多个通水孔。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，载膜盒(13)的小于外套盒(10)的宽度。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，工作基板(15)和疏水隔离挡板(8)均采用疏水材质制成。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，工作基板(15)为波浪板。

7.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，疏水隔离挡板(8)放置在支撑板(14)正上方。

8.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，在载膜盒(13)内设有数字恒温温度控制器(4)和数字湿度控制器(2)；

9.根据权利要求1所述的一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，其特征在于，在外套盒(10)上设有计时模块；

10.权利要求1-9任意一项所述蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒的使用方法，其特征在于，包括以下过程：

技术总结本发明属于蛋白表达量检测与抗体孵育技术领域，涉及一种蛋白质免疫印记抗体孵育用孵育盒，包括外套盒和载膜盒，载膜盒设置在外套盒中；外套盒中设有多个支撑板，载膜盒放置在支撑板上，支撑板将载膜盒撑起；载膜盒的底板作为工作基板，在载膜盒内设有多个夹持件，每个夹持件中用于放置疏水隔离挡板；在工作基板下方的区域内填充有保湿介质。还公开了使用方法，在工作基板上方放置检测薄膜，根据待检测的蛋白条带数目，在夹持件中嵌入疏水隔离挡板，疏水隔离挡板压设在检测薄膜上，将检测薄膜分成多个检测区域；滴加蛋白检测抗体，开始抗体孵育。在减少抗体使用的前提下避免对膜产生不可逆转的损伤，并可以实现同时检测多个特异性蛋白分子的目的。技术研发人员：李亚昭,葛攀,张祥,姚博文,董子华受保护的技术使用者：西安交通大学医学院第一附属医院技术研发日：技术公布日：2024/11/18