一种具有调控皮肤细胞钙离子作用的欧洲赤松芽提取物及其制备方法与应用与流程

本发明涉及日用护肤品，尤其涉及一种具有调控皮肤细胞钙离子作用的欧洲赤松芽提取物及其制备方法与应用。

背景技术：

1、钙离子在皮肤的生理活动中扮演了非常重要的角色。作为一种独特的第二信使，钙离子在调控细胞增殖、生存、凋亡和免疫反应等生物学过程中发挥重要作用。细胞内的游离钙离子，一般保持很低的浓度。如果细胞长期处于高钙浓度状态，会激活多个炎症通路，包括nlrp3炎症小体，jak-stat通路，nf-κb通路等，引起皮肤炎症。

2、另一方面，钙离子对于皮肤的角质形成细胞具有双重调控的作用。低浓度的钙离子，能促进角质形成细胞增殖，提供足够的角质细胞；高浓度的钙离子，反而会促进细胞分化为角质层，让角质层更加牢固。

3、在皮肤细胞的细胞膜上，有控制钙离子进出细胞的通道蛋白。其中的trp系列蛋白和orai系列蛋白，能够允许钙离子从细胞外进入细胞内部。这些通道蛋白被激活之后，会引起细胞内钙离子浓度的提高。细胞膜上还有pmca蛋白，能够把细胞内的钙离子泵到细胞外。这种通道蛋白数量的增加，能够加速把细胞内的钙离子泵到细胞外部，降低细胞内部的钙离子浓度。

4、因此，有很多的化妆品原料，通过调节皮肤细胞的钙离子浓度，达到舒缓抗炎的效果。但是，这类型的化妆品原料，大部分是抑制trp系列蛋白来产生效果。由于trp系列包含从trpv1到trpv7多种蛋白，而trp抑制剂，往往只能抑制其中一个蛋白，对于其他蛋白没有抑制效果。因此使用了具有trp抑制效果的化妆品原料之后，并不能很好地抑制钙离子进入到细胞内部。如何开发具有调控钙离子功效的化妆品原料，是本领域技术人员又一个新的研发方向。

5、目前，市面上很多化妆品原料来源于松树，但是具体品种，提取部位都不是很明确，因此功效不稳定。而且市面上常见的植物提取物的工艺，涉及高温水煮、高温粉碎、有机溶剂提取等过程。高温环境，往往会破坏植物中的有效成分。有机溶剂提取，能够提取植物中不溶于水的成分，而且这些成分往往有更高的生物活性。但是有机溶剂容易造成环境污染，而且有机溶剂的残留在化妆品原料中，会造成对皮肤的伤害。如果不使用有机溶剂，仅使用水作为提取介质，又无法很好地提取溶解植物中的活性成分。

6、因此，如何提供一种能有效提取植物中活性成分的方法，并且该方法对环境友好，无污染，是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种具有调控皮肤细胞钙离子作用的欧洲赤松芽提取物及其制备方法与应用。本发明首次发现了欧洲赤松芽提取物具有调控皮肤细胞钙离子的功效，因此应用在化妆品中，具有抗炎，舒缓，修复屏障的功效。

2、本发明的目的是提供一种化妆品原料，能够通过增加皮肤细胞的pmca的蛋白表达，从而在皮肤受到刺激的时候，能够降低皮肤细胞内部的钙离子浓度，达到抗炎，舒缓，修复皮肤屏障的目的。

3、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

4、本发明提供了一种欧洲赤松芽提取物的制备方法，将欧洲赤松芽、水和混合酶混合酶解、灭酶后得到欧洲赤松芽提取物；所述混合酶为：纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、sq-so28提取酶、sq-if27提取酶和sq-id6提取酶。

5、赤松在中国，欧洲，北美都有分布，我们精选了赤松品种，欧洲赤松pinussylvestris，生长于法国西南部nouvelle-aquitaine地区的欧洲赤松，并且进一步，精选了欧洲赤松的芽，进行提取。

6、优选的，所述欧洲赤松芽、水和混合酶的质量比为1～2:8～9：0.1～0.5。

7、优选的，所述纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、sq-so28提取酶、sq-if27提取酶和sq-id6提取酶的质量比为：1～2:1～2:1～2:1～2:1～1.5:1～1.5:1～1.5；

8、优选的，所述纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、sq-so28提取酶、sq-if27提取酶和sq-id6提取酶的酶活为：纤维素酶2000～4000u/ml、半纤维素酶2000～4000u/ml、果胶酶1000～1500u/ml、蛋白酶1000～1500u/ml、sq-so28提取酶500～800u/ml、sq-if27提取酶500～800u/ml、sq-id6提取酶500～800u/ml。

9、优选的，所述酶解的温度为25～30℃；所述酶解的时间为3～6h。

10、优选的，所述灭酶的温度为50～60℃，灭酶的时间为30～60min。

11、优选的，在灭酶后还包括过滤的步骤；所述过滤的方法为：依次使用直径为0.5μm和0.22μm的微孔膜进行过滤。

12、本发明还提供了所述的一种欧洲赤松芽提取物的制备方法制得的欧洲赤松芽提取物。

13、本发明还提供了所述的欧洲赤松芽提取物在制备护肤品中的应用。

14、优选的，所述护肤品具有抗炎和/或保持细胞内钙离子平衡的功效。

15、优选的，所述护肤品为眼霜、乳液、防晒产品、遮瑕产品、化妆水或精华液。

16、与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

17、本发明所制备的欧洲赤松芽提取物，能增加pmca蛋白，并且不依赖于trp系列蛋白，因此，无论是因为任何trp蛋白被激活而产生的钙离子内流，欧洲赤松芽提取物都可以把细胞内的钙离子排出细胞，降低细胞内的钙离子浓度。应用在化妆品中，具有抗炎，舒缓，修复屏障的功效。

18、本发明在欧洲赤松芽的提取过程中使用了低温复合酶法提取工艺，复合酶能够在低温的条件下，破坏植物细胞的细胞壁，释放活性成分，避免高温对活性成分的破坏。也会使难溶于水的成分离子化和糖苷化，能够溶解在水里，因此可以用纯水提取，而不需要有机溶剂。

19、本发明所使用的纤维素酶，半纤维素酶，果胶酶，都可以用于分解植物细胞的细胞壁，释放细胞内的活性成分。由于欧洲赤松芽的细胞的特性，如果只使用这三种酶的其中一种，或者两种，细胞壁没有被完全破坏。那么在过滤后的提取液，颜色透明澄清，说明可溶物没有释放出来。并且在第一次过滤的微孔膜上，有大量的残渣。因此，需要这三种酶一起组合，用来分解细胞壁。

20、欧洲赤松芽的细胞内的活性成分，例如多酚，黄酮，多糖，在细胞内会与蛋白结合，形成复合物。如果不使用蛋白酶，一方面，活性成分无法从蛋白复合物上面脱离，无法释放溶解；另一方面，会造成最终的提取液容易出现沉淀。本发明经过测试，如果不使用蛋白酶，那么在过滤后的提取液，颜色较淡，说明活性物质较少。提取液在静置2小时后，开始出现絮状沉淀。并且在第二次过滤的微孔膜上，有较多的残渣。因此，需要在复合酶组合中，加入蛋白酶，促进活性成分的释放。

21、欧洲赤松芽的细胞内的活性成分，很多成分并不能水溶。因此，本发明精选了3种提取酶sq-so28提取酶，sq-if27提取酶，sq-id6提取酶。这三种提取酶，能够利用植物细胞内本身的酸根离子，钠离子，钾离子，葡萄糖，对不溶的多酚、黄酮成分，进行离子化和糖苷化，形成能够溶于水的状态。因此不需要有机溶剂，也能够获得性状稳定的提取液。

22、本发明使用上述几种酶的组合，对欧洲赤松芽进行提取，获得的提取液，具备优异的生物活性，可以作为化妆品原料，用于提高皮肤细胞的pmca蛋白的含量。

23、本发明在得到精制提取液后加入丁二醇作为稳定剂，可以在提取物后续的运输储存过程中，抑制提取物中微生物的生长，并且能保持提取物在高温和低温环境下的稳定性。